Xây dựng quy trình realtime-PCR Taqman probe phát hiện alen HLA-B*1502 trước khi điều trị carbamazepine trên bệnh nhân động kinh

Carbamazepine (CBZ) thường được sử dụng trong điều trị động kinh cục bộ và đau dây thần kinh V. Bài viết nghiên cứu qui trình Realtime PCR Taqman probe phát hiện alen HLA-B*1502 trước khi điều trị Carbamazepine (CBZ) trên bệnh nhân động kinh.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng quy trình realtime-PCR Taqman probe phát hiện alen HLA-B*1502 trước khi điều trị carbamazepine trên bệnh nhân động kinhNghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số 2 * 2018 XÂY DỰNG QUY TRÌNH REALTIME-PCR TAQMAN PROBE PHÁT HIỆN ALEN HLA-B*1502 TRƯỚC KHI ĐIỀU TRỊ CARBAMAZEPINE TRÊN BỆNH NHÂN ĐỘNG KINH Nguyễn Thành Phát*, Lê Thái Khương*, Đỗ Thị Thanh Thủy*, Trần Hữu Tâm**TÓM TẮT Mở đầu: Carbamazepine (CBZ) thường được sử dụng trong điều trị động kinh cục bộ và đau dây thần kinhV. Nhiều nghiên cứu cho thấy bệnh nhân châu Á khi điều trị với CBZ thường có nguy cơ cao mắc các phản ứngnghiêm trọng trên da như hội chứng Steven-Johnson (SJS) hay TEN, nguyên nhân chủ yếu là do sự hiện diện củaalen HLAB*1502. Chính vì vậy năm 2007, FDA của Mỹ đã đưa ra khuyến cáo trong việc xác định kiểu alenHLA-B*1502 trên bệnh nhân châu Á trước khi tiến hành điều trị với CBZ. Hiện nay, ở Việt Nam việc xác địnhkiểu alen HLA-B*1502 chủ yếu dựa trên các bộ kit thương mại hoá của các công ty nước ngoài với giá thànhcao.Vì vậy việc xây dựng một qui trình hay tối ưu hóa một qui trình Realtime PCR Taqman probe phát hiện alenHLA-B*1502 trước khi điều trị Carbamazepine (CBZ) trên bệnh nhân động kinh là cần thiết. Mục tiêu: Nghiên cứu qui trình Realtime PCR Taqman probe phát hiện alen HLA-B*1502 trước khi điều trịCarbamazepine (CBZ) trên bệnh nhân động kinh. Đối tượng và phương pháp: Trong thời gian từ tháng 01/2017 đến tháng 09/2017, chúng tôi sử dụng mẫuADN được tách chiết từ 124 mẫu máu của 124 bệnh nhân đã được chẩn đoán động kinh tại bệnh viện Đại học Ydược TP.HCM và bệnh viện Chuyên khoa ngoại thần kinh Quốc tế và đã được phát hiện alen HLA-B*15:02 bằngPG1502 Detection Kit, Pharmigene, Đài Loan để tối ưu hóa qui trình Realtime PCR Taqman probe phát hiện alenHLA-B*1502. 124 mẫu máu này bao gồm 74 mẫu có alen HLA-B*1502 dương tính và 50 mẫu HLA-B*15:02 âmtính. So sánh sự tương đồng kết quả alen HLA-B*1502 của bộ kit PG1502 Detection với kết quả trình RealtimePCR Taqman probe mà chúng tôi tối ưu hóa. Kết quả: HLA-B*15:02 realtime PCR Taqman probe được tối ưu hóa và xác định được 73 trường hợp HLA-B*15:02 dương tính, 50 trường hợp HLA-B*15:02 âm tính và một mẫu mang alen HLA-B*18. So sánh với kếtquả của PG1502 Detection Kit, Pharmigene, sự tương đồng giữa 2 phương pháp là 99,2%. Kết luận: Quy trình real-time PCR sử dụng Taqman® probe được tối ưu hóa và có thể sử dụng để xác địnhalen HLA-B*15:02 trên bệnh nhân động kinh giúp phát hiện các bệnh nhân có nguy cơ cao bị các phản ứng danghiêm trọng như SJS/TEN khi sử dụng CBZ. Từ khóa: HLA; Hội chứng Stevens-Johnson; Hoại tử da gây độc (TEN); carbamazepine, real-time PCR.ABSTRACT OPTIMIZATION OF TAQMAN REAL-TIME PCR FOR DETECTION OF HLA-B*15:02 ALLELE BEFORE CARBAMAZEPINE TREATMENT FOR EPILEPSY Nguyen Thanh Phat, Lê Thai Khương, Do Thi Thanh Thuy, Tran Huu Tam * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 22 ‐ No 2‐ 2018: 144‐ 151 Introduction: Carbamazepine (CBZ) is often used in the management of localized epilepsy and trigeminalneuralgia. Many studies have shown that Asian patients treated with CBZ are at increased risk for severe* Bộ môn Hóa Sinh và Trung tâm Y Sinh học phân tử Đại học Y Dược TP. HCM,** Trung tâm Kiểm chuẩn xét nghiệm TP.HCMTác giả liên lạc: PGS. TS. Đỗ Thị Thanh Thủy ĐT: 0908487425 Email: thuyprenatal@gmail.com144Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số 2 * 2018 Nghiên cứu Y họcreactions on skin such as Steven-Johnson syndrome (SJS) or TEN, mainly due to the presence of HLAB * 1502.Thus, in 2007, the US FDA made a recommendation to determine the type of HLA-B * 1502 allele in Asianpatients before initiating CBZ treatment. Currently, in Vietnam the identification of the HLA-B * 1502 allelepattern is based on commercially available kits from foreign companies at high cost. Therefore, the construction ofa process or optimization of a The Real-time PCR Taqman probe detection of alleles of HLA-B * 1502 prior to CBZtreatment in epileptic patients is needed. Objective: Optimization of Taqman Real-time PCR for detection of HLA-B * 1502 allele prior to CBZtreatment in epilepsy patients. Method: From January 2017 to September 2017, we used DNA samples extracted from 124 blood samplesfrom 124 patients who had been diagnosed with epilepsy at Medical University Hospital, HCMC andInternational Neurology Clinic and their genotypes of HLA-B * 15:02 allele have known by PG1502 DetectionKit, Pharmigene, Taiwan to optimize the our Taqman Real-time PCR for HLA- B * 1502. These 124 samplesincluded 74 samples with HLA-B * 1502 positive and 50 samples with HLA-B * 15: 02 negative. Comparison theresult of HLA-B * 1502 allele detection by PG1502 de ...