Bước đầu nghiên cứu thu nhận enzyme chitinase trong cây khoai lang (Ipomoea batatas) tại Khánh Hòa

Bài viết đưa ra các điều kiện thích hợp cho chiết chitinase, xác định các yếu tố ảnh hưởng đến chitinase. Bước đầu sử dụng chitinase vào quá trình thủy phân chitin thu chế phẩm olygo-chitin. Để nắm nội dung mời các bạn cùng tham khảo.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bước đầu nghiên cứu thu nhận enzyme chitinase trong cây khoai lang (Ipomoea batatas) tại Khánh Hòa Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản - số 03/2008 VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU THU NHẬN ENZYME CHITINASE TRONG CÂY KHOAI LANG (Ipomoea batatas) TẠI KHÁNH HÒA INITIAL RESEARCH ON OBTAINING CHITINASE FROM SWEET POTATO (Ipomoea batatas) IN KHANH HOA Đặng Trung Thành Khoa Chế biến - Trường Đại học Nha Trang Tóm tắt Enzyme chitinase được tìm thấy trong cây khoai lang. Tuỳ từng vị trí thu chitinase có hoạt tính khác nhau. Hoạt tính chitinase cao nhất ở lá và giảm dần ở cuống lá và dây khoai. Chitinase thu từ những phần của cây bị tổn thương cao hơn so với những cây không bị tổn thương. Sử dụng đệm acetat (pH 5,0) để chiết chitinase, thu chế phẩm chitinase bằng cách kết tủa chitinase dịch chiết bằng ethanol 65%. Nhiệt độ thích hợp của chitinase từ lá khoai là 300C, pH thích hợp là 5,5 - 6. Dùng chitinase xúc tác thuỷ phân chitin ở dạng huyền phù chitin, nồng độ chitin thích hợp cho thuỷ phân 0,75 – 1%. Quá trình thuỷ phân không cần phải sử dụng các chất phòng thối. Hiệu suất thuỷ phân chitin bằng chitinase đạt 16,96 - 22,15%. Từ khoá: Lá khoai lang, chitinase, glycol-chitin, swollen-chitin Abstract Enzyme chitinase was found in sweet potato. Chitinase activity was different from parts of sweet potato (leaves, vines of leaves and vines). Chitinase activity was the most in leaves. Parts of breaken sweet potato were higher activity than unbreaken sweet potato. Using acetat buffer (pH 5.0) extracting chitinase was the best way. Using ethanol with concentration 65% precipitated to make product of chitinase. The optimum temperature of chitinase was 300C, the optimum pH was 5.5 – 6. Chitinase hydrolysised colloidal chitin in 0.75 – 1% was good. The hydrolysis need not use substances to prevent from deterioration. The Capacity of hydrolysis chitin by chitinase was low, about 16.96 – 22.15%. I. ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, tận dụng các nguồn phế liệu từ nghiệm thủy phân chitin để sản xuất olygochitin” là hướng đi mới và rất cần thiết trong các quá trình sản xuất không những giải quyết điều kiện sản xuất yêu cầu phải đảm bảo tính vấn đề ô nhiễm môi trường mà còn tạo ra các sản phẩm mới có giá trị. Trong lĩnh vực chế thân thiện môi trường. Nội dung: Nghiên cứu thu nhận chitinase biến thuỷ sản, nguồn phế liệu giáp xác rất lớn. Tận dụng nguồn phế liệu này để sản xuất từ lá khoai lang và các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính của enzyme này. Bước đầu sử dụng chitin và các chế phẩm từ chitin là một hướng đi có nhiều triển vọng tạo ra nhiều sản phẩm chitinase thủy phân chitin thu olygo-chitin. Mục tiêu: Đưa ra các điều kiện thích hợp mới có hoạt tính sinh học cao, ứng dụng nhiều cho chiết chitinase, xác định các yếu tố ảnh trong các lĩnh