Nghiên cứu lựa chọn cặp kháng thể sử dụng cho chế tạo bộ xét nghiệm sắc ký miễn dịch phát hiện nhanh nọc rắn hổ mang Naja atra

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm lựa chọn cặp kháng thể cho chế tạo bộ xét nghiệm sắc ký miễn dịch phát hiện nhanh nọc rắn Hổ mang Naja atra (N. atra). Mời các bạn cùng tham khảo nội chung chi tiết của tài liệu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu lựa chọn cặp kháng thể sử dụng cho chế tạo bộ xét nghiệm sắc ký miễn dịch phát hiện nhanh nọc rắn hổ mang Naja atraTẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016NGHIÊN CỨU LỰA CHỌN CẶP KHÁNG THỂ SỬ DỤNG CHOCHẾ TẠO BỘ ÉT NGHIỆM SẮC KÝ MIỄN DỊCHPHÁT HIỆN NHANH NỌC RẮN HỔ MANG Naja atraNguyễn Ngọc uấn*;nh hanh Hùng**Nguyễn ung Nguyên***; Nguyễn Đặng Dũng*TÓM TẮTMục tiêu: lựa chọn cặp kháng thể cho chế tạo bộ xét nghiệm sắc ký miễn dịch phát hiệnnhanh nọc rắn Hổ mang Naja atra (N. atra). Đối tượng và phương pháp: từ 3 nguồn kháng thểđặc hiệu kháng nguyên nọc rắn Hổ mang N. atra, tiến hành đánh giá độ đặc hiệu và khả năngphát hiện kháng nguyên khi ghép cặp các kháng thể (bằng kỹ thuật ELISA và phương pháp thửnghiệm trực tiếp trên que nhúng). Kết quả: độ đặc hiệu của từng kháng thể với kháng nguyênnọc rắn N. atra khác nhau; cặp kháng thể đặc hiệu gồm IgG ngựa và IgG thỏ thể hiện khác biệtrõ rệt nhất và khi thử nghiệm trên que nhúng cho tín hiệu màu dương tính rõ nhất, không cóhiện tượng dương tính giả. Kết luận: có thể sử dụng cặp kháng thể IgG ngựa và IgG thỏ đặc hiệuvới nọc rắn N. atra cho phát triển xét nghiệm sắc ký miễn dịch phát hiện nhanh nọc rắn N. atra.* Từ khóa: Rắn Hổ mang; Naja atra; Sắc ký miễn dịch; Kháng thể.Study in Selecting a Pair of Antibodies for Development of anImmuno-Chromatographic Assay for Naja atra Snake Venom DetectionSummaryObjectives: To select a pair of antibodies for development of an immuno-chromatographicassay for Naja atra snake venom detection. Materials and methods: Each pair of antibodies(from 3 different antibodies against N. atra venom) was tested (by ELISA, and directly on thetesting stick) for their possible combination in development of a rapid immuno-chromatographicassay for N. atra venom detection. Results: There was difference in specificity of the 3 antibodiesto N. atra venom antigen. The pair of rabbit and horse IgGs against N .atra venom showed mostobvious difference, giving best color signal on testing stick without false positive result.Conclusions: The rabbit and horse IgGs against N. atra venom can be utilized for developmentof a rapid immuno-chromatographic assay for N. atra venom detection.* Key words: Snake venom; Naja atra; Immunochromatographic assay; Antibody.ĐẶT VẤN ĐỀTrong cấp cứu và điều trị nạn nhân rắnđộc cắn, việc xác định nhanh loài rắn gâytai nạn rắn độc cắn có ý nghĩa quan trọng,giúp chỉ định sử dụng huyết thanh khángnọc rắn đặc hiệu một cách chính xác vàkịp thời. Phương pháp được áp dụng phổbiến nhất hiện nay để xác định nọc rắn độc* Học viện Quân y** Bộ Khoa học và Công nghệ*** Bệnh viện Bạch MaiNgười phản hồi (Corresponding): Nguyễn Ngọc uấn (nguyenngoctuanmd@yhaoo.com)Ngày nhận bài: 29/10/2015; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 17/01/2016Ngày bài báo được đăng: 22/01/201635TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016là sử dụng kỹ thuật sắc ký miễn dịch dướidạng que thử (hay que nhúng), do tínhđơn giản và nhanh chóng của kỹ thuậtnày. Xét nghiệm sắc ký miễn dịch dạngque nhúng (lateral flow immunoassay LFIA) phát hiện nọc rắn dựa trên nguyênlý kết hợp đặc hiệu kháng nguyên - khángthể. Cụ thể, khi một đầu que thử đượcnhúng vào mẫu thử (hoặc mẫu thử đượcnhỏ lên một vị trí nhất định tại một đầuque thử), đánh dấu kháng thể thứ nhấtkháng nọc rắn bằng hạt nano vàng (còngọi là kháng thể bắt giữ) sẽ gắn vớikháng nguyên nọc rắn tương ứng trongmẫu thử (nếu có); phức hợp khángnguyên - kháng thể sẽ dịch chuyển trênmàng đệm của que thử về phía đầu kiacủa que thử dưới tác động của lực maodẫn; tại vị trí vạch phát hiện (test line) trênque thử, nơi có kháng thể thứ hai khángnọc rắn (còn gọi là kháng thể phát hiện)được cố định trước đó, phức hợp khángnguyên - kháng thể sẽ bị giữ lại do gắnkết của kháng thể thứ hai với khángnguyên nọc rắn (hình 1), dẫn đến các hạtnano vàng nano tập trung (gắn trên khángthể thứ nhất) và tạo nên hình ảnh 1 vạchcó màu đặc trưng tại vị trí vạch phát hiện,đồng nghĩa với kết quả phản ứng dươngtính.Hình 1: Cấu tạo và nguyên lý xét nghiệm sắc ký miễn dịch.Cặp kháng thể được lựa chọn để chế tạo bộ xét nghiệm cần phải có hoạt tínhkháng thể cao với kháng nguyên nọc rắn cần phát hiện [7]. Ngoài ra, cần lựa chọn cặpkháng thể sao cho có thể giảm thiểu phản ứng gắn cạnh tranh của 2 kháng thể vớikháng nguyên nọc rắn.Nghiên cứu này được thực hiện nhằm: Lựa chọn cặp kháng thể tốt nhất trong3 kháng thể đặc hiệu nọc rắn N. atra (do chúng tôi chế tạo và tinh sạch thành côngtrước đây) để phát triển bộ xét nghiệm sắc ký miễn dịch dạng que nhúng phát hiệnnhanh nọc rắn N. atra.36TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Vật liệu nghiên cứu.- Nọc rắn Hổ mang N. atra, Hổ đất, Hổchúa, Lục xanh, Chàm quạp.- Kháng thể IgG kháng nọc rắn Hổ mangN. atra từ ngựa, kháng thể IgG kháng nọcrắn Hổ mang N. atra từ thỏ và kháng thểIgY kháng nọc rắn Hổ mang N. atra từtrứng gà.- Các kháng thể khá ...