Đánh giá chất lượng và cơ chế tác dụng của globulin miễn dịch đặc hiệu nguồn gốc từ trứng gà kháng độc tố tả (cholera toxin)

Bài viết khảo sát chất lượng và có chế tác dụng của kháng thể IgY kháng độc tố tả được phân lập từ lòng đỏ trứng gà gây miễn dịch với kháng nguyên độc tố tả. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Đánh giá chất lượng và cơ chế tác dụng của globulin miễn dịch đặc hiệu nguồn gốc từ trứng gà kháng độc tố tả (cholera toxin)TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2014ĐÁNH GIÁ CHẤT LƢỢNG VÀ CƠ CHẾ TÁC DỤNG CỦAGLOBULIN MIỄN DỊCH ĐẶC HIỆU NGUỒN GỐC TỪTRỨNG GÀ KHÁNG ĐỘC TỐ TẢ (CHOLERA TOXIN)Hoàng Trung Kiên*; Nguyễn Đặng Dũng*TÓM TẮTTheo một số nghiên cứu gần đây trên động vật thực nghiệm, kháng thể kháng độc tố tả (ĐTT)(cholera toxin) hoặc kháng tiểu phần B của ĐTT (CT-B subunit) có thể được sử dụng như là mộtbiện pháp tạo miễn dịch thụ động đặc hiệu nhằm điều trị và/hoặc dự phòng trường hợp nhiễm vikhuẩn (VK) tả đường tiêu hóa. Trong nghiên cứu này, chúng tôi khảo sát chất lượng và có chế tácdụng của kháng thể IgY kháng ĐTT được phân lập từ lòng đỏ trứng gà gây miễn dịch với khángnguyên ĐTT. Kết quả cho thấy kháng thể IgY kháng độc tố VK tả phân lập từ lòng đỏ trứng gà gâymiễn dịch thể hiện hoạt tính đặc hiệu với độc tố VK tả trên in vitro, ngăn không cho độc tố gắn vàothụ thể GM1.* Từ khóa: Độc tố tả; Kháng thể IgY.Study on quality and mechanism of action of yolkimmunoglobulin (IgY) specific to cholera toxinSummaryRecently, several papers revealed that antibodies against cholera toxin (CT) or CT-B subunitshowed protective effect when used as preventive or therapeutic method on animal models orallyinfected with V.cholerae. In the present study, we investigated the purity and tested the reactivityof IgY isolated from eggs laid of previously immunized hens. The results showed that the IgYpreparation isolated from eggs laid of immunized hens was relatively pure and could inhibit binding ofCTB with GM1 in vitro.* Key words: Cholera toxin; Immunoglobulin Y (IgY).ĐẶT VẤN ĐỀBệnh tiêu chảy là một trong những nguyênnhân gây tử vong hàng đầu trên toàn cầu,chủ yếu ở trẻ em, đặc biệt các quốc gia đangphát triển. Một trong những tác nhân gây tiêuchảy cấp là nhiễm K tả (Vibrio cholerae)theo đường tiêu hóa. Theo thống kê của Tổchức Y tế Thế giới (WHO) công bố năm2013, trong năm 2012 đã ghi nhận 245.393trường hợp mắc bệnh tả tại tất cả các châulục trên toàn thế giới, với 3.034 trường hợptử vong [7]. Cơ chế bệnh sinh của bệnh cósự tham gia của ĐTT (cholera toxin - CT),* Học viện Quân yNgười phản hồi (Corresponding): Nguyễn Đặng Dũng (dzungmd@yahoo.com)Ngày nhận bài: 30/11/2013; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 10/12/2013Ngày bài báo được đăng: 16/12/20137TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2014do VK tả tiết ra sau khi nhiễm vào ruột bệnhnguyên là 0,1 mg/ml, sau đó gây miễn dịchnhân; ĐTT gây tổn thương tế bào niêm mạccho gà mái, thu hoạch trứng và tách chiếtruột, làm tăng tiết dịch tại ruột, dẫn đến ỉakháng thể IgY từ lòng đỏ trứng theo cácchảy cấp. Một số nghiên cứu gần đây choquy trình đã được mô tả trong nghiên cứuthấy, bên cạnh các biện pháp dự phòng vàtrước của chúng tôi [1].điều trị kinh điển khi nhiễm VK tả (như sửdụng vắcxin, bổ sung nước, điện giải; sửdụng kháng sinh), việc sử dụng kháng thểđặc hiệu với VK tả hoặc với ĐTT có thể làmột biện pháp dự phòng và/hoặc điều trịđặc hiệu có tác dụng bảo vệ rõ rệt trên môhình động vật thực nghiệm nhiễm VK tảđường tiêu hóa [4, 6].Trong nghiên cứu này, chúng tôi khảo* Kiểm tra khả năng gắn kết của CT-Bvới GM1 in vitro:- Gắn GM1 lên phiến ELISA: ủ 50 µl GM1(100 pmol/ml) trong mỗi giếng của phiếnELISA, thời gian 2 giờ ở nhiệt độ phòng.- Tiến hành phản ứng: bổ sung vào mỗigiếng 50 µl cộng hợp HRP-CTB ở nhữngnồng độ khác nhau, sao cho lượng CTBtrong mỗi giếng lần lượt là 1,25; 2,5 và 5sát độ tinh sạch, đồng thời đánh giá hoạtng; rửa giếng bằng PBS-T, sau đó bổ sungtính kháng thể IgY phân lập từ trứng gàvào mỗi giếng 50 µl OPD (0,5 mg/ml, mỗiđược gây miễn dịch với ĐTT trên in vitro.50 ml OPD bổ sung thêm 20 µl H2O2 ngaytrước khi sử dụng); ủ phiến ELISA ở nhiệtĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁPđộ phòng 15 phút trong bóng tối; ngừngNGHIÊN CỨUphản ứng bằng cách bổ sung 50 ul HCl 2N.1. Đối tượng, vật liệu nghiên cứu.- Độc tố VK tả (cholera toxin- CT) (Sigma,Hoa Kỳ).- Hoá chất, sinh phẩm chủ yếu: hóa chất- Đo mật độ quang (OD) của các giếngtại bước sóng 492 nm.* Ph¶n øng ELISA đánh giá hoạt tính củakháng thể IgY kháng CT-B:chạy điện di SDS-PAGE; GM1, cộng hợp CTB- Ủ 50 µl GM1 (100 pmol/ml) trong mỗi giếng(cholera toxin-B subunit)- HRP (horse radishcủa phiến ELISA trong 2 giờ ở nhiệt độ phòng.peroxidase) (Bio-Rad, Hoa Kỳ; Sanofi, Pháp).- Bổ sung cộng hợp HRP-CTB cùng với2. Phương pháp nghiên cứu.kháng thể IgY phân lập từ lòng đỏ trứng gà* Gây miễn dịch cho gà mái với khánggây miễn dịch với kháng nguyên CT. Giếng đốinguyên ĐTT và phân lập IgY:- Tạo kháng nguyên ĐTT: trộn huyềndịch ĐTT với tá chất freund hoàn chỉnhchứng âm, sử dụng BSA thay cho IgY. Bêncạnh đó, I Ig (intravenous immunoglobulin) đượcsử dụng như đối chứng dương trong thí nghiệm.hoặc không hoàn chỉnh (tỷ lệ 1:1 về thể- Rửa phiến ELISA bằng PBS-T. Bổ sung ...