Bước đầu khảo sát tần số phân bố alen của gen D13S317

Ngày nay, việc nghiên cứu ứng dụng các đoạn lặp, đặc biệt là các đoạn lặp ngắn (STR) trong hệ gen người đã trở thành phổ biến trong việc xác định cá thể người, xác định huyết thống cha con, truy tìm người mất tích qua hài cốt, xây dựng tàng thư gen tội phạm... để phục vụ các yêu cầu của tố tụng hình sự và dân sự. Các đoạn lặp của hệ STR thường có chiều dài 2-7 cặp bazơ [4]. ở mỗi cá thể khác nhau, số lượng đoạn lặp khác nhau, do vậy mà người ta...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bước đầu khảo sát tần số phân bố alen của gen D13S317 TCNCYH 23 (3) 2003 B−íc ®Çu kh¶o s¸t tÇn sè ph©n bè alen cña gen D13S317 Nghiªm Xu©n Dòng, TrÇn Minh §«n, L−¬ng ThÞ YÕn Côc Kü thuËt Hãa-Sinh Bé C«ng an D13S317 lµ ®o¹n ADN ®a h×nh cã tr×nh tù lÆp l¹i 4 ®«i baz¬ nit¬ n»m trªn nh¸nh dµi cña nhiÔms¾c thÓ sè 13. Locus nµy chøa 9 alen, cã ®é dµi tõ 242 ®Õn 270bp. Ng−êi ta ®· x¸c ®Þnh ®−îc sè®o¹n lÆp l¹i trong quÇn thÓ ng−êi lµ 7,8,9,10,11,12,13,14 vµ 15. Trong bµi nµy, b»ng kü thuËt PCRvµ ®iÖn di trªn b¶n gel polyacrylamide biÕn tÝnh, chóng t«i ®· x¸c ®Þnh s¬ bé tÇn suÊt c¸c allen cñalocus D13S317.I. §Æt vÊn ®Ò - Sö dông kü thuËt ®iÖn di trªn gel Ngµy nay, viÖc nghiªn cøu øng dông c¸c Polyacrylamide biÕn tÝnh ®Ó x©y dùng thang®o¹n lÆp, ®Æc biÖt lµ c¸c ®o¹n lÆp ng¾n (STR) allen cho locus di truyÒn D13S317trong hÖ gen ng−êi ®· trë thµnh phæ biÕn trong - Kh¶o s¸t s¬ bé tÇn xuÊt allen cña locusviÖc x¸c ®Þnh c¸ thÓ ng−êi, x¸c ®Þnh huyÕt D13S17 ë mét sè ng−êi ViÖt Nam.thèng cha con, truy t×m ng−êi mÊt tÝch qua hµicèt, x©y dùng tµng th− gen téi ph¹m... ®Ó phôc II. §èi t−îng vµ ph−¬ng ph¸pvô c¸c yªu cÇu cña tè tông h×nh sù vµ d©n sù. nghiªn cøu C¸c ®o¹n lÆp cña hÖ STR th−êng cã chiÒu 1. §èi t−îngdµi 2-7 cÆp baz¬ [4]. ë mçi c¸ thÓ kh¸c nhau, M¸u t−¬i ®−îc lÊy trùc tiÕp tõ nh÷ng ng−êisè l−îng ®o¹n lÆp kh¸c nhau, do vËy mµ ng−êi khoÎ m¹nh, kh«ng cã quan hÖ hä hµng huyÕtta coi ®©y lµ ®Æc ®iÓm c¬ b¶n ®Ó x¸c ®Þnh sù thèng. C¸c c¸ thÓ nµy lµ ng−êi ViÖt ®−îc ph©nkh¸c biÖt gi÷a ng−êi nµy víi ng−êi kh¸c [3]. bè ë c¸c vïng ®Þa lý kh¸c nhau.¦u ®iÓm cña c¸c ®o¹n lÆp l¹i ng¾n lµ kh¸ bÒnv÷ng, cã thÓ thùc hiÖn nh©n gen tæ hîp cña c¸c 2. Ph−¬ng ph¸p®o¹n gen kh¸c nhau trong cïng mét ph¶n øng a. T¸ch chiÕt ADNvµ phï hîp víi c¸c mÉu h×nh sù [2]. GenD13S317 lµ gen cã nh÷ng ®Æc ®iÓm nh− vËy. TiÕn hµnh t¸ch theo ph−¬ng ph¸p dïng phenol vµ chloroform [5]. Sö dông kü thuËt PCR vµ ®iÖn di chóng t«i®· x¸c ®Þnh ®−îc c¸c alen cña gen D13S317 S¶n phÈm ADN sau khi t¸ch ®−îc x¸c ®Þnh[1]. nång ®é b»ng quang phæ kÕ, kÕt qu¶ cho thÊy: Môc tiªu nghiªn cøu: - Nång ®é tèi thiÓu: 10,5ng/µl - Nghiªn cøu c¸c ®iÒu kiÖn PCR tèi −u ®Ó - Nång ®é tèi ®a: 290,5ng/µlnh©n béi ®o¹n gen D13S317. - Nång ®é trung b×nh: 150ng/µl 81TCNCYH 23 (3) 2003 §é tinh s¹ch trung b×nh tÝnh b»ng chØ sè OD - Thùc hiÖn ph¶n øng nh©n gen trªn m¸ytrªn 1,75; ®¶m b¶o chÊt l−îng cho c¸c nghiªn Geneamp-PCR System 9700 cña h·ng Perkincøu tiÕp theo. Elmer (Mü) hoÆc m¸y Eppendorf (Mü). b. Ph¶n øng nh©n gen (PCR) Chu tr×nh nhiÖt: - Sö dông ®o¹n måi ®Æc hiÖu cho locus 95o - 5 phót x 1 chu kúD13S317 do h·ng Geneset Singapore Biotech 58o - 1 phótcung cÊp. 72o - 1 phót x 35 chu kú - Taq-polymerase, 10X PCR buffer vµdNTPs cña h·ng Pharmacia. 94o - 1 phót - Hçn hîp ph¶n øng PCR: 58o - 1 phót x 1 chu kú 10X PCR Buffer : 2,5µl 72o- 10 phót dNTPs : 2,5µl 4o Måi xu«i : 1,0µl c. §iÖn di vµ x¸c ®Þnh alen * Kü thuËt ®iÖn di: Måi ng−îc : 1,0µl C¸c mÉu sau khi thùc hiÖn qu¸ tr×nh PCR Taq : 0,2µl ®· ®−îc kiÓm tra trªn gel agaroza 2% sau ®ã dH2O : 16,8µl ®−îc ®iÖn di trªn gel polyacrylamide 6% sö dông ure 7M. B¨ng ADN ®−îc ph¸t hiÖn b»ng ADN khu«n : 1,0µl ph−¬ng ph¸p nhuém b¹c cña Bassam, 1991 [6]. H×nh 1: KiÓm tra s¶n phÈm PCR trªn gel agaroza 2% * Chän lä ...