Nghiên cứu tạo cây đậu tương chuyển gen kháng soybean mosaic virus và bean yellow mosaic virus

Nội dung bài viết này tiến hành chuyển đổi cấu trúc gen vào 2 giống đậu tương DT12 và DT2008 và thu được 5 dòng cây chuyển gen ở thế hệ T0 và phản ứng PCR. Mời các bạn tham khảo!
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu tạo cây đậu tương chuyển gen kháng soybean mosaic virus và bean yellow mosaic virusLò Thị Mai Thu và ĐtgTạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ118(04): 111 - 115LOW MOSAIC VIRUS2Lò Thị Mai Thu1,32*Chu Hoàng Hà , Chu Hoàng Mậu1Trường Đại học Tây Bắc,Trường Đại học Sư phạm- ĐH Thái Nguyên,3Viện Công nghệ Sinh học2Bệnh khảm do soybean mosaic virus (SMV) và bean yellow mosaic virus (BYMV) gây thiệt hạiđáng kể về năng suất, chất lượng và sản lượng hạt đậnhiễại virus khác sẽ. Hiện nay, trong ngành sản xuất đậutương mới dừng ở biện pháp phòng mà chưa có thuốc trị bệnh khảm do SMV và BYMV.RNtươngchuyểnthànhậ2008 và thuđượở thế hệDT2008 dương tính với phản ứ12 liếp tục chọn lọc, phân tích biểu hiệế hệ tiế.:, nách lá mầ*Đậu tương (Glycine max (L.) Merrill) là câytrồng ngắn ngày, có giá trị cao về dinh dưỡng,kinh tế và là nguyên liệu cho công nghiệp, làcây trồng cải tạo đất và bảo vệ môi trường.Hiện nay, năng suất và sản lượng đậu tương ởnước ta còn thấp, chất lượng hạt chưa cao làdo mức độ ổn định của giốảnh hưởngcủa nấm, côn trùng, vi khuẩ.Đậu tương là một trong số các cây trồng dễ bịnhiễm nhiều loại virus, như bệnh khảm(Soybean mosaic virus - SMV), bệnh khảmvàng hại đậu tương (Bean yellow mosaicvirus - BYMV), bệnh xoăn lá và một số bệnhvirus khác. Vì vậy, nghiên cứu tạo dòng câykháng virus phục vụ công tác chọn tạo giốngđậu tương sạch bệnh là rất cần thiết.ệnhkhảm ở cây đậu tương được lan truyền do rệplàm môi giớệt hại đáng kể về năngsuất, chất lượng và sản lượng hạt đậu tương[4]. Hiện nay, trong ngành sản xuất đậu tươngmới dừng ở biện pháp phòng mà chưa cóthuốc trị bệnh khảm do SMV và BYMV.*Tel: 0913 383289, Email: chuhoangmau@tnu.edu.vnBiện pháp có hiệu quả nhất để phòng hai loàiSMV và BYMV là sử dụng các giống đậutương kháng bệnh. Tuy nhiên, nguồn giốngđậu tương kháng bệnh tự nhiên đối với SMVvà BYMV là không nhiều, do vậy cách tiếpcận ứng dụng công nghệ gen để nghiên cứu tạogiống đậệu quả cao và bền vững. Haihướng tiếp cận tạo cây đậu tương chuyển genkháng virus được quan tâm nghiên cứu, đó là(i) phân lập gen từ giống đậu tương có khảnăng kháng virus tốt nhất để chuyển vào giốngđậu tương có tính kháng kém, (ii) chuyển cácgen có nguồn gốc từ chính loài virus gây bệnhtheo nguyên lý của kỹ thuật RNA interference(RNAi). Dựa trên nguyên lý bất hoạt gen sauphiên mã, một số tác giả đã ứng dụng thànhcông kỹ thuật RNAi trong chiến lược tạo câychuyể--2008 thông qua A. tumefaciens.111Lò Thị Mai Thu và ĐtgTạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ118(04): 111 - 115kanamycin--1).12 do Trung tâmNghiên cứu và Phát triển cây đậu đỗ, Việncây lương thực và cây thực phẩm - Viện Khoahọc Nông nghiệp Việt Nam cung cấ. Vect-Nách lá mầmABEKỹ thuật tái sinh đa chồA. tumefaciens qua nách lá mầm hạcây đậu tương được tiến hành dựa trênphương pháp của Olhoft và cộng sự (2006) cócải tiế(2011) [2].(%). DNA tổng số từ các mẫu lá non đượctách chiết theo phương pháp của SaghaiMaroof và cộng sự (1984) [10] có cải tiến.Kiểm tra sự có mặt của gen chuyển bằng kỹthuậ:SMV-CPi-Fi: 5‟- CACCGCAGCAGAAGCTTACA -3‟;BYMV-CPi-Ri: 5‟- ATGTTCCGAACCCCAAGCAA -3‟.KẾT QUẢ2008--A. tumefaciens[2-A. tumefaciens-GH1.A –; B - Gây tổn thươngnách lá mầm trong dịch khuẩễm 30 –40 phút; C - Đồng nuôi cấy trên CCM ở điều kiệntố; D - Cảm ứng tạo đa chồi trênSIM lầ(bổ sung BAP 2 mg/l +kanamycin 50 mg/l); E - Cắt bỏ lá mầm, chuyểnsang môi trường kéo dài chồ(bổ sung GA3 0,5 mg/l + IAA0,1 mg/l +kanamycin50 mg/l); G - Ra rễ(bổ; H - Ra cây(giá thể 1 trấu hun : 1 cát vàng)kim châm. Theo Olhoft và đtg (2006)[7], Xue và đtg (2006) [12], Zhang và đtg(1999) [13] việc gây tổn thương nách lá mầủ mô đích cho sự xâmnhiễẩn. Yamada và đtg (2012)[14], sử dụng bàn chải làmtừ thép không gỉ để tạo các vết thương ở náchlá mầm thì không yêu cầu nhiều về mặt kỹthuật và sự, mức độ hìnhthành chồi ở nách lá mầụthuộc vào kỹ thuật gây tổn thương mà còn phụthuộc vào đặc điểm của kiểu gen cây đậutương [8].-1.112D[11].-CLò Thị Mai Thu và ĐtgTạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆBảng 1. Kết quả biến nạp cấGĐT12DT2008Lô thí Số mẫunghiệm biến nạp123Tổng1234100150120370250180220200Tổng850--Số mẫuSố chồi Số chồitạokéo dài ra rễchồi27105481716371310112403113050307528191034529954127403164118(04): 111 - 115105SốSố câysốgen (%)4128242616252331031676910903251,35192,24thướ1,35% (5/370).40 chồi kéo dài trên môi trường chọnlọc SEM chứa 50 mg/l kanamycin, trong đó31 chồi ra rễận đượểntrên giá thểờng chọnlọc SEM chứa 50 mg/l kanamycin, trong đó105 chồi ra rễận đượphát triển trên giá thể2008, k2,24%(19/850).500bp500bp500bpgiống DT2008.các dòng cây đậu tương chuyể0Sặt của gen chuyển trong các dòng đậutương chuyển genỹthuậgen. DNA tổng số từ 16 mẫu lá đậu t ...