Định lượng doxorubicin trong huyết tương chuột bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng doxorubicin (DOX) trong huyết tương chuột, ứng dụng trong đánh giá sinh khả dụng, tương đương sinh học của các chế phẩm chứa DOX trên thực nghiệm.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Định lượng doxorubicin trong huyết tương chuột bằng sắc ký lỏng hiệu năng caoT¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 6-2017ĐỊNH LƯỢNG DOXORUBICIN TRONG HUYẾT TƯƠNG CHUỘTBẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAOBùi Bá Minh*TÓM TẮTMục tiêu: xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng doxorubicin (DOX) trong huyếttương chuột, ứng dụng trong đánh giá sinh khả dụng, tương đương sinh học của các chế phẩmchứa DOX trên thực nghiệm. Phương pháp: xây dựng và thẩm định phương pháp định lượngDOX trong huyết tương chuột bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) theo hướng dẫn củaFDA. Kết quả: đã xây dựng được quy trình định lượng DOX bằng HPLC với các điều kiện sau:xử lý mẫu bằng tủa protein với acetonitril; cột Gemini C18; 5 µm, 250 x 4 mm; pha động:acetonitril - amoni nitrat 0,25 g/l trong nước với tỷ lệ 30:70 (v/v); tốc độ dòng 1,0 ml/phút;detector: PDA ở 232 nm; thể tích tiêm mẫu: 10 µl; thời gian chạy: 10 phút; nội chuẩn làdaunorubicin 8 µg/l. Phương pháp có độ đặc hiệu, chọn lọc tốt, thời gian lưu của DOX trungbình 3,5 phút, tách biệt hơn daunorubicin với thời gian lưu trung bình 5,7 phút. Mẫu trắng cóđáp ứng nhỏ hơn 5% so với mẫu chuẩn và nội chuẩn. Độ lặp lại tốt với độ lệch chuẩn tương đối(RSD) trong ngày từ 2,1 - 3,8 % và khác ngày từ 3,62 - 4,68%. Độ đúng đạt 91,7 - 98,4% với2khoảng nồng độ từ 1 - 100 µg/l. Độ tuyến tính từ 1 - 100 µg/l với R là 0,9995. Giới hạn địnhlượng dưới 1 µg/l. Phương pháp xử lý mẫu có hiệu suất chiết cao (94,2 - 98,8%) với RSD < 4%.Mẫu huyết tương ổn định sau 3 chu kỳ đông - rã và trong quá trình xử lý mẫu. Kết luận: quytrình có thể áp dụng được để định lượng DOX trong huyết tương chuột.* Từ khóa: Doxorubicin; Huyết tương chuột; Sắc ký lỏng hiệu năng cao.Determination of DOX Concentration in Mouse Plasma by HighPerformance Liquid ChromatographySummaryObjectives: To develop and validate the method of DOX determination in mouse plasma toassess the bioavailability, the biological equivalence of the DOX-containing compositions.Methods: Development and validation a method of quantifying DOX in mouse plasma by HPLCaccording to FDA guidelines. Results: Analytical procedures: the sample is processed byprecipitating the protein with acetonitrile. Column gemini C18, 5 µm, 250 x 4 mm; mobile phase:acetonitrile - ammonium nitrate 0.25 g/L in water at a ratio of 30:70 (v/v); flow rate: 1.0 mL/min;detector: PDA at 232 nm; injection volume: 10 µL; runtime: 10 minutes; internal standard isdaunorubicin 8 µg/L. The method has a good selectivity, response of blank samples were 5%less than standard and internal standard samples. The precision was good with RSD intra-dayand inter-day during the day ranged from 2.1 to 3.8% and day to day ranged from 3.62 to 4.68%.* Bệnh viện Quân y 103Người phản hồi (Corresponding): Bùi Bá Minh (minh_phar@yahoo.com)Ngày nhận bài: 11/04/2017; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 07/08/2017Ngày bài báo được đăng: 10/087/2017154T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 6-2017The accuracy was 91.7 - 98.4% with concentrations ranging from 1 - 100 µg/L. The method has2a linearity of 1 - 100 µg/L with R of 0.998. LLOQ was 1 µg/L. The high extraction efficiency(94.2 - 98.8%) with RSD < 4% was obtained. Plasma samples were stable after 3 cycles offreezing and during sample processing. Conclusions: Analytical procedures should be applied toquantify DOX in mouse plasma.* Keywords: Doxorubicin; Mouse plasma; High performance liquid chromatography.ĐẶT VẤN ĐỀY học hiện đại đang chú trọng đếnhiệu quả điều trị của thuốc đối với từngbệnh nhân. Để làm được điều này, việcđịnh lượng nồng độ thuốc trong máu, dịchsinh học rất cần thiết. DOX là thuốcchống ung thư dùng phổ biến. Phươngpháp định lượng DOX trong chế phẩm đãcó trong Dược điển Mỹ, nhưng chưa cóphương pháp định lượng DOX trong dịchsinh học [4]. Khó khăn của việc địnhlượng trong dịch sinh học là nồng độthuốc thấp và ảnh hưởng của môi trường.Nghiên cứu này nhằm: Xây dựng và thẩmđịnh phương pháp định lượng nồng độDOX trong huyết tương chuột theo hướngdẫn của FDA, ứng dụng để đánh giá sinhkhả dụng, tương đương sinh học của cácchế phẩm chứa DOX trên thực nghiệm.ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Đối tượng nghiên cứu.Huyết tương chuột có chứa DOX.* Thiết bị và vật liệu:- Huyết tương chuột do Ban Cung cấpĐộng vật Thí nghiệm, Học viện Quân ycung cấp.- Chất chuẩn DOX hydrochlorid USPRS, lô L0K258, hàm lượng 99,8% vàdaunorubicin hydrochlorid USP RS, lôM1M099, hàm lượng 99,5% do Viện Kiểmnghiệm Thuốc TW cung cấp.2. Phương pháp nghiên cứu.* Xây dựng phương pháp phân tích:- Xây dựng quy trình xử lý mẫu bệnhphẩm: khảo sát phương pháp xử lý mẫu,chiết tách DOX để định lượng.- Xác định điều kiện sắc ký: dựa vàotài liệu tham khảo và điều kiện thực tế,tiến hành khảo sát các điều kiện sắc ký:cột sắc ký, thành phần pha động, chất nộichuẩn, thể tích tiêm mẫu, thời gian tiêmmẫu để định lượng DOX trong dịch sinhhọc.* Thẩm định phương pháp:Thẩm địn ...