Bài giảng Định lượng E.coli giả định bằng phương pháp MPN

Nội dung bài giảng nhằm giúp học viên trình bày được nguyên lý của phương pháp MPN; phạm vi áp dụng, nguyên tắc và các bước tiến hành định lượng E.coli giả định trong môi trường nước bằng phương pháp MPN; nhận định được kết quả.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bài giảng Định lượng E.coli giả định bằng phương pháp MPNĐỊNHLƯỢNGE.COLIGIẢĐỊNH BẰNGPHƯƠNGPHÁPMPN Phạm Thị Vinh Hoa Phòng Xét nghiệm trung tâm TẠISAOCẦNKIỂMTRAESCHERICHIACOLI?US Environmental Protection Agency The EPA has determined that E. coli are one of the best indicators for the presence of potentially pathogenic bacteria. Because E. coli monitoring does not measure the actual pathogens, the assessment is not foolproof, however, it is a good approach for assessing the likelihood of risks to human health. Monitoring for these indicator organisms is an easy and economical method for citizens or professionals to assess health risks due to bacterial contamination of surface waters. http://www.usawaterquality.org/volunteer/ecoli/june2008manual/chpt2_ecoli.pdfIndicators of microbial water quality: • General (process) microbial indicators • Faecal indicators (such as E. coli) • Index organisms and model organisms. Escherichia coli (E. coli): Thermophilic coliforms that produce indole from tryptophan, but also defined now as coliforms able to produce β-glucuronidase (although taxonomically up to 10% of environmental E. coli may not). Most appropriate group of coliforms to indicate faecal pollution from warm-blooded animals. http://www.who.int/water_sanitation_health/dwq/iwachap13.pdf ESCHERICHIACOLI Hìnhque,Gramâm, khôngsinhbàotử Lênmenđườnglactose sinhhơivàacidở44oC SựcómặtcủaE.coli khẳngđịnhsựnhiễm khuẩntừphânhttp://en.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli TÀILIỆUTHAMKHẢOTCVN5999:1995(ISO5667/10:1992): Chấtlượngnước.Lấymẫu.HướngdẫnlấymẫunướcthảiTCVN8880:2011(ISO19458:2006): Chấtlượngnước.LấymẫuđểphântíchvisinhvậtTCVN61872:1996(ISO9308/2:1990): Chấtlượngnước.Pháthiệnvàđếmvikhuẩncoliform,vikhuẩn coliformchịunhiệtvàescherichiacoligiảđịnh.Phần2:Phương phápnhiềuống(sốcóxácsuấtcaonhất) MỤCTIÊUHỌCTẬPSaukhihọc,họcviêncókhảnăng: Trình bày được nguyên lý của phương phápMPN Trình bày được phạm vi áp dụng, nguyên tắc và các bước tiến hành định lượng E.coli giả định trong môi trường nước bằngphươngphápMPN. Nhậnđịnhđượckếtquả NỘIDUNGBÀIGIẢNG1.Phạmviápdụng&nguyênlý2.PhươngphápMPN3.Chuẩnbịthínghiệm4.Cácbướctiếnhành5.Đọckếtquả PHẠMVIÁPDỤNG&NGUYÊNLÝPhạmviápdụng Đếm số lượng coliform, coliform chịunhiệt,và E.coligiảđịnhtrong mọiloạinước,kểcảnướccóvật chấtlơlửng.NguyênlýE.coli:Địnhlượngvisinhvật lênmenlactosesinhkhívàtạothànhIndol từtryptophankhinuôicấytrongcanhthangtăngsinhchọnlọc ở 44oC bằngphươngpháptínhsốcóxácsuấtlớnnhất(MostProbablenumber MPN) PHƯƠNGPHÁPMPN Nồng độ và độ pha loãng mẫu nồng độ 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7độ pha loãng 101 102 103 104 105 106 107 PHƯƠNGPHÁPMPNNguyêntắc: XácsuấtthốngkêsựphânbốVSVtrongcácđộ phaloãngkhácnhaucủamẫu Mỗiđộphaloãngđượclặplạinhiềulần(3 lần) Cácđộphaloãngđượcchọnlựasaochotrong cáclầnlặplạicómộtsốlầndươngtínhvàâm tính Sốlầndươngtínhđượcghinhậnvàsosánhvới PHƯƠNGPHÁPMPNĐặcđiểm: VSVmụctiêuphảicónhữngbiểuhiệnđặctrưng trênmôitrườngnuôicấy:sinhhơi,đổimàumôi trường... ChophépđịnhlượngđượcmậtđộVSVthấp trongthểtíchmẫulớnHaihệthốngMPN: Hệthống9ống Hệthống15ống PHƯƠNGPHÁPMPNHệ thống 9 ống Hệ thống 15 ống 10 ml môi trườngPHƯƠNGPHÁPMPN Các bước tiến hành 1. Chuẩn bị các ống nghiệm có chứa môi trường thích hợp cho sự tăng trưởng của đối tượng VSV cần định lượngPHƯƠNGPHÁPMPN Các bước tiến hành 2. Cấy một thể tích chính xác dung dịch mẫu ở 3 nồng độ pha loãng bậc 10 liên tiếpPHƯƠNGPHÁPMPN Các bước tiến hành 3. Đem ống nghiệm ủ ở điều kiện thích hợp PHƯƠNGPHÁPMPN Các bước tiến hành Sự 4. Quan sát các biểu đổi ...