Xây dựng quy trình kỹ thuật real time PCR để khảo sát sự biểu hiện gen MMP12 trong tế bào thu từ mẫu đàm của bệnh nhân bị bệnh phổi tắc nghẽn mạn tính

Matrix metalloproteinase (MMPs) có vai trò quan trọng trong điều hòa ở bệnh phổi tắc nghẽn mạn tính (COPD), nó phá hủy protein trên thành phế nang dẫn đến bệnh khí phế thũng. Bài viết trình bày xây dựng được quy trình ứng dụng kỹ thuật real-time PCR định lượng tương đối sự biểu hiện gen MMP12 trong mẫu đàm.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng quy trình kỹ thuật real time PCR để khảo sát sự biểu hiện gen MMP12 trong tế bào thu từ mẫu đàm của bệnh nhân bị bệnh phổi tắc nghẽn mạn tínhNghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số 2 * 2018 XÂY DỰNG QUY TRÌNH KỸ THUẬT REAL-TIME PCR ĐỂ KHẢO SÁT SỰ BIỂU HIỆN GEN MMP12 TRONG TẾ BÀO THU TỪ MẪU ĐÀM CỦA BỆNH NHÂN BỊ BỆNH PHỔI TẮC NGHẼN MẠN TÍNH Nguyễn Thế Vinh*, Nguyễn Công Trung**, Hoàng Anh Vũ*TÓM TẮT Mở đầu: Matrix metalloproteinase (MMPs) có vai trò quan trọng trong điều hòa ở bệnh phổi tắc nghẽn mạntính (COPD), nó phá hủy protein trên thành phế nang dẫn đến bệnh khí phế thũng. MMP12 là một phần trongcụm gen MMP nằm trên NST11q22.3. MMP-12 đóng một vai trò quan trọng trong mô hình động vật bị bệnhkhí thũng do thuốc lá. Một số nghiên cứu cho thấy sự biểu hiện của MMP12 tăng lên trong đại thực bào trongphế nang ở những người hút thuốc, và mức độ MMP12 tương quan nghịch với chức năng phổi. Việc ngăn cảnsự hoạt động MMP12 ở những bệnh nhân COPD có thể ngăn ngừa sự phát triển khí thũng. Nghiên cứu này làmột trong những nghiên cứu đầu tiên tại Việt Nam đánh giá mối tương quan giữa biểu hiện gen MMP12 vàCOPD bằng phương pháp real-time PCR. Mục tiêu: Xây dựng được quy trình ứng dụng kỹ thuật real-time PCR định lượng tương đối sự biểu hiệngen MMP12 trong mẫu đàm. Đối tượng và phương pháp: Mẫu đàm thu nhận từ 2 nhóm đối tượng (bệnh nhân COPD trên 60 tuổi vàngười khỏe mạnh trên 60 tuổi). Xây dựng và chuẩn hóa quy trình real-time PCR cho sản phẩm cDNA của 2 genMMP12 và β-actin. Kết quả: Xây dựng quy trình real-time PCR cho sản phẩm cDNA của 2 gen MMP12 và β-actin với hiệusuất phản ứng trên 90%, tạo sản phẩm đặc hiệu, hệ số tương quan R2>0,99. Định lượng tương đối được sự biểuhiện MMP12 trong mẫu đàm từ 2 nhóm đối tượng nghiên cứu. Kết luận: Nghiên cứu đã hoàn thiện quy trình và ứng dụng thành công kỹ thuật real-time trong khảo sátbiểu hiện gen MMP12 từ mẫu đàm. Từ khóa: COPD, MMP12, real-time PCR.ABSTRACTDEVELOP A PROTOCOL FOR ASSESSING MMP12 EXPRESSION IN SPUTUM CELLS OF PATIENTS WITH CHRONIC OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASE BY REAL-TIME PCR. Nguyen The Vinh, Nguyen Cong Trung, Hoang Anh Vu * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 22 - No 2- 2018: 47 - 53 Background: Matrix metalloproteinase (MMPs) plays an important role in regulating Chronic ObstructivePulmonary disease (COPD), it damages proteins located on alveolus to lead to emphysema. MMP12 is a part ofMMPs located on chromosome 11q22.3. MMP12 appears to play a consistent role in cigarette smoke-inducedanimal models of emphysema. Some studies have shown that the increasing expression of MMP12 in alveolarmacrophages in smokers, and that MMP12 level has been inversely related to lung function. Prevention ofMMP12 activity in patients with COPD may prevent emphysema. Our study is one of the first in Vietnam to* Trung tâm Y Sinh học Phân tử, Đại học Y Dược TPHCM Bệnh viện Nguyễn Trãi **Tác giả liên lạc: CN.Nguyễn Thế Vinh, ĐT: 0935827668 Email: vinhnguyen29391@gmail.com48Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số 2 * 2018 Nghiên cứu Y họcevaluate the correlation between MMP12 expression and COPD condition by real-time PCR. Object: To develop a protocol for relatively quantification MMP12 expression in sputum by real-time PCR. Method: Sputums were obtained from two groups (patients with COPD over 60 years and healthy peopleover 60 years). Efficiently developing and standardizing real-time PCR for cDNA products of MMP12 and β-actin genes. Results: Developing real-time PCR for cDNA products of MMP12 and β-actin genes with reactionefficiency more than 90%, creating specific products, and correlation factor R2>0.99. Measuring relatively theexpression of MMP12 gene in sputum samples from 2 object groups. Conclusion: The research has completed the protocol and successful application of real-time techniques inexamining the MMP12 gene expression from the sputum. Keywords: COPD, MMP12, real-time PCR.ĐẶT VẤN ĐỀ MMP12 là một phần trong cụm gen MMP Bệnh phổi tắc nghẽn mạn tính (COPD - nằm trên NST11q22.3. MMP-12 đóng một vai tròChronic obstructive pulmonary disease) là một quan trọng trong mô hình động vật bị bệnh khíthuật ngữ chung để chỉ các bệnh phổi mạn tính thũng do thuốc lá. Sự biểu hiện của MMP12 tănggây ra sự tắc nghẽn trong đường hô hấp. Những lên trong đại thực bào trong phế nang ở nhữngtriệu chứng phổ biến nhất của COPD là khó thở, người hút thuốc, nồng độ protein và hoạt tínhcó nhiều đàm, và ho dai dẳng. Theo WHO ước enzyme của MMP12 đã được báo cáo có tăng lêntính vào năm 2004, có 64 triệu người mắc COPD trong mẫu đàm của những bệnh nhân COPD sovà 3 triệu người chết do COPD. Who dự đoán với những hút thuốc không có bệnh về đườngrằng COPD sẽ trở thành nguyên nhân gây tử hô hấp, mà ở những người đó mức độ MMP12vong đứng hàng thứ ba trên giới vào năm 2030. tương quan nghịch với chức năng phổi(1). Matrix metalloproteinase (MMPs) có vai trò Theo nghiên cứu của Chaudhuri R và cộngquan trọng trong điều hòa ở COPD, nó phá hủy sự, nồng độ biểu hiện MMP12 trong mẫu đàmprotein trên thành phế nang dẫn đến bệnh khí của những bệnh nhân mắc COPD và nhữngphế thũng(3). Những protein thuộc họ người hút thuốc bị hen suyễn cao hơn ngườimetalloproteinase chất nền liên quan đến quá bình thường không hút thuố ...