Nghiên cứu tách dòng và biểu hiện gen mã hóa protein NS1 của virut Zika ở vi khuẩn Escherichia coli

Bài viết nghiên cứu tách dòng và biểu hiện, tinh sạch protein NS1. Phương pháp nghiên cứu là tách dòng trình tự gen mã hóa protein NS1 vào vector TA và tiến hành chuyển sang vector pET-28A (+) tạo plasmid tái tổ hợp biểu hiện protein NS1 trong vi khuẩn E. coli.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu tách dòng và biểu hiện gen mã hóa protein NS1 của virut Zika ở vi khuẩn Escherichia coliT¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 4-2017NGHIÊN CỨU TÁCH DÒNG VÀ BIỂU HIỆN GENMÃ HÓA PROTEIN NS1 CỦA VIRUT ZIKA ỞVI KHUẨN ESCHERICHIA COLIHoàng Quốc Trường*; Vũ Lê Quỳnh Chi*; Phan Quốc Hoàn*Park Huyn**; Vũ Xuân Nghĩa***; Lê Thị Quỳnh Mai****TÓM TẮTMục tiêu: nghiên cứu tách dòng và biểu hiện, tinh sạch protein NS1. Phương pháp: tách dòngtrình tự gen mã hóa protein NS1 vào vector TA và tiến hành chuyển sang vector pET-28A (+)tạo plasmid tái tổ hợp biểu hiện protein NS1 trong vi khuẩn E. coli. Kết quả: NS1 biểu hiệnthành công được xác nhận bằng kỹ thuật điện di biến tính SDS-PAGE và kỹ thuật chuyển thẩmmiễn dịch. Đây là kết quả nghiên cứu bước đầu định hướng tạo bộ sinh phẩm chẩn đoán pháthiện virut Zika (ZIKV) tại Việt Nam. Kết luận: biểu hiện thành công NS1 protein.* Từ khóa: Virut Zika; E. coli; NS1.Cloning and Expression of a Full-Leng Recombinant NS1 Proteinfrom Zika Virus in Escherichia coliSummaryObjectives: In this study, Zika virus (ZIKV) NS1 was expressed and purified. Methods: Zikavirus RNA was used as a template to produce DNA clones of the full-length NS1 genes viareverse transcriptase synthesis of cDNA by PCR amplification of the NS1 region. Products werecloned TA plasmid and subsequently subcloned into pET-28A (+) vector to construct arecombinant plasmid. The recombinant plasmid was transformed into E. coli BL21 strains andexpressed NS1 protein. Results: Protein was identified by SDS-PAGE and western blotting.This research need to be further investigated to develop a NS1 diagnosis test of ZIKV in Vietnam.Conslusion: NS1 was expressed successfully.* Key words: Zika virus; E. coli; NS1.ĐẶT VẤN ĐỀVirut Zika là một virut ARN thuộc họFlaviviridae, chi Flavivirus, được phân lậplần đầu tiên từ khỉ vàng Uganda năm1947. Năm 1954, ZIKV được phân lập từ3 cư dân Nigeria. Cho đến nay, nhiềunghiên cứu khẳng định kháng thể khángZIKV đã tồn tại trên người được nhiềuquốc gia châu Phi và một số nước châu Ámô tả, trong đó có Thái Lan, Singapore,Malaysia, Campuchia, Philippines và ViệtNam. Tháng 05 - 2015, ZIKV lần đầutiên được mô tả phát hiện bên ngoài châuPhi và châu Á khi phân lập tại Brazil.* Bệnh viện Trung ương Quân đội 108** Trường Đại học Y Wonkawang*** Học viện Quân y**** Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ươngNgười phản hồi (Corresponding): Vũ Xuân Nghĩa (nghia69@gmail.com)Ngày nhận bài: 16/01/2017; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 18/03/2017Ngày bài báo được đăng: 22/03/201723T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 4-2017Tháng 2 - 2016, Tổ chức Y tế Thế giớituyên bố lây nhiễm ZIKV là vấn đề y tếkhẩn cấp trong cộng đồng quốc tế [1].Đường lây truyền ZIKV được xác nhận làvector trung gian muỗi vằn A. aegypti vàA. albopictus, có thể qua quan hệ tình dục[2]. Trong khi các triệu chứng lây nhiễmZIKV thầm lặng hoặc có thể bệnh giốngsốt dengue, các bằng chứng ZIKV gây biếnchứng nghiêm trọng đến hệ thần kinhtrung ương ở thai nhi/trẻ sơ sinh (bệnhđầu nhỏ, microcephaly), triệu chứngGuillain-Barré ở người trưởng thành và tếbào gốc vạn năng thần kinh của ngườiđược công bố với các bằng chứng khoahọc tin cậy [3, 4, 5].Tại Việt Nam, theo thông tin đăng trêntrang mạng của Viện Vệ sinh Dịch tễTrung ương, tính đến ngày 20 - 11 2016, trên địa bàn toàn Thành phố HồChí Minh xác nhận có 62 trường hợpnhiễm ZIKV tại 16/24 quận huyện. Trongđó, quận Bình Thạnh phát hiện 13 trườnghợp, Quận 2 có 10 ca, tiếp đến là cácquận 9, 12 và Tân Phú mỗi quận có 6 caxác định dương tính với ZIKV. Ngày 17 10 - 2016, lãnh đạo Bộ Y tế và cácchuyên gia của Văn phòng Đáp ứng Dịchkhẩn cấp EOC (Bộ Y tế), chuyên gia củaTrung tâm Kiểm soát và Phòng ngừa dịchbệnh (CDC) Mỹ, Tổ chức Y tế Thế giới(WHO) và lãnh đạo Viện Vệ sinh Dịch tễTW; Cục Quản lý Khám, Chữa bệnh; VụSức khỏe Bà mẹ và Trẻ em (Bộ Y tế);Bệnh viện Phụ sản TW đã họp và thôngbáo, trao đổi về trường hợp bé gái4 tháng tuổi đầu tiên tại Việt Nam mắc dịtật đầu nhỏ nghi do ZIKV. Em bé là concủa bà mẹ 23 tuổi, dân tộc Ê Đê, sống tạiĐắk Lắk. Khi mang thai thời điểm 3 thángvà 6 tháng, người mẹ bị sốt, phát ban.Để khẳng định nhiễm ZIKV, Trung tâmKiểm soát và Phòng ngừa dịch bệnh Hoa24Kỳ khuyến cáo sử dụng test phát hiệnNS1, xét nghiệm Zika IgM ELISA và kỹ thuậtsinh học phân tử để phân biệt với nhiễmdo Chikungunia hoặc Dengue. NS1, proteinkhông cấu trúc của ZIKV là một glycoproteinvới trọng lượng phân tử 43 - 50 kD đãđược công bố về cấu trúc sau 9 thángWHO cảnh báo ZIKV liên quan đến bệnhđầu nhỏ ở thai nhi và trẻ sơ sinh [6, 7].Năm 2016, hai công trình khoa học côngbố trên tạp chí EMBO và Nat Struct MolBiol về cấu trúc của NS1 đã chứng minhcác đặc tính bề mặt khác biệt của ZIKVso với những virut khác thuộc họ Flavivirusvề tính đặc hiệu với kháng thể khángZIKV NS1 và làm sáng tỏ vai trò củaprotein này trong cơ chế lây nhiễm ZIKV.Trong nghiên cứu này, gen NS1 của ZIKVđược t ...