Cấu trúc siêu vi của tế bào gốc trung mô não giữa chuột cống trắng nuôi cấy

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá cấu trúc siêu vi của tế bào gốc (TBG) trung mô não giữa chuột cống trắng trước và sau nuôi cấy. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Cấu trúc siêu vi của tế bào gốc trung mô não giữa chuột cống trắng nuôi cấyTẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ HÌNH THÁI HỌC-2017CẤU TRÚC SIÊU VI CỦA TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ NÃO GIỮACHUỘT CỐNG TRẮNG NUÔI CẤYNguyễn Thanh Hoa*; Nguyễn Thị Bình*Nguyễn Phúc Hoàn*; Nguyễn Mạnh Hà*TÓM TẮTMục tiêu: đánh giá cấu trúc siêu vi của tế bào gốc (TBG) trung mô não giữa chuột cốngtrắng trước và sau nuôi cấy. Đối tượng và phương pháp: phẫu tích lấy mô sàn não giữa phôichuột cống trắng 12,5 - 13,5 ngày tuổi, tạo thành dịch treo tế bào (TB) và nuôi cấy trong môi0trường DMEM/F12 có bổ sung các yếu tố tăng trưởng, kháng sinh và kháng nấm trong tủ 37 Cvà 5% CO2. Sau 6 - 8 ngày nuôi cấy, các TB tăng sinh nhanh phủ kín phiến nuôi cấy. Làm tiêubản hiển vi điện tử và quan sát bằng kính hiển vi điện tử quét và xuyên. Kết quả: các nơ ron cócấu trúc siêu vi điển hình với đầy đủ bào quan trong bào tương. Các nhánh của nơ ron dài vàtạo liên kết synap với các nơ ron khác. Kết luận: nuôi cấy làm tăng sinh và trưởng thành các TBcủa mô sàn não giữa.* Từ khóa: Sàn não giữa; Nuôi cấy tăng sinh; Biệt hoá; Cấu trúc siêu vi.Ultrastructure of Rat Embryonic Ventral Mesencephalic PrecursorCells in CultureSummaryObjectives: To investigate ultrastructure of rat ventral mesencephalic precursor cells beforeand after culture. Subjects and methods: Dissected the ventral mesencephalon of rat embryoson day 12.5 - 13.5, then created cell suspension and expansion cultured in DMEM/F12 mediumsupplemented with growth factors, antibiotics, antifungal. After 6 - 8 days of culture, precursorcells proliferated quickly to completely cover culture disk. Samples were prepared and observedunder the scanning and transmission electronmicroscope. Results: Neurons contained particularultrastrutures with many organelles, elongated processes and synaptic contact with anotherneurons. Conclusion: Ventral midbrain precursor cells cultures were proliferative and differentiatedinto neurons after 6 - 8 days.* Keywords: Vetral mesencephalon; Proliferation; Differentiation; Ultrastruture.ĐẶT VẤN ĐỀParkinson là một bệnh thoái hóa thầnkinh phổ biến thứ hai sau bệnh Alzheimer,đặc trưng bởi sự thoái hóa các TB thầnkinh tiết dopamin trên con đường thể vân -liềm đen ở não. Bệnh Parkinson có nhiềuphương pháp điều trị. Hiện nay, việc ứngdụng công nghệ TBG vào điều trị là mộtphương pháp mang lại nhiều triển vọngmới cho bệnh Parkinson. Phương phápnày có nhiều ưu điểm vượt trội vì không chỉ213TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ HÌNH THÁI HỌC-2017* Trường Đại học Y Hà NộiNgười phản hồi (Corresponding): Nguyễn Thị Bình (nguyenthibinh_mp@yahoo.com.vn)Ngày nhận bài: 25/07/2017; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 27/08/2017Ngày bài báo được đăng: 30/08/2017cải thiện được các triệu chứng lâm sàngcủa bệnh, mà còn làm ngừng tiến triển bệnh.Các TBG ngoại bì thần kinh bào thai khighép vào thể vân sẽ biệt hóa thành TBsản xuất dopamin, tạo ra các synap vớiTB thần kinh của người bệnh [3]. Các nơron tiết dopamin chỉ chiếm khoảng 1% tổngsố nơ ron trong n o, nhưng đóng vai tròquan trọng trong nhiều chức năng của nãonhư vận động tự chủ, giải phóng hormonthần kinh nội tiết, nhận thức, điều khiểnhành vi cảm xúc, stress và trí nhớ. Khi sốlượng các TB thần kinh này bị giảm sút sẽdẫn đến nhiều rối loạn thần kinh nghiêmtrọng, nổi bật nhất là bệnh Parkinson [4].Ở người, số lượng TB thần kinh tiết dopaminrất ít, chỉ khoảng 400.000.Ở động vật có vú, các TB tiết dopaminđược phân chia thành 9 nhóm, nằm rảirác từ não giữa tới hành khứu. TheoNguyễn Thanh Hoa và CS (2015), sànnão giữa phôi chuột cống trắng là nơi tậptrung nhiều TB tiết dopamin [2]. Mỗi lầnghép để điều trị Parkinson cần tới 40.000TBG ngoại bì thần kinh não giữa và để cóđược số lượng TB này cần tới 4 não giữaphôi [5, 6]. Vì vậy, nuôi cấy để tăng sinhsố lượng nơ ron nói chung và số lượngnơ ron tiết dopamin là cần thiết. Các TBcủa sàn não giữa sẽ thay đổi thế nào saukhi nuôi cấy in vitro?. Để trả lời câu hỏi này,chúng tôi tiến hành nghiên cứu nhằm:- Nghiên cứu cấu trúc siêu vi của môsàn não giữa phôi chuột cống trắng.- Nghiên cứu cấu trúc siêu vi của TBsàn não giữa phôi chuột cống trắng saunuôi cấy in vitro.180ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Đối tượng nghiên cứu.- 10 mẫu mô sàn não giữa phôi chuộtcống trắng 12,5 - 13,5 ngày tuổi.- 10 mẫu TBG trung mô sàn não giữa phôichuột cống trắng sau nuôi cấy 6 - 8 ngày.2. Phương pháp nghiên cứu.- Tạo phôi chuột 12,5 - 13,5 ngày tuổi(20 phôi).- Phẫu tích lấy sàn não giữa (20 mảnh).- Dùng Dispase II , trypsin - EDTA và lựccơ học để tạo dịch treo TB (10 mẫu).- Nuôi cấy trong môi trường cơ bản:DMEM/F12 có bổ sung thêm các yếu tốtăng trưởng, kháng sinh, kháng nấm.- Cấy TBG ngoại bì thần kinh não giữaphôi chuột với mật độ 1,5 x 104 cm2 trêngiếng nuôi cấy hoặc trong chai flask, trongtủ ấm 370C, 5% CO2.- Thay môi trường mỗi 2 ngày/lần, đồngthời đánh giá sự phát triển ...