Báo cáo nông nghiệp: KHảO SáT NGUồN GEN TRÊN CÂY LúA MANG GEN KHáNG BệNH BạC Lá BằNG CHỉ THị PHÂN Tử DNA

Bệnh bạc lá do vi khuẩn Xanthomonas Oryzae pv. Oryzae là một bệnh nguy hiểm làm giảm năng suất lúa ở Việt Nam. Nguyồn vật liệu di truyền sẵn có đóng vai trò quan trọng trong việc tạo ra nguồn giống chống chịu bệnh này.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Báo cáo nông nghiệp: " KHảO SáT NGUồN GEN TRÊN CÂY LúA MANG GEN KHáNG BệNH BạC Lá BằNG CHỉ THị PHÂN Tử DNA" Tạp chí Khoa học và Phát triển 2010: Tập 8, số 1: 9 - 16 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KH¶O S¸T NGUåN GEN TR£N C¢Y LóA MANG GEN KH¸NG BÖNH B¹C L¸ B»NG CHØ THÞ PH¢N Tö DNA Application of DNA Marker to Evaluated Genetic Resourses for Rice Selecting with Hight Yield and Bacterial Leaf Blight Resistant Lã Vinh Hoa1,2, Tống Văn Hải2, Phan Hữu Tôn2, Trần Minh Thu2, Li Yang Rui1 1 Viện Khoa học Nông nghiệp Quảng Tây Trung Quốc 2 Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Địa chỉ email tác giả liên lạc: lvronghuaqq@126.com TÓM TẮT Bệnh bạc lá do vi khuẩn Xanthomonas Oryzae pv. Oryzae là một bệnh nguy hiểm làm giảm năng suất lúa ở Việt Nam. Nguyồn vật liệu di truyền sẵn có đóng vai trò quan trọng trong việc tạo ra nguồn giống chống chịu bệnh này. Trong nghiên cứu này, chúng tôi ứng dụng chỉ thị phân tử DNA điều tra 150 mẫu giống lúa, phát hiện 51 mẫu giống chứa gen Xa4, 13 mẫu giống chứa gen Xa7, 2 mẫu giống chứa gen xa5, 2 mẫu giống chứa cả Xa7 và xa5, 2 mẫu giống chứa cả Xa4 và Xa7, chọn ra được 10 mẫu giống vừa có khả năng kháng bệnh, vừa có tiềm năng cho năng suất cao. Từ khoá: Bệnh bạc lá, DNA, PCR, Xa4, xa5, Xa7, Xanthomonas Oryzae pv. Oryzae. SUMMARY Bacterial leaf blight disease caused by Xanthomonas Oryzae pv. Oryzae is one of the most severe diseases that causes yield loss in rice in Vietnam. Availability of genetic resources plays an important role in developing durable resistant varieties. In this study, we used DNA markers Npb181, P3 and RG556 to identify Xa4, Xa7 and xa5 genes, respectively, present in 150 rice accessions. Two varieties were identified to carry xa5 gene, 13 varieties with Xa7 gene, 4 varieties with both xa5 and Xa7 genes. Ten varieties exhibit both resistance and high yield potential. These materials can be used for rice breeding program with high yield and bacterial leaf