Định danh tế bào đầu dòng tiết dopamin trên phôi chuột cống trắng marker vimentin và thyroxin hydroxylase

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm định danh quần thể tế bào đầu dòng tiết dopamin ở não giữa phôi chuột cống trắng. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Định danh tế bào đầu dòng tiết dopamin trên phôi chuột cống trắng marker vimentin và thyroxin hydroxylaseTẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ HÌNH THÁI HỌC-2017ĐỊNH DANH TẾ BÀO ĐẦU DÒNG TIẾT DOPAMIN TRÊN PHÔICHUỘT CỐNG TRẮNG MARKER VIMENTIN VÀTHYROXIN HYDROXYLASENguyễn Thị Bình*; Nguyễn Phúc Hoàn*Nguyễn Thanh Hoa*; Nguyễn Mạnh Hà*TÓM TẮTMục tiêu: định danh quần thể tế bào đầu dòng tiết dopamin ở não giữa phôi chuột cống trắng.Phương pháp: ống thần kinh não giữa phôi chuột cống trắng giai đoạn 12,5 - 13,5 ngày tuổi(E.12,5 - E.13,5) trích thủ từ phôi chuột một phần được nhuộm hóa mô miễn dịch với 2 markerlà vimentin và thyroxin hydroxylase (TH); một phần được phân lập, nuôi cấy trong môi trườngcơ bản (DMEM/F12; 1:1) có bổ sung b-FGF2, EGF và một số yếu tố tăng trưởng khác. Tiếp tụcnhuộm các tế bào thu được sau nuôi cấy với 2 marker trên. Kết quả: biểu hiện vimentin có ởhầu hết các tế bào ống thần kinh phôi chuột, giai đoạn E.13,5 dương tính mạnh hơn E.12,5.Biểu hiện TH bắt đầu thấy ở E.13,5. Sau nuôi cấy, các tế bào tăng sinh mạnh, hầu hết tế bàodương tính với vimentin, một số tế bào dương tính với TH.* Từ khoá: Tế bào đầu dòng tiết dopamin; Vimentin; Thyroxin hydroxylase.Identify Dopaminergic Precursor Cells in Rat’s Embryo by Vimentineand Thyroxin HydroxylaseSummaryObjectives: To identify dopaminergic precursor cells in rat mesencephalon tube by vimentineand thyroxin hydroxylase (TH). Methods: Rat mesencephalic cells from embryonic days 12.5 13.5 (E.12.5 - E.13.5) days were dissected, a half of pieces were immunostained with vimentineand TH’s markers; the others were isolated and cultured in the medium composed of DMEM/F12(1:1), supplemented with b-FGF2, EGF and growth factors. Harvest cells were immunostained withthese makers. Results: While vimentine was positive in almost all cells of the mesencephalontube, TH was not positive until E.13.5. Ventral mesencephalon cells were proliferated anddifferentiated after 6 - 8 days culture. A large number of harvest cells were positive with vimentinand some of them were positive with TH.* Keywords: Dopaminergic precursor cells; Vimentine; Thyroxine hydroxylase.ĐẶT VẤN ĐỀTrước đây, hệ thần kinh được coi là hệcơ quan “thầm lặng” nhất trong cơ thể docác tế bào không tiếp tục được tạo mớisau khi trẻ ra đời. Tuy nhiên, Joshep Almanvà CS tại Viện Nghiên cứu Massachusette(Hoa Kỳ) đ làm thay đổi quan điểm này khicông bố có tồn tại H3-thymidin, chất đánhdấu phân chia tế bào ở não chuột cống trắng* Trường Đại học Y Hà NộiNgười phản hồi (Corresponding): Nguyễn Phúc Hoàn (phuchoan85@gmail.com)Ngày nhận bài: 25/07/2017; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 30/08/2017Ngày bài báo được đăng: 01/09/2017179TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ HÌNH THÁI HỌC-2017trưởng thành (1962) [1]. Sau đó, nhiềunghiên cứu khác đ chỉ ra sự tồn tại củatế bào gốc thần kinh trong não [2]. Tế bàogốc có khả năng phân chia và phát triểnthành tế bào chuyên biệt các cơ quantrong cơ thể. Nếu như ở phôi là tế bàogốc vạn năng - chịu trách nhiệm hìnhthành nên những cơ quan, hệ cơ quan thìở cơ thể trưởng thành là những tế bàogốc đơn tiềm năng hoặc đa tiềm năng đóng vai trò trong việc thay thế tế bàothoái hóa, góp phần sửa chữa những cơquan, vùng cơ quan bị tổn thương. Nhưvậy, tế bào gốc nói chung và tế bào gốcthần kinh nói riêng có thể được phân lậptừ nhiều nguồn tế bào khác nhau: có thểrất sớm ngay từ lúc phôi của phôi nanghoặc từ phôi ở các giai đoạn phát triểnkhác nhau hoặc ở người trưởng thành.Chính vì thế, việc định danh tế bào phânlập được để nhận biết chính xác nguồntế bào đang sử dụng là một thách thứclớn với các nhà khoa học. Với tế bàogốc thần kinh, rất nhiều marker có thểsử dụng như: nestin, vimentin, musashi 1,SOX1, PAX6… [3]. Tuy nhiên, chưa cómarker nào thực sự đặc hiệu, do đó việcsử dụng phối hợp nhiều marker sẽ giúptăng giá trị chẩn đoán dương tính của xétnghiệm. Nằm trong đề tài nghiên cứu ứngdụng quy trình phân lập tế bào gốc nãogiữa thần kinh phôi chuột để điều trị bệnhParkinson thực nghiệm, chúng tôi sử dụnghai marker là vimentin và TH để nhận biếttế bào đầu dòng tiết dopamin các tế bàođược lấy từ não giữa phôi chuột cống trắng.ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU1. Đối tượng nghiên cứu.Phôi chuột cống giai đoạn 12,5 - 13,5 ngày tuổi (E.12,5 - E.13,5).2. Phương pháp nghiên cứu.* Mô hình nghiên cứu:Tạo phôi chuộtNão giữa phôi chuộtE.12,5 - E.13,5Nhuộm hóa mô miễndịch với vimentin và THPhân lập và nuôi cấytăng sinh* Tạo phôi chuột:- Chuột cống đực và cái trưởng thành được nhốt qua đêm (từ 19 giờ ngày hôm trướctới 8 giờ sáng ngày hôm sau).- Kiểm tra phiến đồ âm đạo chuột vào buổi sáng hôm sau. Nếu có tinh trùng trongâm đạo, chuột cái được coi là có thai ngày 0,5. Nếu không, coi như không có thai.- Phẫu tích lấy phôi chuột vào thời điểm E.12,5 - E.13,5.180TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ HÌNH THÁI HỌC-2017* Trích thủ mô não giữa ...