Định lượng aflatoxin M1 trong sữa thô bằng phương pháp LC-MS/MS

Nghiên cứu trình bày phương pháp xác định aflatoxin M1 trong sữa bò tươi và ứng dụng phân tích aflatoxin trong 20 mẫu sữa bò thô tại Củ Chi, thành phố Hồ Chí Minh, Việt Nam. Mẫu được xử lý bằng kỹ thuật chiết lỏng lỏng dùng ethyl acetate (8 mL) và aflatoxin M1 được phân tích bằng phương pháp LC-MS/MS.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Định lượng aflatoxin M1 trong sữa thô bằng phương pháp LC-MS/MS Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 19 ĐỊNH LƯỢNG AFLATOXIN M1 TRONG SỮA THÔ BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS Nguyễn Thị Thu1,2*, Nguyễn Thị Yến1, Trần Thị Kiều Anh2 1 Phân Viện Chăn nuôi Nam bộ 2 Trường Đại học Bách Khoa TP.HCM * Nguyễn Thị Thu, Email: thunguyen102287@gmail.com TÓM TẮT Nghiên cứu trình bày phương pháp xác định aflatoxin M1 trong sữa bò tươi và ứng dụng phân tích aflatoxin trong 20 mẫu sữa bò thô tại Củ Chi, thành phố Hồ Chí Minh, Việt Nam. Mẫu được xử lý bằng kỹ thuật chiết lỏng lỏng dùng ethyl acetate (8 mL) và aflatoxin M1 được phân tích bằng phương pháp LC-MS/MS. Giới hạn phát hiện (LOD) của phương pháp là 0,01 μg/L và giới hạn định lượng (LOQ) là 0,025 μg/L. Độ thu hồi trung bình của phương pháp từ 82,6 % - 98,9 %, độ lệch chuẩn tương đối (RSD) từ 2,3 % - 7,3 %. Khoảng tuyến tính rộng của đường chuẩn từ 0,025 μg/L - 2 μg/L với hệ số tương quan R2 = 0,998. Phương pháp phù hợp để phân tích hàm lượng vết aflatoxin M1 trong sữa theo qui định của châu Âu vì quy trình đơn giản, nhanh, ít tốn kém và cho độ chính xác. Từ khóa: LC-MS/MS, sữa tươi, chiết lỏng-lỏng, Aflatoxin M1 ABSTRACT A validated analytical method for the determination of aflatoxine M1 in raw milk was described and applied to 20 raw milk samples in Cu chi, Ho Chi Minh city, Vietnam. Sample preparation based on liquid – liquid extraction using ethyl acetate (8 mL) and aflatoxine M1 was analyzed by LC-MS/MS. Limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) of the method were 0.01 µg/L and 0.025 µg/L, respectively. Average revoveries of aflatoxine M1 in milk at three spiked concentrations from 0.025 µg/L to 5 µg/L ranged from 82.6 % to 98.9% with the relative standard deviation (%RSD) were from 2.3% to 7.3%. A wide range of linearity of standard curve was obtained from 0.025 µg/L – 2 µg/L with R2 = 0.998. The reliable, rapid, easy and cheap method permitted to determine aflatoxin M1 in raw milk, in compliance with European Regulation (No 165/2010). Keywords: LC-MS/MS, raw milk, liquid – liquid extraction, Aflatoxin M1 Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 20 TỔNG QUAN Vấn đề an toàn thực phẩm hiện nay đang thu Aflatoxin là độc tố tự nhiên chủ yếu được sản hút rất nhiều sự quan tâm của xã hội. Ngày xuất bởi hai loại nấm mốc: Aspergillus flavus càng có nhiều vụ ngộ độc do ăn phải thức ăn và Aspergillus parasiticus. Trong đó, nhiễm độc. Bên cạnh những chất độc mà con Aspergillus flavus là phổ biến rộng rãi trong tự người cố ý cho vào thực phẩm thì còn có các nhiên và thường được tìm thấy khi các loại ngũ độc tố tự nhiên sản sinh trong quá bảo quản và cốc được phát triển trong điều kiện nóng ẩm. chế biến như là các độc tố nấm mốc aflatoxin. Có ít nhất 13 loại aflatoxin khác nhau được Đối với động vật, tác hại của aflatoxin là gây hình thành trong tự nhiên với aflatoxin B1 được nên các bệnh trên móng hay trên khớp bò sữa, coi là độc nhất. Sau khi bò ăn thức ăn nhiễm giảm tăng trọng hay giảm khả năng sinh sản aflatoxin B1 vào thì khoảng 0,3 – 6,2 % được (Whitlow và Hagler, 2010). Đối với con người, bài tiết qua sữa dưới dạng aflatoxin M1 bệnh do nhiễm aflatoxin cấp tính biểu hiện chủ (AFM1). AFM1 được phát hiện sau khi bò ăn yếu là suy chức năng gan cấp, xơ gan và hoại aflatoxin B1 và đạt hàm lượng cao nhất sau 2- tử nhu mô gan. Một loạt các nghiên cứu cho 3 ngày, không phát hiện sau 3 ngày không ăn thấy tỷ lệ mắc ung thư gan nguyên phát tăng ở thức ăn nhiễm aflatoxin [Bakirci, 2001 và những vùng có tỷ lệ phơi nhiễm cao với Hamid, 2011). Aflatoxin không bị phân hủy aflatoxin, nhưng cơ chế tác động của aflatoxin trong quá trình xử lý (thanh trùng, đun nấu) và gây ung thư gan ở người như thế nào vẫn còn bảo quản sữa hay các quá trình chế biến các sản nhiều tranh cãi. Ngoài ra, aflatoxin còn được phẩm từ sữa (Galvano F, 1996). chứng minh là có ảnh hưởng tới sự còi cọc, kém phát triển ở thai nhi và trẻ em (Gong YY AFM1 có công thức phân tử C17H12O7, nhiệt độ và ctv, 2004). nóng chảy 299 oC, nhiệt độ sôi 644 oC, rất ít tan trong nước và dễ tan trong các dung môi hữu cơ. Hình 1. Công thức cấu tạo của AFM1 Giới hạn tối đa cho phép (MRL) của AFM1 phẩm từ sữa. AFM1 trong sữa thường được trong sữa là 0,5 μg/L (0,5 ppb) theo tiêu chuẩn chiết lỏng lỏng (LLE) với dung môi hữu cơ (A. Việt Nam (theo Quy Chuẩn Quốc Gia đối với Biancardi và ctv, 2013; Nicolás Michlig và ctv, giới hạn ô nhiễm độc tố vi nấm trong thực 2015), chiết pha rắn (SPE) dùng cột C8 phẩm- QCVN 8-1:2011/BYT) và là 0,05 μg/L (Manetta, 2005) hay cột miễn dịch (Iha và ctv, theo tiêu chuẩn Châu Âu (No 165/2010) 2011) và phân tích bằng phương pháp sắc ký lỏng (LC) với đầu dò huỳnh quang (có tạo dẫn Rất nhiều phương pháp phân tích đã được phát xuất) (Iha và ctv, 2011) hay đầu dò khối phổ triển để phân tích AFM1 trong sữa và các sản (MS) (Chen WL và ctv, 2011) Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 21 Phương pháp LC – tạo dẫn xuất trước hay sau có LOD là 0,005 µg/kg, LOQ là 0,02 µg/kg với cột – đầu dò huỳnh quang kết hợp kỹ thuật chiết hiệu suất thu hồi trung bình 88,8 -100,6 ...