Nghiên cứu tách chiết và thủy phân collagen từ da cá tra (Pangasianodon hypophthalmus)

Collagen được chiết từ da cá Tra (Pangasianodon hypophthalmus) đã xử lý loại tạp sau đó được thủy phân bằng enzyme để thu nhận collagen thủy phân. Kết quả nghiên cứu cho thấy collagen được chiết bốn lần bằng nước nóng ở các nhiệt độ khác nhau từ 60 - 100o C đạt hiệu suất trên 82%. Điều kiện thủy phân được tối ưu bằng phương pháp bề mặt đáp ứng (RSM).
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu tách chiết và thủy phân collagen từ da cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN 2 NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT VÀ THỦY PHÂN COLLAGEN TỪ DA CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) Nguyễn Thị Hương Thảo1, Đinh Thị Mến1, Nguyễn Thị Mỹ Thuận1 TÓM TẮT Collagen được chiết từ da cá Tra (Pangasianodon hypophthalmus) đã xử lý loại tạp sau đó được thủy phân bằng enzyme để thu nhận collagen thủy phân. Kết quả nghiên cứu cho thấy collagen được chiết bốn lần bằng nước nóng ở các nhiệt độ khác nhau từ 60 - 100oC đạt hiệu suất trên 82%. Điều kiện thủy phân được tối ưu bằng phương pháp bề mặt đáp ứng (RSM). Nhiệt độ 55,5oC, pH 8 thủy phân dịch chiết collagen trong 260 phút sử dụng enzyme Corolase 7089 với tỷ lệ enzyme 9U/g cơ chất là điều kiện tối ưu để đạt mức độ thủy phân trên 34%. Sản phẩm sau khi thủy phân gồm 87% là collagen có kích thước VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN 2 Protease phẩm thuỷ phân, dịch sau khi thuỷ phân được Corolase 7089 (AB enzymes) là lọc một khối lượng xác định qua bộ lọc màngendopeptidase kiềm sản xuất từ vi khuẩn Bacillus cut-off Amicon (Milipore-Ireland) ở các kíchsubtilis, họat tính tối thiểu là 840 UHb/g. thước phân tử 30kDa, 10kDa và 3kDa, xác định protein trong từng phân đoạn bằng phương pháp Tách chiết collagen Lowry. Tỷ lệ phân đoạn được tính bằng tỷ lệ Collagen được trích ly trong nước nóng phần trăm lượng protein thu được ở từng phântrong 4 lần ở các nhiệt độ 60, 75, 90 và lần cuối đoạn so với lượng protein trong dịch thuỷ phânở 100oC nhằm tận thu lượng collagen còn sót lại ban đầu đem lọc.trong da cá. Tỷ lệ da cá: nước trong hai lần chiết Các phương pháp phân tíchđầu tiên là 1: 2 và 1:1 cho hai lần chiết sau cùng. Hàm lượng hydroxyproline, collagen: Để xác định thời gian thích hợp cho mỗi lần được xác định bằng phương pháp so màu vớichiết, dịch chiết được lấy mẫu rồi đem lọc trước thuốc thử Ehrlich theo phương pháp AOACkhi đo OD ở 280nm theo thời gian. Sau mỗi lần 990.26. Collagen trong mẫu được tính tươngchiết hỗn hợp được lọc qua vải để thu dịch chiết đương bằng lượng hydroxyproline x 7,7và dịch chiết sau các lần chiết được gộp chung (Nalilanon et al., 2007).để tính hiệu suất. Hiệu suất tách chiết được tínhbằng tỷ lệ phần trăm lượng collagen thu được Mức độ thủy phân DH% (Hoyle và Mer-trong dịch chiết so với lượng collagen trong da ritt, 1994): mức độ thủy phân được xác địnhcá ban đầu. thông qua chỉ số N hòa tan trong TCA bằng cách bổ sung lượng thể tích tương đương TCA Quá trình thủy phân dịch chiết tạo 20% nhằm kết tủa protein còn lại trong dungcollagen thủy phân dịch sau khi thủy phân, sau đó ly tâm ở 7500v/ Điều kiện pH thích hợp cho quá trình thủy phút trong 15 phút rồi lọc loại bỏ kết tủa. Xácphân được khảo sát căn cứ vào điều kiện pH đối với định hàm lượng N trong dịch thủy phân ban đầuenzyme do hãng AB Enzymes cung cấp. Ghi nhận và trong dịch nổi sau li tâm bằng phương phápmức độ thủy phân theo pH để xác định khoảng pH Kjeldahl. Mức độ thủy phân DH(%) là tỷ lệ giữaphù hợp cho phản ứng thủy phân collagen. hàm lượng N tan trong TCA 10% sau thủy phân Để tối ưu hóa phản ứng thủy phân, bố trí so với hàm lượng N ban đầu trong mẫu.thí nghiệm tại pH xác định từ thí nghiệm trên, Định lượng protein tan bằng phươngkhảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ thủy phân và tỷ pháp Lowry: dựa vào phản ứng màu của Pro-lệ E/S và thời gian thủy phân đến mức độ thủy tein và thuốc thử Folin để tạo phức màu xanhphân DH. đặc trưng có độ hấp ...