Nghiên cứu ảnh hưởng của pH dung dịch đệm và nồng độ sudan B đối với phản ứng nhuộm lipid bạch cầu người

Bài viết tiến hành nghiên cứu tối ưu hóa quy trình nhuộm lipid tế bào bạch cầu người bằng phẩm màu sudan B dùng trong xét nghiệm để phân loại dòng tế bào ung thư máu. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu ảnh hưởng của pH dung dịch đệm và nồng độ sudan B đối với phản ứng nhuộm lipid bạch cầu ngườiTẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6-2014NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA pH DUNG DỊCH ĐỆMVÀ NỒNG ĐỘ SUDAN B ĐỐI VỚI PHẢN ỨNGNHUỘM LIPID BẠCH CẦU NGƢỜITrần Văn Tính*TÓM TẮTNghiên cứu tối ưu hóa quá trình nhuộm màu lipid bạch cầu người bằng sudan B. Quy hoạchhóa thực nghiệm theo mô hình mặt hai nhân tố: pH (X 1) và nồng độ sudan B (X2); hàm mục tiêulà điểm nhuộm lipid (Y) bằng phần mềm Modde 5.0. Phương trình hồi quy thu được: Y = 362,722+ 5,2 x X1 -10.5 x X2 - 26,3 x X1 (R = 0,985 với p > 0,95) và điều kiện nhuộm tối ưu: Nồng độsudan B là 0,20% pha trong dung dịch đệm với pH = 7,42. Hiệu suất nhuộm tốt nhất trong điềukiện tối ưu tìm được 95,10 ± 1,0% (p = 0,95).* Từ khóa: Nhuộm hóa học tế bào; Nhuộm sudan B; Nhuộm lipid.EFFECT OF pH AND B SUDAN SOLUTION ONLIPID STRAINING OF HUMAN LEUKOCYTESUMMARY60TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6-2014A research was conducted on the optimal conditions for the lipid of human leukocyte with sudanB solution. Experiments were designed by response surface modeling with two factors: pH (X 1)and sudan B concentrate (X2) to target lipid score function; Regression equation presents dependence2of lipid score on two factors quoted above as: Y = 362.7 + 5.2 x X1 -10.5 x X2 - 26.3 x X12 (R = 0.985with p > 0.95) and the optimal conditions of the lipid staining as: pH = 7.42, sudan B 0,20%.The best efficiency of the lipid staining in the above optimal conditions is found to be 95.10 ± 1.0%(p = 0.95).* Key words: Cytochemistry; Sudan B staining; Lipid staining.ĐẶT VẤN ĐỀLipid có trong tế bào bạch cầu người làeste của axít béo với ancol. Xác định cáclipid này bằng phản ứng màu với nhiềuloại phẩm màu: dầu đỏ, scharlach R,rodamin B, nile blue, sudan... Cơ chế củaphản ứng màu rất khác nhau, bao gồmkhuếch tán vật lý đơn thuần hoặc liênkết hóa học trực tiếp. Trong các loạithuốc nhuộm, sudan là một nhóm phẩmnhuộm được ưa chuộng để nhuộm lipidtừ vàng (sudan III) đến đen (sudan B) [3].* Bệnh viện 19-8Người phản hồi (Corresponding): Trần Văn Tính (tranvantinh@yahoo.com)Ngày nhận bài: 17/06/2014; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 28/07/2014Ngày bài báo được đăng: 11/08/2014Đối với máu ngoại vi, phản ứng nhuộmsudan B cho kết quả bạch cầu hạt dươngtính mạnh, monoxit dương tính yếu,lymphoxit và hồng cầu âm tính. Trong tủyxương bình thường, các tế bào dòng tủydương tính từ tiền tủy bào đến tế bàotrưởng thành, dòng monoxit chỉ dươngtính ở tế bào trưởng thành; mẫu tiểu cầuvà tiểu cầu dương tính ở các giai đoạn.Trong nhiều trường hợp mắc bệnh bạchcầu cấp, có thể phân biệt tương đối rõdòng tủy và những dòng tế bào khác bằngkết quả nhuộm sudan B. Kết quả dươngtính sudan B của mẫu bệnh phẩm thườngcho kết quả dương tính với kỹ thuật nhuộmperoxydase. Chính vì vậy, kết quả nhuộmsudan B là một trong những tiêu chuẩnđược ứng dụng để phân loại thể bệnh61trong bệnh bạch cầu cấp theo tiêu chuẩnFAB [2].Chayen (1968) cho rằng, mức độ bắtmàu chọn lọc của các thuốc nhuộm đốivới lipid phụ thuộc rất nhiều vào bản chấtlipid và đặc tính của thuốc nhuộm, thuốcđiều trị, hormon và điều kiện tiến hànhnhuộm [3]. Phản ứng nhuộm sudan B nóiriêng và nhuộm lipid nói chung có thể chokết quả tương đối khác nhau trong từngđiều kiện cụ thể. Vì vậy, việc nghiên cứutìm ra điều kiện tối ưu để tiến hành phảnứng, nhằm đảm bảo tính ổn định về mặtkỹ thuật, nâng cao chất lượng nhuộm vàgiảm chi phí là vấn đề có ý nghĩa khoa họcvà thực tiễn cần thiết. Mục tiêu của côngtrình này: Nghiên cứu tối ưu hóa quy trìnhnhuộm lipid tế bào bạch cầu người bằngTẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6-2014phẩm màu sudan B dùng trong xét nghiệmđể phân loại dòng tế bào ung thư máu.ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Đối tượng, dụng cụ và hóa chấtnghiên cứu.* Đối tượng nghiên cứu: bạch cầu lấytừ máu của người khoẻ mạnh có chứalipid. Máu sau khi lấy từ tĩnh mạch, tiếnhành dàn 14 tiêu bản không qua chốngđông, để khô trong điều kiện tự nhiên vàcố định ngay.* Dụng cụ: máy ủ nhiệt CW-20G 0 - 500C,độ chính xác ± 0,10C, máy đo pH inoLab730 với độ chính xác đến 10-3, cân phântích Sartorius TE214S có độ chính xác 10-4,kính hiển vi Nikon với độ phóng đại 1.000lần, pipet tự động của Hãng Thermo kèmđầu côn 0,2, 1,0 và 10 ml của Hãng Gilson.* Hóa chất: sudan B (Hãng SigmaAldrich); phenol (Hãng Sigma-Aldrich);axít citric 99,5% (Hãng Sigma-Aldrich);formaldehyd 37% ACS 99,5% (HãngSigma-Aldrich); ethanol 96% (HãngSigma-Aldrich); aceton ACS 99,5% (HãngSigma-Aldrich); Na2HPO4 (Hãng SigmaAldrich); Giemsa (Hãng Sigma-Aldrich).- Pha chế thuốc thử:+ Dung dịch cố định tiêu bản:++ Dung dịch citrat: 25 ml (lấy từ dungdịch 18 mmol axÝt citric + 9 mmol natri citratvà 12 mmol NaCl trong 1 lít).Na2HPO4 0,3% điều chỉnh pH bằng HCl0,1 M.+ Dung dịch nhuộm sudan pha theobảng 1 trong ethanol 96% và đệm phenolphosphat ở trên theo tỷ lệ 6:4.+ ...