Định nhóm kháng nguyên tiểu cầu ở quần thể người Kinh, miền Trung Việt Nam

Trong các nhóm glycoprotein trên màngtiểu cầu ng-ời GPIIb/IIIa, GPIa, GPIbavàGPIbò có các hệ thống kháng nguyên đặchiệu tiểu cầu (HPA) đ-ợc ký hiệu từ HPA-1đến HPA-13. Gen mã hoá cho mỗi hệthống HPA có hai alen khác nhau ở 1 cặpnucleotid dẫn đến sự thay thế 1 axit amint-ơng ứng. Tần số các gen này khác nhaugiữa các quần thể, ví dụ ở châu á tần sốcủa HPA-1a, HPA-2a, HP-3a & HPA-5acao hơn tần số của HPA-1b, HPA-2b vàHPA-5b. Tr-ớc đây, để xác định khángnguyên tiểu cầu, người ta đã sử dụng cáckỹ thuật huyết thanh học, tuy nhiên...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Định nhóm kháng nguyên tiểu cầu ở quần thể người Kinh, miền Trung Việt Nam TCNCYH 27 (1) - 2004 §Þnh nhãm kh¸ng nguyªn tiÓu cÇu ë quÇn thÓ ng−êi Kinh, miÒn Trung ViÖt Nam B¹ch Kh¸nh Hoµ 1 , TrÇn ThÞ Sinh 1 , Lª ThÞ Kim TuyÕn 2 1 Tr−êng §¹i häc Y Hµ Néi, 2 ViÖn VÖ sinh DÞch tÔ Trung −¬ng, Hµ Néi Trªn bÒ mÆt mµng tiÓu cÇu ng−êi cã c¸c kh¸ng nguyªn ®Æc hiÖu tiÓu cÇu (HPA-Human-Platelet-Antigen) liªn quan ®Õn mét sè héi chøng suy gi¶m tiÓu cÇu m¾c ph¶i. TÇnsè gen HPA cã sù sai kh¸c gi÷a c¸c quÇn thÓ. Trong nghiªn cøu nµy, b»ng ph−¬ng ph¸pPCR-SSP (Polymerase Chain Reaction- Specific Sequence Primer), chóng t«i b−íc ®Çux¸c ®Þnh tÇn sè HPA cña quÇn thÓ ng−êi Kinh sèng ë miÒn Trung ViÖt Nam. TÇn sè kiÓugen quan s¸t ®−îc nh− sau: 0.977 HPA-1a/a, 0.023 HPA-1a/b, 0.000 HPA-1b/b; 0.827HPA-2a/a, 0.161 HPA-2a/b, 0.011 HPA2b/b; 0.276 HPA3-a/a, 0.552 HPA-3a/b, 0.173HPA 3b/b; 0.920 HPA-5a/a, 0.080 HPA 5-a/b, 0.000 HPA 5b/b, cßn víi HPA-4 toµn bé 87mÉu biÓu hiÖn kiÓu gen HPA-4a/a.I. §Æt vÊn ®Ò c¸c h¹n chÕ trªn. Ban ®Çu, ng−êi ta sö Trong c¸c nhãm glycoprotein trªn mµng dông kü thuËt PCR-RFLP (PolymerasetiÓu cÇu ng−êi GPIIb/IIIa, GPIa, GPIbαvµ Chain Reaction-Restriction FragmentGPIbβ cã c¸c hÖ thèng kh¸ng nguyªn ®Æc Length Polymorphism) nh−ng kü thuËt nµyhiÖu tiÓu cÇu (HPA) ®−îc ký hiÖu tõ HPA-1 cÇn cã qu¸ tr×nh c¾t b»ng enzym giíi h¹n®Õn HPA-13. Gen m· ho¸ cho mçi hÖ nªn rÊt tèn kÐm, phøc t¹p vµ mÊt nhiÒuthèng HPA cã hai alen kh¸c nhau ë 1 cÆp thêi gian kh«ng phï hîp cho viÖc x¸c ®Þnhnucleotid dÉn ®Õn sù thay thÕ 1 axit amin nhanh HPA. HiÖn nay, kü thuËt PCR víit−¬ng øng. TÇn sè c¸c gen nµy kh¸c nhau cÆp måi ®Æc hiÖu (PCR-SSP) ®· ®−îcgi÷a c¸c quÇn thÓ, vÝ dô ë ch©u ¸ tÇn sè chøng minh lµ mét ph−¬ng ph¸p ®¬n gi¶n, tiÕt kiÖm, nhanh, cã ®é chÝnh x¸c cao cãcña HPA-1a, HPA-2a, HP-3a & HPA-5a thÓ x¸c ®Þnh ®ång thêi tÊt c¶ c¸c hÖ thèngcao h¬n tÇn sè cña HPA-1b, HPA-2b vµ gen HPA [1, 3]. ChÝnh v× thÕ, chóng t«i ®·HPA-5b. Tr−íc ®©y, ®Ó x¸c ®Þnh kh¸ng chän kü thuËt nµy ®Ó x¸c ®Þnh tÇn sè gennguyªn tiÓu cÇu, ng−êi ta ®· sö dông c¸c HPA cña quÇn thÓ ng−êi Kinh ë miÒnkü thuËt huyÕt thanh häc, tuy nhiªn kü Trung ViÖt Nam.thuËt nµy cã mét sè h¹n chÕ nh− kh«ng cãs½n c¸c kh¸ng huyÕt thanh ®Æc hiÖu, thêi II. VËt liÖu vµ ph−¬ng ph¸pgian thùc hiÖn ph¶n øng dµi vµ hay cã Chóng t«i ®· thu thËp 87 mÉu m¸u tõph¶n øng chÐo víi nhau. GÇn ®©y sù xuÊt nh÷ng ng−êi kh«ng cã quan hÖ huyÕthiÖn cña c¸c kü thuËt dùa trªn viÖc x¸c th«ng ë quÇn thÓ ng−êi Kinh miÒn Trung®Þnh gen m· ho¸ cho HPA ®· gi¶i quyÕt ViÖt Nam. Qu¸ tr×nh t¸ch chiÕt ADN tõ m¸u ngo¹i vi chèng ®«ng b»ng EDTA ®−îc thùc 1 TCNCYH 27 (1) - 2004hiÖn theo kü thuËt perchlorat sodium cña x¸c ®Þnh dùa vµo ph−¬ng tr×nh Hacdi-S.A.Miller, D.D.Kykes, H.F.Polesky (1988) Vanbec.[7]. C¸c måi cho ph¶n øng PCR ®−îc sö III. KÕt qu¶dông theo t¸c gi¶ Jau-Yi Lyou vµ céng sù TÊt c¶ 5 cÆp måi ®Òu cho s¶n phÈm[3]. ViÖc x¸c ®Þnh kiÓu gen HPA ®−îc tiÕn khuÕch ®¹i ®Æc hiÖu (¶nh 1). Thêi gian tõhµnh trong 2 ph¶n øng PCR riªng biÖt sö lóc b¾t ®Çu t¸ch chiÕt ADN cho ®Õn khidông 3 måi trong ®ã cã 1 måi chung vµ 2 hoµn thµnh ®iÖn di kiÓm tra s¶n phÈm lµ 4måi ®Æc hiÖu alen. §ång thêi, chóng t«i sö giê. S¶n phÈm PCR cña 5 cÆp måi khi ®iÖndông thªm cÆp måi HGH ®Ó khuÕch ®¹i di ®Òu cho b¨ng ADN chøng d−¬ng cñagen m· ho¸ cho hocm«n sinh tr−ëng ng−êi gen HGH (438 cÆp baz¬), vµ b¨ng ADNtrong tÊt c¶ c¸c ph¶n øng lµm chøng cña alen HPA cã kÝch th−íc tõ 196-252d−¬ng. Ph¶n øng PCR ®−îc thùc hiÖn cÆp baz¬. TÇn sè kiÓu gen HPA cña 87trong eppendorf 0.2ml víi tæng thÓ tÝch ng−êi cho m¸u ®−îc tr×nh bµy ë b¶ng 2.ph¶n øng lµ 10µl gåm: 1Xbuffer (10X), Trong sè 5 HPA, th× HPA-3 cã biÓu hiÖn2.5mM dNTPs, 0.5nM måi HPA, 0.05nM kiÓu gen dÞ hîp tö cao nhÊt 0.276 HPA-måi HGH, 0.5 ®¬n vÞ enzyme Taq 3a/a, 0.552 HPA-3a/b, 0.172 HPA-3b/b.polymerase cïng víi 10-15 ng ADN mÉu. Víi HPA-1, HPA-2, HPA-5 hÇu hÕt ®ångCh−¬ng tr×nh ch¹y nh− sau: 95oC: 10 gi©y, hîp tö a/a. Riªng HPA-4, toµn bé cã kiÓu13 chu kú (95o C: 10 gi©y, 63oC: 30 gi©y, gen HPA-4a/a.72oC: 30 gi©y), 22 chu kú (95oC: 10 gi©y, TÇn sè gen quan s¸t ®−îc nh− sau:58oC: 30 gi©y, 72oC: 30 gi©y), 72oC: 5 0.989 HPA-1a / 0.011 HPA-1b; 0.908phót, 4oC. HPA-2a / 0.092 HPA2b; 0.552 HPA-3a / S¶n phÈm PCR ®−îc ®iÖn di kiÓm tra 0.0448 HPA-3b; 0.960 HPA-5a / 0.040trªn gel agrose 2%, nhuém b»ng Ethidium HPA-5b. TÊt c¶ c¸c mÉu nghiªn cøu ®ÒuBromide vµ quan s¸t d−íi tia tö ngo¹i. Sù cã kiÓu gen HPA-4a. (B¶ng3).ph©n bè cña kiÓu gen, vµ tÇn sè gen ®−îc GiÕng 1 2 3 4 5 6 HGH (434bp) HPA-2 HPA-2 a b a b a b ¶nh 1: KÕt qu¶ ®iÖn di ...