Biệt hóa tế bào gốc trung mô tuỷ xương thỏ thành dạng tạo cốt bào trong môi trường Dexamethasone và Ascorbic

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết là nuôi cấy, biệt hóa thành công tế bào gốc trung mô tủy xương thỏ thành tạo cốt bào trong môi trường có dexamethasone và ascorbic. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Biệt hóa tế bào gốc trung mô tuỷ xương thỏ thành dạng tạo cốt bào trong môi trường Dexamethasone và AscorbicTẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ HÌNH THÁI HỌC-2017BIỆT HOÁ TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ TUỶ XƢƠNG THỎTHÀNH DẠNG TẠO CỐT BÀO TRONG MÔI TRƢỜNGDEXAMETHASONE VÀ ASCORBICLê Thị Hồng Nhung*; Ngô Duy Thìn*; Nguyễn Khang Sơn*TÓM TẮT15 mẫu tế bào đơn nhân tủy xương thỏ nuôi cấy tăng sinh 14 ngày. Sau khi định danh bằngkỹ thuật hoá mô miễn dịch với các marker CD44, CD90, CD34, CD14 xác định là tế bào gốctrung mô (TBGTM), được đưa vào môi trường cảm ứng tạo xương có dexamethasone 1 µM vàascorbic 50 µg/ml trong thời gian 3 tuần. Kết quả: tất cả các mẫu tế bào nhuộm hóa mô đều cóhiện tượng tạo canxi trong chất nền (dương tính khi nhuộm alirazin red). Quan sát các mẫudưới kính hiển vi điện tử quét thấy xuất hiện tinh thể khoáng. Mẫu tế bào nhuộm hóa mô miễndịch dương tính với marker osteocalcin. Kết luận: đ biệt hoá thành công TBGTM tủy xươngthỏ thành tế bào dạng tạo cốt bào trong môi trường có dexamethasone và ascorbic.* Từ khóa: Tế bào trung mô; Tạo cốt bào; Biệt hóa; Dexamethasone; Ascorbic.Diffrentiation of Bone Marrow Mensenchymal Stem Cell into Osteoblastin Dexamethasone and Ascorbic CultureSummary15 samples rabbit bone marrow mononuclear after culture for 14 days. Those were isolatedby flow cytometry and immunocytochemistry staining with marker CD44, CD90, CD14, CD34.These analyses indicated that culture cells were MSCs. To induce osteoblast differentiationof the MSCs, the cultures were maintained in osteogenic media supplement with 1 µMdexamethasone, 50 µg/mL ascorbic acid for up to three weeks. Results: All samples afterdifferentiation demonstrated that therre were actual calcium deposits in matrix by alizarin redstaining. Under SEM appearance white crystals of MSC differentiation into osteogenic line. Thecells were immunocytochemistry stained positive for osteocalcin. Conclusions: The bone marrowMSC tendency differentiation into osteoblast in dexamethasone and ascorbic acid.* Keywords: Mesenchymal stem cell;; Osteoblast; Differentiation; Dexamethasone; Ascorbic.ĐẶT VẤN ĐỀTạo cốt bào là một trong 4 tế bào củamô xương có vai trò tạo xương mới tronggiai đoạn phát triển của cơ thể hoặc khimô xương bị tổn thương. Trong cơ thể,các tế bào gốc trước khi trở thành tạo cốtbào (osteoblast), chúng phải trải qua giaiđoạn biệt hóa để tạo thành tiền tạo cốtbào (pre-osteoblast). Ngày nay với côngnghệ, giai đoạn này có thể thực hiện trongđiều kiện in vitro nhằm tạo ra dòng tế bàocó khả năng ứng dụng trên lâm sàng để* Trường Đại học Y Hà NộiNgười phản hồi (Corresponding): Lê Thị Hồng Nhung (nhunglehmu@gmail.com)Ngày nhận bài: 25/07/2017; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 26/08/2017Ngày bài báo được đăng: 30/08/2017173TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ HÌNH THÁI HỌC-2017điều trị các bệnh lý xương khớp, đặc biệtlà các bệnh không thể điều trị bằng phươngpháp thông thường [1].KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN1. Hình dạng tế bào sau biệt hóa.Kỹ thuật và môi trường biệt hóa TBGTMtủy xương thành tạo cốt bào đ đượcnhiều tác giả nghiên cứu. Trong phạm vibài này, chúng tôi xin giới thiệu kết quả biệthóa TBGTM tủy xương thỏ trong môi trườngcó dexamethasone, 50 µg/ml ascorbic, đây lànhững chất kích thích cảm ứng tạo xương.Mục tiêu của nghiên cứu: Nuôi cấy,biệt hóa thành công TBGTM tủy xươngthỏ thành tạo cốt bào trong môi trường códexamethasone và ascorbic.ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Đối tượng nghiên cứu.15 mẫu tế bào trung mô tủy xương thỏ.2. Phương pháp nghiên cứu.Các tế bào đơn nhân được phân lập từtủy xương thỏ sau khi nuôi cấy tăng sinh14 ngày, định danh bằng kỹ thuật hóa mômiễn dịch để khẳng định chắc chắn chúnglà TBGTM.Đưa vào môi trường biệt hóa cảm ứngtạo xương để biệt hóa thành tạo cốt bào,gồm: 89% DMEM, 10% FBS, 1% kháng sinh,1 µM dexamethasone, 50 µg/ml ascorbic,100 mM β - glycerolphosphatase. Thời gianbiệt hóa 3 tuần, thay môi trường 3 ngày/lần.Định danh sau biệt hóa bằng kỹ thuậtalizarin để đánh giá khả năng lắng đọngcanxi chất nền của tế bào. Đánh giá sự hìnhthành tinh thể khoáng bằng kỹ thuật hiểnvi điện tử quét. Xác định marker osteocalcincủa tế bào sau biệt hóa bằng phương phápnhuộm hóa mô miễn dịch. Mỗi phươngpháp lấy ngẫu nhiên 5 mẫu trong 15 mẫuđ biệt hóa.174Hình 1: TBGTM sau biệt hóa theo hướngtạo cốt bào 14 ngày (x500).Quan sát tất cả các mẫu chúng tôi nhậnthấy có sự biến đổi rõ rệt về hình dạng tếbào theo thời gian. Càng về sau, các tếbào có xu hướng phình to đoạn giữa giốnghình hạt đậu. Đây có thể là hình ảnh đặctrưng của tế bào tạo xương.2. Kết quả định danh tế bào sau biệthóa.* Định danh bằng kỹ thuật nhuộmalizarin red:Hình 2: Tế bào sau biệt hóa 21 ngày nhuộmalizarin red (x200).TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ HÌNH THÁI HỌC-2017Trên tất cả các mẫu tế bào khi nhuộm với alizarin red đều cho kết quả đặc hiệu:tế bào và chất nền bắt màu ...