Nghiên cứu chiết tách Albumin, yếu tố đông máu VIII từ huyết tương tươi đông lạnh

Nghiên cứu nhằm mục tiêu xây dựng quy trình chiết tách yếu tố đông máu VIII, albumin từ huyết tương tươi đông lạnh tại Việt Nam. Mẫu huyết tương sử dụng được kiểm tra theo tiêu chuẩn Dược điển Châu Âu 2013. Huyết tương tươi được đông lạnh nhanh, sau đó rã đông, ly tâm thu tủa lạnh để điều chế FVIII với độ tinh khiết trung gian và dịch nổi F. Mời các bạn cùng tham khảo!
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu chiết tách Albumin, yếu tố đông máu VIII từ huyết tương tươi đông lạnh NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH ALBUMIN, YẾU TỐ ĐÔNG MÁU VIII TỪ HUYẾT TƢƠNG TƢƠI ĐÔNG LẠNH Nguyễn Hữu Phước1, Võ Thanh Hải2, Võ Phùng Nguyên2, Trần Văn Bảo3 1 Khoa Dược, Trường Đại học Công nghệ TP. Hồ Chí Minh 2 Khoa Dược, Trường Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh 3 Trung tâm truyền máu huyết học, Bệnh viện Chợ RẫyTÓM TẮTNgày nay, ở các nước phát triển, việc sử dụng các sản phẩm từ máu trong điều trị bệnh là xu hướng pháttriển thay cho máu toàn phần. Nhu cầu sử dụng các sản phẩm từ huyết tương tại Việt Nam rất lớn. Trongkhi đó, các sản phẩm từ huyết tương trên thị trường vẫn phải nhập với giá cao. Nghiên cứu nhằm mục tiêuxây dựng quy trình chiết tách yếu tố đông máu VIII, albumin từ huyết tương tươi đông lạnh tại Việt Nam.Mẫu huyết tương sử dụng được kiểm tra theo tiêu chuẩn Dược điển Châu Âu 2013. Huyết tương tươi đượcđông lạnh nhanh, sau đó rã đông, ly tâm thu tủa lạnh để điều chế FVIII với độ tinh khiết trung gian và dịchnổi F. Phần dịch nổi được tiến hành tủa với ethanol lạnh để thu được albumin. Sản phẩm được đông khô,đóng gói. Kết quả thu được yếu tố VIII với độ tinh khiết trung gian đạt hiệu suất trên 60%, albumin sauđông khô có độ tinh khiết đạt đến 95% với hiệu suất trên 65%, đạt các tiêu chuẩn lý hóa theo dược điểnAnh 2013.Từ khóa: Albumin, ethanol lạnh, huyết tương tươi đông lạnh, tủa lạnh, yếu tố đông máu.1. GIỚI THIỆUỞ các quốc gia phát triển, chiết tách sản phẩm máu đã trở thành một công nghệ hiệnđại có tính hiệu quả và an toàn cao, giá trị điều trị bệnh và kinh tế lớn. Nhiều nước như Mỹ, Anh, Pháp,Đức, Hoa Kỳ, Nhật,… đã thành công trong việc chiết tách các sản phẩm như albumin, yếu tố VIII, γ-globulin từ huyết tương người dùng cho điều trị bệnh [7]. Nước ta đang có nguồn huyết tương an toàn,chất lượng cao [2] và lượng huyết tương chiết tách từ máu hàng năm rất lớn, nhưng rất lãng phí khi chỉdùng huyết tương toàn phần mà chưa có sản xuất các sản phẩm chiết tách từ huyết tương. Các sản phẩmhuyết tương dùng trên thị trường vẫn phải nhập với giá cao mà chưa có nơi nào nghiên cứu làm nguyênliệu dược. Trong khi đó, tại Việt Nam, nhu cầu sử dụng các sản phẩm huyết tương trong việc điều trị cácbệnh lý viêm gan, xơ gan, bệnh truyền nhiễm,…là rất lớn[11]. Vấn đề quan trọng nhất trong công việc sảnxuất, chiết tách, sử dụng nguồn huyết tương là phát hiện và kiểm soát được bệnh nhiễm trong nguồnnguyên liệu đầu vào. Trong thành phần máu người, albumin là protein có nhiều nhất trong máu. Bên cạnhđó, yếu tố đông máu VIII cũng đóng vai trò quan trọng trong quá trình đông máu [5]. Nồng độ trung bìnhcủa albumin trong máu khoảng 42 g/lít, đại diện cho khoảng 60% tổng protein huyết tương [8]. Trongnghiên cứu này chúng tôi tiến hành chiết tách yếu tố đông máu VIII và albumin từ huyết tương ngườiđông lạnh ở quy mô phòng thí nghiệm bằng quy trình sử dụng glycin và tủa ethanol lạnh theo quy trìnhCohn [4][6] tương ứng từ huyết tương người tình nguyện.4942. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU2.1. Đối tượng nghiên cứuĐối tượng nghiên cứu: Albumin huyết tương ngườiĐối tượng khảo sát: Huyết tương người đông lạnh, được lấy từ những người tình nguyện và sản xuất tạiTrung tâm truyền máu và huyết học bệnh viện Chợ Rẫy. Huyết tương được bảo quản ở -35 0C và đượctiến hành thí nghiệm trong vòng không quá 5 ngày.Hóa chất và thuốc thửEthanol nguyên liệu 96%, acid acetic, natri acetat, albumin chuẩn phân tích Merck, glycin, SDS, βME,Coomassie Brilliant Blue R-250, đệm Tris, CuSO4, natri carbonat, acid boric, acid acetic băng.Trang thiết bịBể ổn nhiệt JSWB-11T (JSR), cân phân tích ML204 (Mettler Toledo), máy khuấy từ Stuart UC151(Stuart), máy đo pH GLP-21 (Crison), máy ly tâm lạnh RC 12BP (Sorvall), máy đông lạnh nhanh (MicroCascade), bàn ép túi máu, máy hàn dây T-Seal II (Terumo), máy quang phổ UV-Vis (Hitachi), máy đôngkhô (Martin Christ).2.2. Phương pháp nghiên cứu2.2.1. Kiểm tra chất lượng huyết tương tươi đông lạnh2.2.2. Chiết tách – tinh chế yếu tố VIII độ tinh khiết trung gian2.2.2.1. Chiết tách tủa lạnh giàu yếu tố VIIIHuyết tương tươi được rã đông trong bồn nước ở 40C trong 16 giờ. Sau rã đông, tiến hành ly tâm 4000rpm/15 phút (40C). Nhanh chóng ép huyết tương để thu 2 phần riêng: tủa lạnh giàu yếu tố VIII và huyếttương nghèo yếu tố VIII (dịch nổi F).2.2.2.2. Điều chế yếu tố VIII cô đặcHòa tan tủa lạnh bằng nước muối sinh lý. Thêm dung dịch glycin vào dung dịch chứa yếu tố VIII để nồngđộ glycin cuối cùng đạt 1,4 M. Trộn đều và ủ ở 22 0C tr ...