Nghiên cứu định lượng diltiazem trong huyết tương chó bằng phương pháp HPLC-MS/MS

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm xây dựng và thẩm định phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao - khối phổ (HPLCMS/MS) để định lượng diltiazem (DIL) trong huyết tương chó. Phương pháp: chiết DIL từ huyết tương chó bằng phương pháp chiết lỏng-lỏng.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu định lượng diltiazem trong huyết tương chó bằng phương pháp HPLC-MS/MST¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 8-2016NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG DILTIAZEM TRONGHUYẾT TƯƠNG CHÓ BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC-MS/MSNguyễn Văn Bạch*; Tạ Mạnh Hùng**TÓM TẮTMục tiêu: xây dựng và thẩm định phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao - khối phổ (HPLCMS/MS) để định lượng diltiazem (DIL) trong huyết tương chó. Phương pháp: chiết DIL từ huyếttương chó bằng phương pháp chiết lỏng-lỏng. Khảo sát các điều kiện sắc ký; lựa chọn nộichuẩn; thẩm định độ đặc hiệu, độ chọn lọc, khoảng tuyến tính, giới hạn định lượng dưới, hiệusuất chiết, nội chuẩn và độ ổn định của DIL theo các tiêu chí của FDA. Kết quả: chiết DIL từhuyết tương chó bằng phương pháp chiết lỏng-lỏng với hệ dung môi diethyleter-cloroform, nộichuẩn là felodipin (FELO); xác định được các điều kiện sắc ký như: cột, pha động, tốc độ dòng,detector. Phương pháp đã được thẩm định và đạt các tiêu chí theo quy định của FDA. Kết luận:có thể sử dụng phương pháp HPLC-MS/MS để định lượng DIL trong huyết tương chó khi đánhgiá sinh khả dụng của DIL trên chó thực nghiệm.* Từ khóa: Diltiazem; Huyết tương chó; HPLC-MS/MS.Quantitative Determination of Diltiazem in Dogs Plasma by HPLCMS/MSSummaryObjectives: To determine diltiazem (DIL) in dog plasma by high performance liquidchromatography-mass spectrometry (HPLC-MS/MS). Methods: A liquid-liquid extractiontechnique was used to extract DIL in dog plasma. Chromatographic conditions were studied;selection of internal standard; essessment of the specificity, selectivity, the linear range, lowerlimit of quantification, extraction efficiency, internal standard and stability of DIL following theguidance of FDA. Results: DIL in dog plasma was performed by liquid-liquid extraction withsolvent mixtures diethyl ether-chloroform, felodipin as internal standard; chromatographicconditions were established, including: column, mobile phase, a flow-rate, detector. The methodhas been evaluated and achieved the FDA’s regulations. Conclusion: The HPLC-MS/MSmethod can be used to determine the DIL in dog plasma, which would evaluate bioavailability ofthe DIL in experimental dogs.* Key words: Diltiazem; Dog plasma; HPLC-MS/MS.ĐẶT VẤN ĐỀDiltiazem là dược chất có tác dụngchẹn kênh canxi, làm giãn động mạch vành,cả mạch ngoại vi, làm giảm co bóp cơ tim,làm chậm nhịp tim, được sử dụng trongdự phòng và điều trị cơn đau thắt ngực [6].* Học viện Quân y** Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ươngNgười phản hồi (Corresponding): Nguyễn Văn Bạch (bachhvqy@yahoo.com)Ngày nhận bài: 04/04/2016; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 01/09/2016Ngày bài báo được đăng: 20/09/201629T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 8-2016Một số chức năng của hệ tim mạch cónhịp sinh học, nên các bệnh về tim mạchcũng có nhịp sinh học. Chúng tôi đã bàochế thành công viên nén DIL 60 mg giảiphóng theo nhịp để đáp ứng yêu cầu“nhịp sinh học” của loại bệnh này. Chếphẩm đạt tiêu chuẩn cơ sở theo các tiêuchí về viên nén của Dược điển Việt NamIV và của dạng thuốc giải phóng theonhịp. Việc xác định sinh khả dụng vàtương đương sinh học dựa vào các thôngsố dược động học của viên nén DIL 60 mggiải phóng theo nhịp mà chúng tôi bàochế được là cần thiết [4]. Nhằm mục đíchđánh giá sinh khả dụng trên chó thựcnghiệm, chúng tôi tiến hành: Xây dựng vàthẩm định phương pháp HPLC-MS/MS đểđịnh lượng DIL trong huyết tương chó [2].VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Nguyên liệu và thiết bị.* Nguyên liệu và hóa chất:- Diltiazem hydroclorid chuẩn: hàmlượng 99,9% (do Viện Kiểm nghiệmThuốc Trung ương cấp).- Felodipin chuẩn (nội chuẩn): hàmlượng 99,8% (do Viện Kiểm nghiệmThuốc Trung ương cấp).- Viên nén DIL 60 mg giải phóng theonhịp (tự bào chế) đạt tiêu chuẩn cơ sở.- Huyết tương chó trắng: do BanCung cấp Động vât thí nghiệm, Học việnQuân y cấp đạt tiêu chuẩn thử thuốc.- Các hóa chất khác đạt tiêu chuẩncho HPLC hoặc tinh khiết phân tích.* Thiết bị:Máy HPLC-MS/MS TSQ QuantumUltra (Thermo Scientific); máy lắc GPL3006 (Đức); cân phân tích Meller Toledo30có độ chính xác 0,1 mg và các dụng cụkhác đạt tiêu chuẩn phân tích.2. Phương pháp nghiên cứu.* Xây dựng phương pháp:- Xử lý mẫu huyết tương chó bằngphương pháp chiết lỏng-lỏng. Cụ thể: lấy1 ml huyết tương chó chứa 5 ng DIL và250 ng FELO chuẩn cho vào ống nghiệmchiết. Thêm 1,0 ml dung dịch amoniac 0,1 Mvà 7 ml hỗn hợp dung môi diethylethercloroform (7:3). Lắc đều trong khoảng 10phút, ly tâm, lấy lớp dung môi. Bốc hơidung môi dưới dòng khí nitơ, thu lấy cắn.Hòa tan cắn trong 1 ml pha động. Sau khilọc qua màng lọc 0,45 µm, tiêm vào cộtsắc ký 10 µl.- Điều kiện sắc ký: dựa vào tài liệu [1, 5],chúng tôi khảo sát các điều kiện sắc kýcủa phương pháp HPLC-MS/MS gồm:cột, nhiệt độ cột, pha động, tốc độ dòng,thể tích tiêm mẫu và kiểu phổ khối.* Thẩm định phương pháp định lượngDIL trong huyết tương:Theo hướng dẫn của FDA gồm cácphương pháp: thẩm định mẫu trắng, mẫuchuẩn, m ...