Khảo sát khả năng phát triển của chủng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri bị đột biến gen Pura ở các khác nhau

Nghiên cứu được tiến hành nhằm xác định khả năng phát triển của chủng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri bị đột biến gen purA (E. ictaluri PAM) từ chủng E. ictaluri gây bệnh gan thận mủ cá tra ở đồng bằng sông Cửu Long, Việt Nam (E. ictaluri WT).
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Khảo sát khả năng phát triển của chủng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri bị đột biến gen Pura ở các khác nhauTạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sảnSố 4/2015KEÁT QUAÛ NGHIEÂN CÖÙU ÑAØO TAÏO SAU ÑAÏI HOÏCKHẢO SÁT KHẢ NĂNG PHÁT TRIỂN CỦA CHỦNG VI KHUẨNEDWARDSIELLA ICTALURI BỊ ĐỘT BIẾN GEN purA Ở CÁC ĐIỀU KIỆNBẢO QUẢN KHÁC NHAUASSESSTMENT OF DEVELOPMENT OF purA GENE KNOCKED-OUTEDWARDSIELLA ICTALURI STRAIN IN THE DIFFERENT STORE CONDITATIONSNguyễn Thị Chi1, Võ Văn Nha2Ngày nhận bài: 10/11/2014; Ngày phản biện thông qua: 21/12/2015; Ngày duyệt đăng: 25/12/2015TÓM TẮTNghiên cứu được tiến hành nhằm xác định khả năng phát triển của chủng vi khuẩn Edwardsiella ictaluribị đột biến gen purA (E. ictaluri PAM) từ chủng E. ictaluri gây bệnh gan thận mủ cá tra ở đồng bằng sông CửuLong, Việt Nam (E. ictaluri WT). Kết quả nghiên cứu cho thấy sự phát triển của chủng E. ictaluri PAM ở cácđiều kiện bảo quản khác nhau cũng tương tự như sự phát triển của chủng E. ictaluri WT. Số lượng tế bào chủngE. ictaluri PAM có thể tồn tại ở mật độ khoảng 108 cfu/ống ở điều kiện bảo quản bằng lạnh sâu -300C, nhiềuhơn so với việc bảo quản bằng thạch BHI nghiêng có và không có phủ dầu khoáng ở 40C sau 90 ngày bảo quản.Từ khóa: Edwardsiella ictaluri đột biến gen purA, gen purA, vắc xinABSTRACTThe study was conducted to determine the growth of purA gene knocked-out Edwardsiella ictaluri strain(E. ictaluri PAM) from pathogenic strains of E. ictaluri ESC catfish in the Mekong Delta, Vietnam (E. ictaluriWT). The results showed that in different storage conditions, the purA gene knocked-out strain (E. ictaluriPAM) had similar growth as the E. ictaluri WT. The number of E. ictaluri PAM strain cells was about 108 cfu/tube in cold storage conditions at -300C, that was higher than in inclined BHI agar none or under oil at 40Cafter 90 days.Keywords: purA gene knocked-out Edwardsiella ictaluri, purA gene, vaccineI. ĐẶT VẤN ĐỀTrên thế giới, các nghiên cứu đã phát hiệnra rằng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri là mộttác nhân gây bệnh quan trọng trên cá nheo ởMỹ, cá trê trắng ở Thái Lan và trên một số loàicá da trơn khác ở Indonesia, Trung Quốc [1].Ở Việt Nam, tại hội thảo bàn về tác nhân gâybệnh gan thận mủ trên cá tra do Bộ NN&PTNTtổ chức tại thành phố Hồ Chí Minh cũng đã12đi đến kết luận rằng: Vi khuẩn E. ictalurilà một tác nhân thực sự gây bệnh gan thậnmủ trên cá tra nuôi tại Việt Nam. Bệnh nhiễmkhuẩn gây bởi E. ictaluri đã làm tổn thất lớncho nghề nuôi cá da trơn ở Mỹ hàng năm từ20-30 triệu USD [6]. Ở Việt Nam, E. ictaluri làmchết cá tra nuôi từ 10-90%, gây thiệt hại lớncho người nuôi cá tra hàng năm [4]. Vi khuẩnE. ictaluri có đặc tính sinh miễn dịch rất mạnh [7].Nguyễn Thị Chi: Cao học Nuôi trồng thủy sản 2011 – Trường Đại học Nha TrangTS. Võ Văn Nha: Viện Nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản III Nha TrangTRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 85Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sảnSố 4/2015Thune và cộng sự (1997) đã tạo ra chủng vikhôngchọnlọcBHIA(BrainHeartkhuẩn E. ictaluri đột biến gen purA (LSU-E2),Infusion Agar), hãng Biorad - Mỹ và môi trườngchủng chủng E. ictaluri đột biến gen purAnuôi cấy chọn lọc EIM (Edwardsiella Ictaluri(LSU-E2) được đem thử nghiệm độc lực choMedium) theo Shotts và Waltman (1990) chothấy, cá thí nghiệm tiêm chủng LSU-E2 ởphân lập chủng E. ictaluri; Môi trường BHIBnồng độ 105 và 106 cfu/cá , có tỷ lệ chết tích(Brain Heart Infusion Broth), hãng Biorad - Mỹlũy của cá là 0% , trong khí đó với nồng độđược sử dụng để nuôi cấy tăng sinh chủngtiêm tương tự đối với chủng E. ictaluri hoangE. ictaluri.dại ban đầu thì tỷ lệ này tương ứng là 96,7%Ngoài ra, một số hóa chất, kháng sinh:và 100% [6]. Nghiên cứu này đã cung cấpKanamycin, colistin sulphate, thuốc nhuộmthêm căn cứ cho thấy khả năng phòng bệnhGram (cồn, acetone, fucsine, crystian violet),gan thận mủ cá tra của chủng E. ictaluri độtchlorin, NaCl, paraffin, cũng đã được sử dụngbiến gen purA bằng công nghệ đột biến gentrong nghiên cứu này.là chấp nhận được.Năm 2010-2012, chương trình công nghệsinh học cấp Nhà nước do Viện Nghiên cứuNuôi trồng Thủy sản III chủ trì đã tạo đượcdòng E. ictaluri đột biến gen purA (E. ictaluriPAM) nhược độc, có khả năng sinh đáp ứngmiễn dịch, làm nguyên liệu sản xuất vaccinephòng bệnh gan thận mủ cá tra bằng côngnghệ đột biến gen (knocked-out gene) [4].Tuynhiên, cho đến nay việc lưu giữ, bảo quảnchủng E. ictaluri đột biến gen purA chưa thấycó tài liệu đề cập. Nghiên cứu này nhằm xácđịnh khả năng phát triển của chủng vi khuẩnE. ictaluri đột biến gen purA ở các điều kiệnbảo quản khác nhau. Từ đó có được điều kiệnbảo quản phù hợp, phục vụ sản xuất vắc xin2. Phương pháp nghiên cứu2.1. Xác định các chỉ tiêu về hình thái củaE. ictaluriQuan sát khuẩn lạc vi khuẩn E. ictaluri:Vi khuẩn được nuôi cấy trên môi trường BHIA(Peptone: 10 g; Veal Brain heart extract: 12,5g; Beef Brain heart extract: 5 g; NaCl: 5 g;Disodium phosphate: 2,5 g; Glucose: 2 g; Agar:15 g; Nước cất cho đủ 1000 ml) ở nhiệt độ28oC, sau 48 giờ, quan sát hình dạng, màu sắckhuẩn lạc bằng mắt thường và đo kích thướckhuẩn lạc bằng thước đo có độ chính xácđến mm.Hình dạng, kích thước vi khuẩn E. ictaluri:Được xác định bằng phương pháp nhuộmnhược độc phòng bệnh gan thận mủ cá tra.Gram [5], soi và đo kích thước vi khuẩn trênII. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUvi thị kính, quan sát ở độ phóng đại 1000 lần.1. Vật liệuChủng E. ictaluri bị đột biến gen purAkính hiển vi (Olympus CX 31, Nhật) có gắn trắc2.2 Khảo sát khả năng phát triển của vi khuẩnđược lưu giữ trên thạch nghiêng BHI ở 40C(E. ictaluri PAM) từ chủng E. ictaluri chưa đột+ Vi khuẩn E. ictaluri đột biến gen purA (E.biến, gây bệnh gan thận mủ cá tra nuôi ở đồngictaluri PAM) và E. ictaluri chưa đột biến (E.bằng sông Cửu Long (E. ictaluri WT) có độc lựcictaluri WT) giữ đông ở -800C được đem nuôicao được cung cấp bởi đề tài cấp Nhà nướ ...