Nghiên cứu tác dụng kháng ung thư của chất CT-1 chiết xuất từ cây khổ sâm trên chuột thiếu hụt miễn dịch

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá tác dụng kháng ung thư của chất CT-1 chiết xuất từ cây Khổ sâm cho lá trên mô hình chuột thiếu hụt miễn dịch mang khối ung thư phổi người. Mời các bạn cùng tham khảo tài liệu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu tác dụng kháng ung thư của chất CT-1 chiết xuất từ cây khổ sâm trên chuột thiếu hụt miễn dịch TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2014 NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƢ CỦA CHẤT CT-1 CHIẾT XUẤT TỪ CÂY KHỔ SÂM CHO LÁ TRÊN CHUỘT THIẾU HỤT MIỄN DỊCH Trịnh Hồng Anh*; Cao Minh Hưng*; Hồ Anh Sơn**; Nguyễn Lĩnh Toàn** Phương Thiện Thương*; Nguyễn Minh Khởi*; Lê Tuấn Anh* TÓM TẮT Với liều 50 mg/kg thể trọng, chất CT-1 chiết xuất từ cây Khổ sâm cho lá có tác dụng dự phòng và điều trị ung thư phổi người tế bào không nhỏ (UTPNTBKN) trên chuột thiếu hụt miễn dịch, thể hiện: - Sau khi ghép tế bào (TB) ung thư, nhóm dự phòng có 20% chuột không xuất hiện khối u, trong khi nhóm chứng và nhóm điều trị 100% xuất hiện khối u. - Kích thước khối u ở nhóm điều trị nhỏ hơn nhóm chứng ở mọi thời điểm theo dõi. - Sau 3 tháng theo dõi, tỷ lệ chuột chết ở nhóm chứng là 100%, nhóm dự phòng 60%, nhóm điều trị 40%. * Từ khóa: Khổ sâm cho lá; Độc tính cấp; Độc tính bán trường diễn. Research about Anticancer of CT-1 Extracted from Croton tonkinensis Gagnep on Nude Mice Summary CT-1 extracted from Croton tonkinensis Gagnep with dose of 50 mg/kg has the effective in prevention and treatment of lung cancer on nude mice: - After cancer cell transplantation, 20% of mice in control group had no tumor, 100% of mice in prevention and treatment groups had tumor. - The volume of tumor in treatment group was smaller than the other groups at any times. - After 3 months: control goup: 100% of nude mice dead, prevention group: 60% of nude mice dead, treatment group: 40% of nude mice dead. * Key words: C. tonkinensis; Acute toxicity; Semi-chronic toxicity. ĐẶT VẤN ĐỀ Cây Khổ sâm cho lá có tên khoa học là Croton tonkinensis Gagnep, thuộc họ Thầu dầu (Euphorbiaceae), là một loại cây đặc hữu của Việt Nam được sử dụng làm thuốc chữa sốt rét, mẩn ngứa, lở loét, đau bụng đi ngoài (lỵ cấp tính), ăn không tiêu, viêm loét tá tràng, đau dạ dày. * Trường Đại học Khoa học Tự nhiên ** Học viện Quân y *** Viện Dược liệu Người phản hồi (Corresponding): Hồ Anh Sơn (hoanhsonhp@gmail.com) Ngày nhận bài: 10/11/2014; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 27/11/2014 Ngày bài báo được đăng: 28/11/2014 19 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2014 Các nghiên cứu về thành phần hóa học của cây Khổ sâm cho lá bắt đầu khoảng 20 năm trở lại đây cho thấy thành phần hóa học chính của lá Khổ sâm cho lá là ent-kauranediterpenoid, điển hình là ent-18-acetoxy-7β-hydroxy..kaur-15-oxo16-ene (tạm gọi là chất CT-1), có hàm lượng khoảng 293,05 µg/g [3]. Chất này có tác dụng ức chế sự phát triển của nhiều dòng TB ung thư trên in vitro, g m thư v MCF-7, ung thư phổi NCI-H460 [6], ung thư gan SK-HEP1 [7], ung thư đại tràng Caco-2 và LS180 trên in vitro [8]. Sử dụng chuột thiếu hụt miễn dịch (gọi tắt là chuột nude) là một bước đột phá trong nghiên cứu ung thư, cho phép nghiên cứu ung thư người trên cơ thể động vật. Chuột nude có một gen bị đột biến đ ng hợp tử (homozygous), gen này quy định sự phát triển của lông và tuyến ức. Do đó, với gen bị đột biến, chuột nude có tuyến ức bị suy giảm chức năng hoặc thậm chí không có tuyến ức, không có lông và hệ thống đáp ứng miễn dịch TB bị hạn chế do suy giảm mạnh số lượng TB lympho T. Nhờ vậy, khi ghép TB ung thư người lên chuột nude, khối u phát triển không bị đào thải do yếu tố miễn dịch của chuột và khối u mang đặc tính sinh học khá tương đ ng với khối ung thư trên cơ thể người. Để đánh giá tác dụng kháng ung thư trên mô hình in vivo, ch ng tôi thực hiện đề tài này nhằm: Đánh giá tác dụng kháng ung thư của chất CT-1 chiết xuất từ cây Khổ sâm cho lá trên mô hình chuột thiếu hụt miễn dịch mang khối ung thư phổi người. 20 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1. Vật liệu nghiên cứu. - Chuột thiếu hụt miễn dịch: 30 con. - TB UTPNTBKN (adenocarcinomic human alveolar basal epithelial cells) A549 (Công ty ATCC, Hoa Kỳ). - Môi trường nuôi cấy TB ung thư. - Thước đo kích thước khối u, tủ nuôi cấy TB. - Chất CT-1 thu được từ quá trình chiết xuất, phân lập từ lá của cây Khổ sâm cho lá. 2. Phƣơng pháp nghiên cứu. * Nuôi cấy TB ung thư và tạo khối u trên chuột: TB UTPNTBKN A549 được nuôi cấy trong môi trường Eagle’s minimum essential medium, bổ sung fetal bovine serum 10%, 1% penicillin và streptomycin (Invitrogen GmbH, Karlsruhe, CHLB Đức), 1,5 mcg insulin/ml môi trường. Mỗi chai nuôi cấy diện tích 75 cm2 chứa 106 TB. TB được nuôi cấy tăng sinh và thay môi trường 2 lần/tuần ở điều kiện nhiệt độ 370C, CO2 5%. Khi TB phát triển đạt 80% diện tích, tiến hành cấy chuyển sang chai mới. Tách TB và đếm, thu TB với n ng độ 107 TB/ml để phục vụ các thử nghiệm tiếp theo. Chuẩn bị TB trước ghép: TB trước khi tách được rửa hai lần bằng dung dịch PBS 1X, sau đó tách bằng dung dịch trypsin-EDTA 1X. Dung dịch TB ung thư đã chuẩn bị được h t vào bơm tiêm 1 ml với số lượng 107/ml. Cố định chuột nude và tiêm 0,1 ml vào dưới da đùi phải (106 TB/chuột). Quá trình thao tác thực hiện trong điều kiện vô trùng tuyệt đối. TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌ ...