Lựa chọn phương pháp phân lập thích hợp cho tảo Microcystis aeruginosa

Mục tiêu của nghiên cứu này nhằm để xác định phương pháp phân lập thích hợp cho tảo Microcystis aeruginosa. Thí nghiệm được thực hiện với 2 phương pháp phân lập khác nhau: phương pháp pha loãng và nuôi cấy trên môi trường agar với thành phần dinh dưỡng B12, cường độ ánh sáng 2.000 lux, nhiệt độ 25 ºC, chu kỳ quang 12 sáng:12 tối.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Lựa chọn phương pháp phân lập thích hợp cho tảo Microcystis aeruginosaTạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sảnSố 1/2017THOÂNG BAÙO KHOA HOÏCLỰA CHỌN PHƯƠNG PHÁP PHÂN LẬP THÍCH HỢP CHO TẢOMicrocystis aeruginosaSELECTION OF SUITABLE ISOLATION METHOD FOR THE MICROALGAEMicrocystis aeruginosaNguyễn Thị Thúy1, Lê Minh Hoàng1, Trương Thị Bích Hồng1Ngày nhận bài: 14/6/2016; Ngày phản biện thông qua: 11/10/2016; Ngày duyệt đăng: 10/3/2017TÓM TẮTMục tiêu của nghiên cứu này nhằm để xác định phương pháp phân lập thích hợp cho tảo Microcystisaeruginosa. Thí nghiệm được thực hiện với 2 phương pháp phân lập khác nhau: phương pháp pha loãng vànuôi cấy trên môi trường agar với thành phần dinh dưỡng B12, cường độ ánh sáng 2.000 lux, nhiệt độ 25 ºC,chu kỳ quang 12 sáng:12 tối. Kết quả cho thấy, sau 16 ngày thí nghiệm, tảo Microcystis aeruginosa đạt thuầnchủng 100 % ở phương pháp pha loãng với tỉ lệ pha loãng 10-5, thậm chí, ở tỉ lệ pha loãng 10-4, độ thuần chủngcũng đạt 99 %. Trong khi đó, tảo Microcystis aeruginosa phân lập trong môi trường agar đạt độ thuần chủng100 % sau khi tiến hành phân lập lại nhiều lần. Thời gian tiến hành phân lập trên môi trường agar cũng lâuhơn so với phương pháp pha loãng. Như vậy, phương pháp pha loãng được xem là phù hợp hơn để phân lậpMicrocystis aeruginosa trong nghiên cứu này.Từ khóa: agar, Microcystis aeruginosa, B12, phương pháp phân lậpABSTRACTThe objectives of the study were to determine the suitable isolation method for Microcystis aeruginosa.Experiments were performed in two different isolation methods: diluted method and culturing algae on theagar medium, with culture condition of nutrient medium B12, light intensity of 2,000 lux, temperature of 25oC,light cycle of (12 light: 12 dark). After 16 days, the results showed that the best purification of Microcystisaeruginosa was in the diluted method which reached at 100% and 99% at the dilution ratio of 10-5 and 10-4.After re-isolating many times, the purification level of Microcystis aeruginosa was still at 100%. Moreover, thetime needed to isolate was also longer than that of diluted method. In conclusion, it can be suggested that thebest isolation method for Microcystis aeruginosa was diluted method applied in this study.Keywords: agar, Microcystis aeruginosa, B12, isolated methodI. ĐẶT VẤN ĐỀTrong số các loài vi khuẩn lam gây nở hoanước hồ, ao thì loài Microcystis aeruginosalà loài bắt gặp thường xuyên nhất. LoàiM. aeruginosa chứa độc tố thuộc nhómhepatotoxin (độc tố gan) cấu tạo từ các peptidmạch vòng có tên gọi là microcystin(MC) [5], [13].1Viện Nuôi trồng thủy sản - Trường Đại học Nha Trang76 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANGĐộc tố cũng gây ảnh hưởng xấu lên hai loạiprotein serine và threonin phosphatases [7],[8], [9].Với đặc điểm là tập đoàn bao gồm hàngnghìn tế bào riêng lẻ cỡ từ 2- 7 µm và mỗi tế bàođều chứa một không bào khí. Chính sự tập hợpcủa hàng nghìn không bào khí định vị trong vô sốTạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sảncác tế bào này giúp chúng nổi trên mặt nước vàthu nhận được nguồn ánh sáng mặt trời, thôngqua quá trình quang hợp tổng hợp sắc tố diệp lụctạo nên váng xanh trên mặt nước [10] .Trên thế giới cũng như ở nước ta đã cómột số phương pháp phân lập giống tảothuần chủng (Hilary Belcher and Erica Swale(1982) [11] , Nguyễn Thị Hương, 2001 [3], Cácphương pháp pha loãng, nuôi cấy trên môitrường thạch, nhặt tế bào bằng micropipet,…hiện đang được sử dụng phổ biến để phân lậpcác loài tảo. Tuy nhiên, mỗi loài tảo phù hợpvới các phương pháp khác nhau. Theo HoàngThị Bích Mai [1] phương pháp pha loãng phùhợp để phân lập Nitzschia longissima nhưngloài tảo Chlorella sp lại phát triển tốt nhất trênmôi trường thạch agar.Cho đến nay, chưa có một công trìnhnào nghiên cứu đầy đủ về phân lập loài tảoM. aeruginosa. các nhà khoa học mới chỉ phânlập bằng phương pháp nuôi cấy trên thạch agar[12]. Các phương pháp khác như nhặt tế bào,phương pháp pha loãng chưa được nói đến.Do đó, để lựa chọn được phương pháp phânlập phù hợp cho loài tảo M. aeruginosa thì việcnghiên cứu phương pháp phân lập thích hợp chotảo M. aeruginosa được chúng tôi thực hiện.II. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU1. Đối tượng, địa điểm và thời gian nghiên cứu1.1. Đối tượng nghiên cứuNgành CyanobaeteriaLớpCyanophyceaeBộChroococcalesHọMicrocystaceaeChiMicrocystisLoàiMicrocystis aeruginosa1.2. Địa điểm nghiên cứuPhòng Norad - Viện Nuôi trồng Thủy sản.1.3. Thời gian nghiên cứu:Từ tháng 6/2015 đến tháng 8/2015.2. Chuẩn bị các dụng cụ thí nghiệm- Nguồn nước: nước cất.- Dụng cụ thu mẫu: lưới vớt thực vật nổi,động vật nổi, chai nhựa và thùng xốp đựng mẫu.Số 1/20172.1. Môi trường nuôi tảoBảng 1. Môi trường dinh dưỡng B12 [12]Các chất dinh dưỡngNaNO3Nồng độ (mg/l)100 mgK2HPO410 mgMgSO4.7H2O75mgCaCl2.2H2O40mgNa2CO320mgFerric citrate6mgDisodium EDTA. 2H2O1mgVTMVitamin B12Nồng độ (ml/l)0,1ml2.2. Vệ sinh các ...