Các phương pháp dùng cho bảo quản nấm sợi

Phương pháp này thường được ứng dụng với các sợi nấm có bào tử. Các chủng nấm sợi được nuôi trên môi trường thạch thích hợp và để cho sợi nấm phát triển đến mức độ cực đại, sau đó là quá trình hình thành bào tử, các ống giống này sẽ được bảo quản theo các cách khác nhau: Các ống thạch được để trong tủ lạnh (4-7 OC).--Bảo quản trong thạch dưới lớp dầu: Các ống thạch được bảo quản dưới lớp dầu parafin có tỷ trọng tương đối là 0.83- 0.89 đã được khử trùng ở...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Các phương pháp dùng cho bảo quản nấm sợi Các phương pháp dùng cho bảo quản nấm sợi a. Phương pháp cấy truyền: Phương pháp này thường được ứng dụng với các sợi nấm có bào tử. Cácchủng nấm sợi được nuôi trên môi trường thạch thích hợp và để cho sợi nấm pháttriển đến mức độ cực đại, sau đó là quá trình hình thành bào tử, các ống giống nàysẽ được bảo quản theo các cách khác nhau: Các ống thạch được để trong tủ lạnh (4-7 OC). - Bảo quản trong thạch dưới lớp dầu: Các ống thạch được bảo quản - dưới lớp dầu parafin có tỷ trọng tương đối là 0.83- 0.89 đã được khử trùng ở nhiệt độ 121 OC trong 15 phút. Lớp dầu cách bề mặt thạch khoảng 1 cm. Nhiệt độ bảo quản là 15-20 OC. Bảo quản trong nước, nấm sợi được nuôi trên môi trường thạch đĩa. - Sau khi sợi phát triển cực đại thì cắt thành từng miếng nhỏ kích thước khoảng 6 mm2 và cho vào lọ nước đã thanh trùng. Bảo quản tại nhiệt độ phòng. Bảo quản nấm sợi có bào tử trong silicagel: b. Chuẩn bị: 1, Lọ đựng silicagel (10-15ml) có nắp chịu nhiệt (sắt hay nhựa) thanh trùng ở nhiệt độ 170 OC trong 3 giờ. 2, Silicagel: Loại trong suốt, không có màu, kích thước và số lượng hạt silicagel đưa vào không quá 1/3 thể tích của lọ, thanh trùng ở nhiệt độ 170 ° C trong 3 giờ. 3, Môi trường sữa tách bơ (Skimmilk) 20% khử trùng ướt (115OC/20 phút). 4, Ống thạch nghiêng (có thể đĩa petri) chứa b ào tử nấm sợi, tuỳ theo từng chủng, môi trường nuôi cấy mà thời gian thu bào tử thích hợp khác nhau (10-15 ngày). Cách tiến hành: 1, Dùng pipet pasteur lấy khoảng 3-4 ml sữa thanh trùng cho vào ốngnghiệm chứa bào tử nấm sợi, dùng que cấy tạo dịch huyền phù bào tử có mật độcao nhất (đối với một số chủng có số l ượng bào tử thấp thì có thể tạo dịch bào tửtừ một vài ống thạch bào tử khác nhau). 2, Dùng pipet pasteur lấy dịch bào tử cho vào lọ đựng silicagel. Chú ýsilicagel hút nước và sinh nhiệt do đó việc đưa dịch bào tử vào phải được thựchiện trong chậu nước đá. Lượng dịch bào tử đưa vào không vượt quá 1/3 thể tíchhạt silicagel trong lọ. Sau đó dùng tay lắc đều đảm bảo các hạt silicagel đều dínhdịch bào tử nấm sợi. Dán nhãn, ghi các thông tin cần thiết như số mã chủng, ngàybảo quản, môi trường và nhiệt độ thích hợp... 3, Lọ silicagel được đậy nắp cẩn thận nhưng không vặn chặt (nới 1,5 vòng)sau đó giữ trong bình hút ẩm (độ ẩm 35-40%), 25OC trong 1 tuần. Vặn chặt nút vàquấn giấy parafil giữ trong 4OC. Kiểm tra độ sống sót sau khi bảo quản: Mẫu silicagel ở 4 °C, dùng que cấy vô trùng lấy ra 3 hạt silicagel để trên mặtthạch môi trường mầm thóc (Maltagar), lắc đều cho hạt silicagel tiếp xúc lên mặtmôi trường. Để ở nhiệt độ thích hợp, kiểm tra tra khuẩn lạc nấm theo thời gianthích hợp. Bảo quản nấm sợi có bào tử theo phương pháp đông khô (freez- c. drying): Chuẩn bị: 1, Ống đông khô rửa sạch (sonic cleaner) trong 15 phút sau đó khử trùng170OC trong 3 giờ. 2, Môi trường sữa tách bơ (Skimmilk) 20% khử trùng ướt (115OC/20 phút). 3, Ống thạch nghiêng (có thể đĩa petri) chứa bào tử nấm sợi, tuỳ theo từngchủng môi trường nuôi cấy mà thời gian thu bào tử thích hợp khác nhau (10-15ngày). Cách tiến hành: 1, Dùng pipet pasteur lấy khoảng 3-4 ml sữa thanh trùng cho vào ốngnghiệm chứa bào tử nấm sợi, dùng que cấy tạo dịch huyền phù bào tử có mật độcao nhất (đối với một số chủng có số l ượng bào tử thấp thì có thể tạo dịch bào tửtừ một vài ống thạch bào tử khác nhau). 2, Dùng pipet pasteur lấy dịch bào tử cho vào ống đông khô (0,2 - 0,3 ml),thông thường chuẩn bị 13 ống cho mỗi chủng. Dán nhãn, ghi các thông tin cầnthiết như mã số chủng, ngày bảo quản, môi trường và nhiệt độ thích hợp. Sau đóđậy bằng nút bông hay giấy bạc. 3, Giữ ở -80°C trong 3 giờ trước khi tiến hành đông khô, đồng thời bật máyDura-Stop, khi nhiệt độ đạt -40OC, đưa mẫu vào tủ đông khô của Dura-Stop, bậtmáy Dura-Dry, khi mức độ chân không đạt 45 minitor, nhiệt độ -55OC, tăng nhiệtđộ Dura-Stop lên -5OC, để qua đêm. 4, Tăng nhiệt độ Dura-Stop lên 25°C, khi đạt nhiệt độ cần thiết, tắt máy hútchân không nhưng không tắt Dura-Dry. 5, Tắt Dura-Stop, lần lượt nối tube mẫu vào hệ thống manifold, bật máyDura-Dry, tiến hành hàn ống khi độ chân không đạt 45-48 minitor, nhiệt độ -55OC. Chú ý: Trong trường hợp chỉ dùng Dura-Dry có thể được thực hiện như sau: Tiến hành các bước 1,2,3,4 như trên. - Mẫu được để tiền đông khô ở -80°C trong 3 giờ. Bật máy Dura-Dry, - khi đạt nhiệt độ -60oC đến -55oC, độ chân không 45 minitor, gắn ống mẫu với hệ thống manifold tiến hành hàn ống khi độ chân không đạt 45- ...