Đặc điểm và phân bố mất đoạn nhỏ nhiễm sắc thể Y ở bệnh nhân vô sinh nam không có tinh trùng và ít tinh trùng

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm phân tích đặc điểm và phân bố mất đoạn nhỏ nhiễm sắc thể Y ở bệnh nhân vô sinh nam không có tinh trùng và ít tinh trùng. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Đặc điểm và phân bố mất đoạn nhỏ nhiễm sắc thể Y ở bệnh nhân vô sinh nam không có tinh trùng và ít tinh trùngTẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1 - 2013ĐẶC ĐIỂM VÀ PHÂN BỐ MẤT ĐOẠN NHỎ NHIỄM SẮC THỂ Y ỞBỆNH NHÂN VÔ SINH NAM KHÔNG CÓ TINH TRÙNG VÀÍT TINH TRÙNGTrÇn Văn Khoa*; Triệu Tiến Sang*; Quản Hoàng Lâm*Ngô Trường Giang*; Nguyễn Thị Việt Hà*TÓM TẮTPhân tích mất đoạn gen của vùng yếu tố vô tinh trùng (TT) của nhiễm sắc thể (NST) Y bằngphương pháp PCR là một công cụ sàng lọc quan trọng trong điều trị vô sinh nam. Nghiên cứu sửdụng phương pháp multiplex PCR để phân tích mất đoạn nhỏ NST Y sử dụng 19 trình tự mồi pháthiện (STSs) thuộc ba gen của vùng yếu tố vô TT hoÆc Ýt TT. 323 bệnh nhân (BN) đối tượng namkhông có TT có NST bình thường được phân tích. Kết quả: phát hiện 17/323 nam giới vô sinh(5,26%) bị mất đoạn nhỏ NST Y. Trong đó, 3 BN mất đoạn AZFa, 1 BN mất đoạn AZFb, 11 BN mấtđoạn AZFc+d, 1 BN mất đoạn AZFa+b+c và 1 BN mất đoạn AZFa+b+c+d. Hai tổ hợp multiplex PCRđược thiết kế sử dụng 8 trình tự mồi (STSs) có thể phát hiện một cách hiệu quả các mất đoạn phổbiến trên NST Y ở đối tượng vô sinh nam.* Từ khoá: Vô sinh nam; Vô tinh trùng; Mất đoạn nhỏ nhiễm sắc thể Y.CHARACTERISTICS AND DISTRIBUTION OF MICRODELETIONSON Y CHROMOSOME in infertile azoospermia menSummaryAnalysis of the microdelection in azoospermia factor (AZF) region of Y chromosome by PCR isan important screening tool in treatment of infertile males. In the present study, the Y chromosomemicrodeletions were analyzed by PCR, using primers corresponding to 19 sequence tagged sites(STSs) on three genes of the AZF region. A total of 323 azoospermic male showing normal karyotypewere included in the study. Results: Y chromosome microdeletions were observed in 17 out of 323(5.26%) infertile males. Of the seventeen subjects, 3 had deletions in AZFa, 1 in AZFb, 11 in AZFc+d, 1 inAZFa+b+c regions and 1 in AZFa+b+c+d. Two multiplex PCRs were designed using 8 STSs markers,which could detect efficiently almost Y chromosome microdeletions in infertile males.* Key words: Male infertile; Azoospermia; Micro-deletions in the Y-chromosome.ĐẶT VẤN ĐỀTỷ lệ vô sinh chiếm khoảng 5 - 10% cáccặp vợ chồng trong độ tuổi sinh sản. Khoảng40% do nam giới, 40% do nữ và 20% cònlại do cả hai [3]. Trong số các trường hợp vôsinh nam, tỷ lệ không có TT chiếm khoảng10 - 15%. Khoảng 10% trường hợp vô sinhkhông có TT không rõ nguyên nhân. Phântích di truyền cho thấy 3 vùng không chồngnhau trên NST Y gọi là vùng yếu tố vô TTAZFa, AZFb và AZFc [10]. Mất đoạn nhỏ mộttrong số các gen này có thể liên quan đếnsuy giảm sinh tinh và vô sinh nam [1, 4, 6, 8].* Học viện Quân yChịu trách nhiệm nội dung khoa học: GS. TS. Hoàng Văn LươngGS. TS. Nguyễn Đình Tảo1TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1 - 2013Những nghiên cứu tần số mất đoạn nhỏNST Y ở các chủng tộc trên thế giới chothấy kết quả mất đoạn nhỏ NST Y ở namgiới không TT và ít TT không rõ nguyênnhân dao động từ 1 - 55%. Tuy nhiên, chưacó nhiều nghiên cứu về mất đoạn nhỏ NSTY trên BN vô sinh nam ở Việt Nam. Nghiêncứu này được thực hiện nhằm: Phân tíchđặc điểm và phân bố mất đoạn nhỏ NST Yở BN nam không có TT.ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Đối tượng nghiên cứu.323 nam giới vô sinh, không TT hoÆc ÝtTT, có vợ bình thường, đến khám tại Trungtâm Công nghệ Phôi, Học viện Quân y, Bộmôn Y sinh học - Di truyền, Đại học Y HàNội và Viện Nam học và Hiếm muộn Hà Nộitrong thời gian 2010 - 2011. Sau khám xétlâm sàng, xét nghiệm hormon và kiểm trahệ thống sinh dục, lựa chọn nam vô sinhkhông có TT làm đối tượng nghiên cứu. Lấytinh dịch xét nghiệm sau khi kiêng sinh hoạttình dục trong vòng 7 ngày. Phân tích cácmẫu tinh dịch theo tiêu chí của Tổ chức Y tếThế giới.* Tiêu chí loại trừ: vô sinh thứ phát, có bấtthường cơ quan sinh dục, bất thường NST.2. Phương pháp nghiên cứu.Mô tả cắt ngang.* Tách AND:Sử dụng kit ADN Blood Minikit (Qiagen)để tách ADN theo quy trình hướng dẫn củanhà sản suất. Kiểm tra nồng độ, độ tinhsạch mẫu ADN thu được bằng hệ thốngNano-Drop 1000, USA. Kiểm tra các mẫuđạt nồng độ, độ tinh sạch sẽ được dùngcho phản ứng PCR.* Lựa chọn các cặp mồi nhân đoạn genAZF:- Tiêu chí lựa chọn: mồi nhân trình tựđặc hiệu trên vùng AZF thuộc nhánh dàiNST Y. Mỗi vùng AZF a, b, c có ít nhất haitrình tự mồi, đặc biệt các vị trí hay xảy rađứt gãy, mất đoạn gen. Các mồi có nhiệt độgắn mồi tương đương nhau. Chúng tôi lựachọn được 19 cặp mồi nhân vùng gen AZZFvà 1 cặp mồi SRY nhân đoạn gen trên nhánhngắn NST Y làm nội chứng dương.* Multiplex PCR:Dựa vào kích thước sản phẩm PCR,chúng tôi tổ hợp các mồi trên vào 5 ốngphản ứng để chạy multiplex PCR. Mỗi phảnứng bao gồm 9 μl mastermix, 2 - 3 μl ADNkhuôn, 0,25 - 0,5 μl mỗi mồi, nước cất vừađủ đến 15 μl. Phản ứng thực hiện qua 35chu kỳ. Chu trình nhiệt cho mỗi chu kỳ nhưsau: 940C trong 45 giây, 570C trong 45 giâyvà 720C trong 1 phút. Chương trình được đặtbiến tính lầ ...