Nghiên cứu định lượng adenosine trong đông trùng hạ thảo bằng phương pháp HPLC

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng adenosine trong Đông trùng hạ thảo bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Mời các bạn cùng tham khảo tài liệu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu định lượng adenosine trong đông trùng hạ thảo bằng phương pháp HPLCTẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2015NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƢỢNG ADENOSINE TRONGĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO (Cordyceps spp.)BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLCChử Văn Mến*; Vũ Tuấn Anh*; Nguyễn Văn Long*Nguyễn Thị Lan Hương*; Bùi Thị Thu Hà*TÓM TẮTMục tiêu: xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng adenosine trong Đông trùnghạ thảo bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Đối tượng: Đông trùng hạ thảo.Phương pháp: xác định điều kiện sắc ký để định lượng adenosine trong Đông trùng hạ thảobằng HPLC. Thẩm định phương pháp theo hướng dẫn của ICH. Kết quả: xác định được điều kiệnsắc ký thích hợp định lượng adenosine trong Đông trùng hạ thảo gồm: cột C18 Phenomenex(4,6 mm × 250 mm, 5 µm) với hệ dung môi pha động là dung dịch đệm phosphate và acetonitril,tỷ lệ 92/8, detector UV tại bước sóng 259 nm. Phương pháp được thẩm định đã đáp ứng yêucầu về tính tương thích hệ thống, chọn lọc đặc hiệu, khoảng tuyến tính, giới hạn định lượng(LOQ), giới hạn phát hiện (LOD), độ đúng, độ chính xác. Kết luận: đã xây dựng và thẩm địnhđược phương pháp định lượng adenosine trong Đông trùng hạ thảo bằng phương pháp HPLC.* Từ khóa: Đông trùng hạ thảo; HPLC; Adenosine.Determination of Adenosine in Cordyceps spp. by HPLCSummaryObjectives: Establishment and validation of adenosine quantification in Cordyceps spp. by highperformance liquid chromatography. Materials: Cordyceps spp. Methods: Determine chromatographicconditions for quantitation of adenosine in Cordyceps spp. using HPLC. The validation was carriedout in accordance with ICH guideline and USP-34. Results: The suitable chromatographicconditions for quantitation of adenosine in Cordyceps spp., including: C18 Phenomenex columns(4.6 mm x 250 mm, 5 µm) with mobile phase of phosphate buffer and acetonitrile, at the ratioof 92/8, the detection wave length of 259 nm. The quantitative method was validated on systemcompatibility, selectivity, linear range, limit of detection (LOD), limit of quantitation (LOQ), precisionand accuracy. Conclusion: The HPLC method for adenosine quantitation has been developedand fully validated in accordance with ICH guideline.* Key words: Cordyceps spp.; HPLC; Adenosine.ĐẶT VẤN ĐỀĐông trùng hạ thảo, một thuốc cổ truyềnnổi tiếng của Trung Quốc, có tên khoa họclà Cordyceps sinensis hoặc Cordycepsmilitaris, ký sinh trên ấu trùng một số loàicôn trùng và sâu chết. Đông trùng hạthảo phân bố chủ yếu ở một số tỉnh củaTrung Quốc như Tibet, Qinghai, Sichuan,Yunnan và Gansu. Đây là vị thuốc có nhiều* Học viện Quân yNgười phản hồi (Corresponding): Chử Văn Mến (chuvanmen@gmail.com)Ngày nhận bài: 24/06/2015; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 25/11/2015Ngày bài báo được đăng: 01/12/201518TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2015tác dụng quý và giá thành cao. Đông trùnghạ thảo dùng trong đông y có tác dụng bổthận, bổ khí điều trị các trường hợp mệtmỏi, mồ hôi về đêm, giảm năng lực tìnhdục, tăng đường huyết, tăng mỡ máu, vôlực sau khi ốm nặng, bệnh phổi, bệnhthận, suy thận, loạn nhịp tim và bện gan[1, 2]. Nghiên cứu dược lý học hiệu đạicho thấy: Đông trùng hạ thảo có tác dụngcải thiện nhiều hệ thống cơ quan của cơthể như tuần hoàn, miễn dịch, cơ quantạo máu, tim mạch, phổi và các tuyến nộitiết trong cơ thể [3, 4]. Cho tới nay, hoạtchất chính trong Đông trùng hạ thảo đượcxác nhận là nucleoside và adenosine làmột chỉ tiêu để đánh giá tiêu chuẩn chấtlượng của Đông trùng hạ thảo [3, 5].Adenosine có tác dụng dập tắt trạng tháikích thích của tế bào thần kinh trungương và ức chế giải phóng nhiều chấtdẫn truyền thần kinh tiền sinap [6, 7].Để đảm bảo hiệu quả chữa bệnh củaĐông trùng hạ thảo, việc đánh giá chấtlượng của Đông trùng hạ thảo rất quantrọng. Nghiên cứu này tiến hành: Định lượngadenosine trong Đông trùng hạ thảonhằm đánh giá chất lượng của loại dượcliệu này.NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Nguyên liệu, hóa chất và thiết bị.- Dược liệu: Đông trùng hạ thảo doPhòng Dược và các Hợp chất tự nhiên,Trung tâm Nghiên cứu Y Dược học Quânsự - Học viện Quân y cung cấp. Mẫu đượclưu tại Trung tâm Nghiên cứu Y Dược họcQuân sự, Học viện Quân y.- Hóa chất:+ Chất chuẩn adenosine (Shanghai TautoBiotech Co., Ltd. Trung Quốc).+ Ethanol 96, methanol... đạt tiêu chuẩntinh khiết phân tích.+ Acetonitril, đệm phosphate, nước cất2 lần: đạt tiêu chuẩn phân tích HPLC - Merck.- Thiết bị, dụng cụ:+ Bình chiết siêu âm Soniclean, bộ chiếthồi lưu dung môi.+ Máy HPLC Alliance Water 2695D;detector PDA.+ Cân phân tích Sartorius có độ chínhxác 0,1 mg.+ Bộ lọc hút chân không Alltech (Mỹ).+ Màng lọc nylon Sartorius Minisartkích thước lỗ lọc 0,45 µm.2. Phương pháp nghiên cứu.- Xây dựng phương pháp định lượngadenosine trong Đông trùng hạ thảo dựatrên đánh giá các thông số: tính tươngthích hệ thống, tính đặc hiệu, khoảngtuyến tính, độ lặp lại, độ đúng, giới hạnphát hiện và giới hạn định lượng dưới. ...