blight resistance. Key words: Bacterial leaf blight, DNA, Xanthomonas Oryzae pv. Oryzae, Xa4, xa5, Xa7, PCR. gen kh¸ng th−êng cã mÆt trªn c¸c gièng lóa 1. më ®Çu ®Þa ph−¬ng ë ViÖt Nam. C¸c gen kh¸ng xa5, BÖnh b¹c l¸ do vi khuÈn Xanthomonas Xa7, Xa21 lμ c¸c gen cã ý nghÜa quan träng Oryzae pv. Oryzae lμ mét bÖnh ®Æc biÖt nguy trong viÖc chän t¹o gièng lóa kh¸ng bÖnh, hiÓm ®èi víi c©y lóa. BÖnh lμm gi¶m n¨ng bëi chóng cã kh¶ n¨ng kh¸ng ®−îc hÇu hÕt suÊt tõ 10% - 80%, thËm chÝ mÊt tr¾ng. Cho c¸c chñng vi khuÈn phæ biÕn cña ViÖt Nam ®Õn nay, biÖn ph¸p sö dông gièng kh¸ng (Bïi Träng Thñy vμ Phan H÷u T«n, 2004). bÖnh ®−îc coi lμ h−íng phßng chèng bÖnh Trong nghiªn cøu nμy, c¸c mÉu gièng b¹c l¸ hiÖu qu¶ nhÊt, c¶ vÒ mÆt kinh tÕ vμ ®Þa ph−¬ng ®−îc thu thËp vμ b¶o qu¶n t¹i Bé m«i tr−êng. m«n C«ng nghÖ sinh häc øng dông ®· chän HiÖn nay, ®· cã 30 gen kh¸ng ®−îc ph¸t ra ®−îc nh÷ng mÉu gièng cã kh¶ n¨ng hiÖn, trong ®ã cã 21 gen tréi vμ 9 gen lÆn kh¸ng, mang gen kh¸ng hiÖu qu¶ (Xa4, xa5, Xa7) vμ cã nh÷ng ®Æc ®iÓm n«ng sinh häc (Xu, 2007). Tõ c¸c kÕt qu¶ nghiªn cøu trong tèt, nh»m phôc vô ch−¬ng tr×nh chän t¹o n−íc, b−íc ®Çu cã thÓ kh¼ng ®Þnh c¸c gen gièng kh¸ng b¹c l¸, n¨ng suÊt cao. Xa3, Xa4, xa5, Xa7, Xa10, Xa13, Xa14 lμ c¸c 9 Khảo sát nguồn gen trên cây lúa mang gen kháng bệnh bạc lá bằng chỉ thị phân tử DNA 2. VËT LIÖU Vμ PH¦¥NG PH¸P 2.2.2. Quy tr×nh t¸ch chiÕt DNA NGHI£N CøU Quy tr×nh t¸ch chiÕt DNA ®−îc tiÕn hμnh theo quy tr×nh cña Zheng vμ cs. (2003). 2.1. VËt liÖu C¾t nhá 2 cm mÉu l¸ khoÎ, nghiÒn víi - 150 mÉu gièng lóa ®Þa ph−¬ng thu thËp 400 μl dung dÞch chiÕt (200 mM Tris0HCl pH ë miÒn B¾c ViÖt Nam. 8,0; 25 mM EDTA; 250 mM NaCl; 0,5 SDS). - Gen Xa4 ®−îc ph¸t hiÖn b»ng sö dông Thªm 400 μl dÞch chiÕt vμ chuyÓn 400 μl dÞch chØ thÞ Npb181 theo Yoshida vμ cs. (1992). chiÕt DNA vμo èng nghiÖm dung tÝch 1,5 ml. R 5’GTG CTA TAA AAG GCA TTC GGG 3’ Thªm 400 μl chloroform phenol (24:1), trén F 5’ATC GAT CGA TCT TCA CGA GG 3’ ®Òu, li t©m 5 phót víi tèc ®é 13.000 vßng, 40C. ChuyÓn phÇn dung dÞch phÝa trªn vμo - Gen Xa7 ®−îc ph¸t hiÖn b»ng sö dông èng nghiÖm míi, thªm 800 μl ethanol, li t©m chØ thÞ P3 theo Taura vμ cs. (2004). 5 phót, 13.000 vßng, 40C. LÊy phÇn kÕt tña F 5’ CAG CAA TTC ACT GGA GTA GTG DNA phÝa d−íi. Röa kÕt tña b»ng ethanol GTT 3’ 70%, ®Ó kh« tù nhiªn b»ng c¸ch óp èng R 5’ CAT CAC GGT CAC CGC CAT ATC ...