Khảo sát đặc điểm phân tử gen LMP-1 của virut epstein-barr và methyl hóa promoter của gen RASSF1A ở một số mẫu ung thư vòm họng tại Việt Nam

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm xác định đặc điểm cấu trúc phân tử gen LMP-1 của một số chủng EBV phân lập từ bệnh nhân ung thư vòm họng ở Việt Nam. Phân tích liên quan bệnh lý của gen mãhóa LMP-1 protein với quá trình methyl hóa gen RASSF1A trên BN ung thư vòm mũi họng.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Khảo sát đặc điểm phân tử gen LMP-1 của virut epstein-barr và methyl hóa promoter của gen RASSF1A ở một số mẫu ung thư vòm họng tại Việt NamTẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2013KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM PHÂN TỬ GEN LMP-1 CỦAVIRUT EPSTEIN-BARR VÀ METHYL HÓA PROMOTER CỦA GENRASSF1A Ở MỘT SỐ MẪU UNG THƢ VÒM HỌNG TẠI VIỆT NAMLê Thanh Hà*; Nguyễn Lĩnh Toàn**; Võ Thị Thương Lan***Nguyễn Đình Phúc*****; Lê Thanh Hòa*****TÓM TẮTTừ mô sinh thiết của 15 bệnh nhân (BN) được chẩn đoán ung thư vòm họng (UTVH), tách chiếtADN hệ gen EBV. Bằng phản ứng PCR, dòng hóa và giải trình tự, đã thu nhận được toàn bộ 5 chuỗiARN thông tin của gen LMP-1 (1083 - 1182 bp). Kết quả phân tích gen cho thấy vùng exon 1 ổn địnhcao và biến đổi tập trung vào các vùng exon 2 và 3. Đồng thời, nghiên cứu đã sử dụng kỹ thuậtMethylation-specific PCR (MSP) để khảo sát mức độ methyl hóa trên 15 mẫu mô bệnh này.RASSF1A là một gen ức chế khối u được chọn để khảo sát mức độ methyl hóa. Kết quả cho thấy:trong 15 mẫu bệnh phẩm UTVH, 12 mẫu (80%) có methyl hóa tại các đảo CpG thuộc vùng promotercủa gen RASSF1A. Khi so sánh tỷ lệ này với một số công trình nghiên cứu khác trên thế giới, chúngtôi nhận thấy methyl hóa trong nghiên cứu này chiếm tỷ lệ cao. Nghiên cứu đang được tiếp tục triểnkhai trên số lượng bệnh phẩm lớn hơn nhằm góp phần giải thích cơ chế bệnh sinh của UTVH do EBV.* Từ khóa: LMP-1; Kỹ thuật MSP; Methyl hóa ADN; Ung thư vòm họng.Characteristics of LMP-1 GENE molecular OF EPSTEINBARR VIRUS AND METHYLATION AT PROMOTERS OFRASSF1A FROM samples of NASOPHARYNGEALCARCINOMA IN VIETNAMSUMMARYGenomic DNA of Epstein-Barr virus was extracted from biopsy tissue of 15 patients withnasopharyngeal carcinoma (NPC). Using PCR, cloning and sequencing, the entire mRNA of theLMP-1 gene (1083 - 1182 bp) was obtained. The results showed that the genetic analysis of exon 1has high stability and mutations focused on the exons 2 and 3. We used Methylation-Specific PCR(MSP) to analyze the methylation in tissues from these patients. RASSF1A (tumor suppressor gene)was selected for examining the methylation. Hypermethylation in RASSF1A was found in 12 samples(80%). Generally, the hypermethylation of this gene in this study were rather high compared with otherequivalent studies. Our research is being carried out with larger samples in order to evaluate the useof DNA methylation status of these candidate genes as a potential biomarker for Vietnamese NPC.* Key words: LMP-1; MSP technique; DNA methylation; Nasopharyngeal carcinoma.* Bệnh viện 103** Học viện Quân y*** Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội**** Viện Tai Mũi Họng Trung ương***** Viện Khoa học Công nghệ Việt NamChịu trách nhiệm nội dung khoa học: PGS. TS. Trần Văn KhoaTS. Nguyễn Đặng DũngTẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2013ĐẶT VẤN ĐỀUng thư vòm họng là một khối u ác tínhxuất phát từ lớp biểu mô phủ của vùng vòmmũi họng. Nó là một trong những dạng ungthư hàng đầu ở các vùng địa lý như NamTrung Quốc, Đông Nam Á, Bắc Cực, TrungĐông, Bắc Phi và Việt Nam. UTVH cónguyên nhân phức tạp và đang được cácnhà khoa học tiếp tục nghiên cứu. Hiện nay,nguyên nhân của bệnh được tập trungthành ba nhóm chủ yếu là virut Epstein-Barr(EBV), di truyền và các yếu tố môi trường,tập quán sinh hoạt.Nhiễm tiềm tàng EBV là hiện tượng khởiđầu cho quá trình tiến triển ung thư. Đặctrưng của truyền nhiễm EBV chủ yếu làbiểu hiện của gen tiềm tàng, bao gồmEBNA-1, LMP-1, LMP-2 và EBER [6]. Trongcác gen và protein ảnh hưởng đến sự tiếntriển thành ung thư, LMP-1 có vai trò đặcbiệt quan trọng và đã được chứng minh làcó khả năng đơn phương gây ung thư trênchuột thực nghiệm [6]. LMP-1 chính là gentiềm ẩn đầu tiên của EBV được phát hiệncó chức năng chuyển đổi dòng và thay đổikiểu hình của tế bào [7].RASSF1A (Ras association domain family1 isoform A) là một gen ACUT nằm trongvùng 3p21.3 trên nhiễm sắc thể số 3 của bộgen người [4]. RASSF1A ức chế sự tăngtrưởng khối u trong cả in vitro, in vivo vàđược xem là một gen ACUT điển hình. Gennày được xác định vào năm 2000, nhưngđến nay đã có hơn 150 nghiên cứu chứngminh quá trình methyl hóa bất thường xảyra tại các đảo CpG thuộc vùng promotercủa RASSF1A diễn ra trong rất nhiều loạiung thư, như UTVH, phổi, vú, thận, dạ dày,bàng quang, tế bào thần kinh đệm [1].Tần số methyl hóa của một số gen cóthể phát hiện bằng phương pháp MSP(Methylation-Specific PCR) [5]. Phươngpháp này dựa trên sự khác biệt giữa cáctrình tự ADN bị methyl hóa và không methylsau khi xử lý ADN bằng dung dịch muốinatribisulfit. Quá trình xử lý ADN bằngnatribisulfite làm thay đổi trình tự ADN bằngcách chuyển đổi tất cả cytosin không bịmethyl hóa thành uracil, trong khi cytosinđã bị methyl hóa sẽ không thay đổi. Hai cặpmồi đặc hiệu được sử dụng để khuếchđại những vùng gen quan tâm bằng phảnứng PCR.Mục tiêu của đề tài:- Xác định đặc điểm cấu trúc phân tửgen LMP-1 của một số chủng EBV phân lậptừ BN UTVH ở V ...