Xây dựng quy trình kỹ thuật xác định đột biến Val617Phe (V617F) của gene JAK2 tại Bệnh viện Trường Đại học Y - Dược Huế

Bài viết trình bày kết luận: Thiết lập được quy trình xác định đột biến JAK2 V617F bằng hai phương pháp PCR đặc hiệu allele và PCR-RFLP, trong đó kỹ thuật PCR đặc hiệu allele có nhiều ưu điểm hơn. Tỷ lệ đột biến V617F của gene JAK2 trong nhóm bệnh nhân là 61,3%.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng quy trình kỹ thuật xác định đột biến Val617Phe (V617F) của gene JAK2 tại Bệnh viện Trường Đại học Y - Dược HuếTạp chí Y Dược Huế - Trường Đại học Y - Dược, Đại học Huế - Số 1, tập 14/2024Xây dựng quy trình kỹ thuật xác định đột biến Val617Phe (V617F) củageneJAK2tại Bệnh viện Trường Đại học Y - Dược Huế Nguyễn Thị Mai Ngân1, Đoàn Thị Duyên Anh1, Lê Phan Tưởng Quỳnh1, Ngô Thị Diệu Hương1, Nguyễn Quỳnh Châu1, Võ Tự Hiếu1, Đặng Trần Hữu Hiếu2, Tôn Thất Minh Trí2,Hà Thị Minh Thi1* (1) Trường Đại học Y - Dược, Đại học Huế (2) Bệnh viện Trung ương Huế Tóm tắt Đặt vấn đề: Đột biến JAK2 V617F là một trong những tiêu chí chính được sử dụng để chẩn đoán bệnh lýtăng sinh tuỷ ác tính (Myeloproliferative neoplasms - MPNs). Nghiên cứu này nhằm mục tiêu sau: (1) Thiếtlập và so sánh các quy trình chẩn đoán đột biến V617F gene JAK2 bằng các kỹ thuật PCR đặc hiệu allele vàPCR-RFLP; (2) Bước đầu xác định tỷ lệ đột biến V617F của gene JAK2 trong nhóm bệnh nhân tăng sinh tuỷác tính. Đối tượng và phương pháp: Tách chiết DNA từ máu ngoại vi của 31 bệnh nhân được bác sĩ lâm sàngtheo dõi chẩn đoán MPNs và 10 người khỏe mạnh. Xác định đột biến V617F gene JAK2 bằng kỹ thuật PCRđặc hiệu allele và PCR-RFLP. Giải trình tự Sanger ngẫu nhiên 15% mẫu để đối chiếu. Kết quả: Nhiệt độ gắnmồi tối ưu cho phản ứng PCR đặc hiệu allele là 55oC. Phản ứng cắt trong kỹ thuật PCR-RFLP sử dụng 300 ngsản phẩm PCR. Tất cả các mẫu được kiểm chứng bằng giải trình Sanger đều cho kết quả tương đồng. Có sựphù hợp hoàn toàn trong kết quả phát hiện đột biến giữa PCR đặc hiệu allele và PCR-RFLP. Kết luận: Thiết lậpđược quy trình xác định đột biến JAK2 V617F bằng hai phương pháp PCR đặc hiệu allele và PCR-RFLP, trongđó kỹ thuật PCR đặc hiệu allele có nhiều ưu điểm hơn. Tỷ lệ đột biến V617F của gene JAK2 trong nhóm bệnhnhân là 61,3%. Từ khoá: MPNs, V617F, JAK2, PCR đặc hiệu allele, PCR-RFLP.Determining the JAK2 V617F mutation at Hue University of Medicineand Pharmacy Hospital Nguyen Thi Mai Ngan1, Doan Thi Duyen Anh1, Le Phan Tuong Quynh1, Ngo Thi Dieu Huong1, Nguyen Quynh Chau1, Vo Tu Hieu1, Dang Tran Huu Hieu2, Ton That Minh Tri2, Ha Thi Minh Thi1 (1) University of Medicine and Pharmacy, Hue University (2) Hue Central Hospital Abstract Background: JAK2 V617F mutation is one of the major criteria in diagnosing MPNs. This study aimedto: (1) Establish a procedure and compare Allele specific-PCR and PCR-RFLP techniques in identifying JAK2V617F mutation; (2) Primarily evaluate the prevalence of V617F mutation of JAK2 gene in patients withMPNs. Materials and methods: DNA extraction was isolated from peripheral blood of 31 patients with MPNsfollowed by clinicians and 10 healthy individuals. Determining V617F mutation of JAK2 gene by AS-PCR andPCR-RFLP techniques. Sanger sequencing randomly 15% of samples for comparison. Results: The optimalannealing temperature for AS-PCR is 55oC. Conditions of restriction digest in PCR-RFLP uses 300 ng of PCRproduct. All samples identified by AS-PCR and PCR-RFLP showed similar results. Conclusion: Establisheda procedure to identify the V617F mutation in JAK2 gene by allele-specific PCR and PCR-RFLP, in which theAS-PCR technique showed more advantages. The frequency of V617F mutation of JAK2 gene in patientswas 61.3%. Keywords: MPNs, V617F, JAK2, allele-specific PCR, PCR-RFLP. 1. ĐẶT VẤN ĐỀ tạo máu [1]. Từ năm 2008, Tổ chức Y tế thế giới đã Protein JAK2 là một enzyme tyrosine kinase bào xem đột biến gene JAK2 là một trong những tiêutương, đóng vai trò quan trọng trong dẫn truyền tín chuẩn chẩn đoán chính của nhóm bệnh lý tăng sinhhiệu từ các receptor của yếu tố tăng trưởng tế bào tuỷ ác tính (Myeloproliferative neoplasm - MPNs). Tác giả liên hệ: Hà Thị Minh Thi, email: htmthi@huemed-univ.edu.vn; htmthi@hueuni.edu.vn DOI: 10.34071/jmp.2024.1.13 Ngày nhận bài: 22/11/2023; Ngày đồng ý đăng: 15/2/2024; Ngày xuất bản: 26/2/2024 92 HUE JOURNAL OF MEDICINE AND PHARMACY ISSN 1859-3836 Tạp chí Y Dược Huế - Trường Đại học Y - Dược, Đại học Huế - Số 1, tập 14/2024Phiên bản mới nhất (năm 2016) của Tổ chức Y tế thế Trung ương Huế, từ tháng 4 năm 2022 đến tháng 8giới xếp nhóm bệnh lý này gồm có bảy bệnh, trong năm 2023.đó ba bệnh liên quan đột biến các gene JAK2/CALR/ 2.2. Phương pháp nghiên cứuMPL, gồm đa hồng cầu, tăng tiểu cầu nguyên phát, 2.2.1. Thiết kế nghiên cứuxơ tuỷ vô căn. Đột biến Val617Phe (V617F) được Nghiên cứu mô tả cắt ngang.phát hiện trong phần lớn (97%) bệnh nhân đa hồng Các thí nghiệm sinh học phân tử được thựccầu. Trong các bệnh tăng tiểu cầu nguyên phát và hiện tại Bộ môn Di truyền Y học, Trường Đại họcxơ tuỷ vô căn, tỷ lệ đột biến gene này là 50% [2, 3]. Y - Dược, Đại học Huế. Về phương diện chẩn đoán, đột biến V617F có 2.2.2. Tách chiết DNAthể được xác định bằng các kỹ thuật sinh học phân tử - DNA được tách chiết từ mẫu máu tĩnh mạchnhư PCR đặc hiệu allele, PCR-RFLP, hoặc giải trình tự ngoại vi (chống đông EDTA) bằng bộ hoá chất WizardSanger. Tuy nhiên, theo tác giả Frantz và Didone, mặc Genomic DNA Purification (Promega). Quy trình táchdù giải trình tự Sanger được xem là tiêu chuẩn vàng chiết được thực hiện th ...