vực thực phẩm, y dược, mỹ phẩm, công nghiệp vv… “Nghiên cứu chiết rút hưởng đến chitinase. Bước đầu sử dụng chitinase vào quá trình thủy phân chitin thu chitinase từ lá khoai lang và bước đầu thử chế phẩm olygo-chitin. Kết quả thu được là cơ 42 Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản - số 03/2008 sở để đánh giá hiệu quả và khả năng ứng đương với 1 µg glucosamin tạo thành trong dụng của chitinase thực vật vào sản xuất olygo-chitin. thời gian thủy phân chitin là 1 phút ở nhiệt độ phản ứng. Ý nghĩa: Nghiên cứu chiết chitinase từ lá - Xác định độ ẩm: Phương pháp sấy đến khoai lang là một hướng mới tại Việt Nam. Kết quả nghiên cứu thu được giúp hiểu biết hơn trọng lượng không đổi. - Xác định độ tan: Phương pháp xác định về tính chất của chitinase từ thực vật (từ lá cây khoai lang), các điều kiện thích hợp để chiết hàm lượng các chất không tan. chitinase. Sử dụng chitinase thuỷ phân chitin tạo ra các chế phẩm thay thế cho phương pháp hoá học và tận dụng được nguồn phế liệu vỏ tôm, cua, lá khoai lang. III. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1.Xác định loại khoai lang sử dụng chiết chitinase Chọn giống khoai chiết rút chitinase: chọn II. ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG giống khoai lang có hoạt tính chitinase cao nên chọn những giống trồng chủ yếu để thu lá (lá PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Đối tượng và vật liệu nghiên cứu to, cuống to và dài). Kết quả cho thấy giống khoai 143 thu chitinase có hoạt tính cao nhất. Nguồn thu nhận chitinase: Lá khoai lang là đối tượng nghiên cứu chiết rút enzyme chitinase. Vật liệu sử dụng để sản xuất olygo-chitin: là chitin ở dạng huyền phù chitin. 2.2. Phương pháp nghiên cứu Đối tượng thu chitinase: Lá khoai tươi thu Từ các phần của cây bao gồm lá, cuống lá và dây khoai cho thấy chitinase từ lá có hoạt tính cao nhất và giảm dần đến cuống lá và dây khoai. Tình trạng tổn thương của cây ảnh hưởng đến hoạt tính chitinase: chitinase trong lá khoai lang bị tổn thương (do bị côn trùng ăn lá, do hái từ vườn sử dụng làm nguyên liệu chiết chitinase, thu từ ba giống khác nhau: giống tác động cơ học hay bị sâu bệnh) có hoạt tính cao nhất (192 Units/ml) cao hơn 1,3 lần so với VX-37, giống khoai 143 và giống HL4. Phương pháp tách chiết chitinase và thu nhận chế phẩm enzyme (CPE) chitinase được lá khoai không bị tổn thương (148 Units/ml). chiết bằng các dung môi: nước cất, dung dịch muối sinh lý và đệm acetat pH = 5. Kết tủa Units/ml) cao hơn 1,6 lần so với cuống của lá không bị tổn thương (51 Units/ml). 3.2. Xác định phương pháp thu nhận chitinase DC, CPE chitinase dịch chiết bằng các tác nhân kết tủa: aceton, ethanol và amonium sunfat. Điều kiện thủy phân chitin bằng CPE chitinase bao gồm các yếu tố: nồng độ Kết quả thu được tương tự đối với cuống của các lá bị tổn thương có hoạt độ chitinase (82 Tách chiết chitinase dịch chiết (DC): chiết chitinase, nhiệt độ, pH, nồng độ chitin và chất chitinase bằng đệm acetat pH = 5 thu được chitinase có hoạt độ cao nhất (192 Units/ml), phòng thối. Các phương pháp phân tích cao hơn 1,15 và 1,22 lần so với dung dịch muối sinh lý và nước cất. Tỷ lệ dung - Xây dựng đường chuẩn glucosamine qua đó định lượng glucosamine trong dịch môi/nguyên liệu thích hợp là 1/ ...