Giới thiệu một số kỹ thuật bảo quản vi sinh vật

Một số phương pháp phổ biến sử dụng trong bảo quản các nhóm vi sinh vật cụ thể: 5.2. Bảo quản vi tảo: Vi tảo thông thường được bảo quản theo 3 phương pháp: Cấy truyền, lạnh sâu và đông khô. Các phương pháp đã được trình bày chi tiết trong phần vi khuẩn. Một sốđiểm cần chú ý khi bảo quản vi tảo là ở chỗ: Nên dùng tế bào già ở pha cân bằng, phương pháp lạnh sâu cho kết quả tốt hơn phương pháp đông khô....
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Giới thiệu một số kỹ thuật bảo quản vi sinh vật Giới thiệu một số kỹ thuật bảo quản vi sinh vật (tt)5. Một số phương pháp phổ biếnsử dụng trong bảo quản các nhómvi sinh vật cụ thể:5.2. Bảo quản vi tảo: Vi tảo thông thường được bảoquản theo 3 phương pháp: Cấytruyền, lạnh sâu và đông khô. Cácphương pháp đã được trình bày chitiết trong phần vi khuẩn. Một sốđiểm cần chú ý khi bảo quản vi tảolà ở chỗ: Nên dùng tế bào già ở phacân bằng, phương pháp lạnh sâucho kết quả tốt hơn phương phápđông khô.5.3. Các phương pháp dùng chobảo quản nấm sợi: a. Phương pháp cấy truyền: Phương pháp này thườngđược ứng dụng với các sợi nấm cóbào tử. Các chủng nấm sợi đượcnuôi trên môi trường thạch thíchhợp và để cho sợi nấm phát triểnđến mức độ cực đại, sau đó là quátrình hình thành bào tử, các ốnggiống này sẽ được bảo quản theocác cách khác nhau: - Các ống thạch được để trong tủ lạnh (4-7 OC). - Bảo quản trong thạch dưới lớp dầu: Các ống thạch được bảo quản dưới lớp dầu parafin có tỷ trọng tương đối là 0.83- 0.89 đã được khử trùng ở O nhiệt độ 121 C trong 15 phút. Lớp dầu cách bề mặt thạch khoảng 1 cm. Nhiệt độ bảo quản là 15-20 OC. - Bảo quản trong nước, nấm sợi được nuôi trên môi trường thạch đĩa. Sau khi sợi phát triển cực đại thì cắt thành từng miếng nhỏ kích thước khoảng 6 mm2 và cho vào lọ nước đã thanh trùng. Bảo quản tại nhiệt độ phòng.b. Bảo quản nấm sợi có bào tử trong silicagel:Chuẩn bị:1, Lọ đựng silicagel (10-15ml)có nắp chịu nhiệt (sắt hay nhựa)thanh trùng ở nhiệt độ 170 OCtrong 3 giờ.2, Silicagel: Loại trong suốt,không có màu, kích thước và sốlượng hạt silicagel đưa vàokhông quá 1/3 thể tích của lọ, °thanh trùng ở nhiệt độ 170 Ctrong 3 giờ. 3, Môi trường sữa tách bơ (Skimmilk) 20% khử trùng ướt O (115 C/20 phút). 4, Ống thạch nghiêng (có thể đĩa petri) chứa bào tử nấm sợi, tuỳ theo từng chủng, môi trường nuôi cấy mà thời gian thu bào tử thích hợp khác nhau (10-15 ngày). Cách tiến hành: 1, Dùng pipet pasteur lấykhoảng 3-4 ml sữa thanh trùng chovào ống nghiệm chứa bào tử nấmsợi, dùng que cấy tạo dịch huyềnphù bào tử có mật độ cao nhất (đốivới một số chủng có số lượng bàotử thấp thì có thể tạo dịch bào tử từmột vài ống thạch bào tử khácnhau). 2, Dùng pipet pasteur lấy dịchbào tử cho vào lọ đựng silicagel.Chú ý silicagel hút nước và sinhnhiệt do đó việc đưa dịch bào tửvào phải được thực hiện trong chậunước đá. Lượng dịch bào tử đưavào không vượt quá 1/3 thể tích hạtsilicagel trong lọ. Sau đó dùng taylắc đều đảm bảo các hạt silicagelđều dính dịch bào tử nấm sợi. Dánnhãn, ghi các thông tin cần thiếtnhư số mã chủng, ngày bảo quản,môi trường và nhiệt độ thích hợp... 3, Lọ silicagel được đậy nắpcẩn thận nhưng không vặn chặt(nới 1,5 vòng) sau đó giữ trongbình hút ẩm (độ ẩm 35-40%), 25OCtrong 1 tuần. Vặn chặt nút và quấngiấy parafil giữ trong 4OC. Kiểm tra độ sống sót sau khibảo quản: Mẫu silicagel ở 4 °C, dùngque cấy vô trùng lấy ra 3 hạtsilicagel để trên mặt thạch môitrường mầm thóc (Maltagar), lắcđều cho hạt silicagel tiếp xúc lênmặt môi trường. Để ở nhiệt độthích hợp, kiểm tra tra khuẩn lạcnấm theo thời gian thích hợp. c. Bảo quản nấm sợi có bào tử theo phương pháp đông khô (freez-drying): Chuẩn bị: 1, Ống đông khô rửa sạch(sonic cleaner) trong 15 phút sau đó Okhử trùng 170 C trong 3 giờ. 2, Môi trường sữa tách bơ(Skimmilk) 20% khử trùng ướt(115OC/20 phút). 3, Ống thạch nghiêng (có thểđĩa petri) chứa bào tử nấm sợi, tuỳtheo từng chủng môi trường nuôicấy mà thời gian thu bào tử thíchhợp khác nhau (10-15 ngày). Cách tiến hành: 1, Dùng pipet pasteur lấykhoảng 3-4 ml sữa thanh trùng chovào ống nghiệm chứa bào tử nấmsợi, dùng que cấy tạo dịch huyềnphù bào tử có mật độ cao nhất (đốivới một số chủng có số lượng bàotử thấp thì có thể tạo dịch bào tử từmột vài ống thạch bào tử khácnhau). 2, Dùng pipet pasteur lấy dịchbào tử cho vào ống đông khô (0,2 -0,3 ml), thông thường chuẩn bị 13ống cho mỗi chủng. Dán nhãn, ghicác thông tin cần thiết như mã sốchủng, ngày bảo quản, môi trườngvà nhiệt độ thích hợp. Sau đó đậybằng nút bông hay giấy bạc. 3, Giữ ở -80°C trong 3 giờtrước khi tiến hành đông khô, đồngthời bật máy Dura-Stop, khi nhiệtđộ đạt -40OC, đưa mẫu vào tủ đôngkhô của Dura-Stop, bật máy Dura-Dry, khi mức độ chân không đạt 45minitor, nhiệt độ -55OC, tăng nhiệt Ođộ Dura-Stop lên -5 C, để quađêm. 4, Tăng nhiệt độ Dura-Stoplên 25°C, khi đạt nhiệt độ cần thiết,tắt máy hút chân không nhưngkhông tắt Dura-Dry. 5, Tắt Dura-Stop, lần lượt nốitube mẫu vào hệ thống manifold,bật máy Dura-Dry, tiến hành hànống khi độ chân không đạt 45-48minitor, nhiệt độ -55OC. Chú ý: Trong trường h ...