Nghiên cứu tuyển chọn và nuôi cấy vi khuẩn tả (vibrio cholerae) sinh độc tố tả in vitro

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết này nhằm tái hoạt hóa, tuyển chọn các chủng V. cholerae tăng sinh mạnh trong điều kiện nuôi cấy chọn lọc bằng môi trường đặc hiệu với VKT và kích thích vi khuẩn sinh độc tố trong điều kiện nuôi cấy in vitro bằng môi trường kích thích sinh độc tố.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu tuyển chọn và nuôi cấy vi khuẩn tả (vibrio cholerae) sinh độc tố tả in vitroTẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2013NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN VÀ NUÔI CẤY VI KHUẨN TẢ(VIBRIO CHOLERAE) SINH ĐỘC TỐ TẢ IN VITROĐỗ Minh Trung*; Phạm Thế Tài*; Hoàng Đắc Thăng*Lê Thu Hồng**; Lê Thu Hà***; Lê Văn Đông*TÓM TẮTTả là bệnh nhiễm trùng đường ruột do vi khuẩn tả (VKT) Vibrio cholerae gây ra. Độc tố tả(ĐTT) (cholera toxin) là yếu tố độc lực chủ yếu của VKT, đồng thời là tác nhân chính gâybệnh tả. Nhiều nghiên cứu đã cho thấy chỉ những chủng VKT sinh ĐTT mới liên quan tới cácvụ dịch tả. Vì vậy, ĐTT là chỉ điểm quan trọng của các chủng vi khuẩn gây dịch tả. Tuynhiên, VKT thường chỉ sinh ĐTT trong điều kiện in vivo, khi đã nhiễm và tăng sinh trong môitrường đường ruột của đối tượng bị nhiễm. Trong điều kiện nuôi cấy in vitro bằng môi trườngnuôi cấy thông thường, vi khuẩn này tăng sinh mà không tiết độc tố. Trong nghiên cứu này,chúng tôi đã tái phân lập 10 chủng VKT từ các vụ dịch tiêu chảy cấp do tả trước đây; hoạthóa, tăng sinh và lựa chọn được chủng VKT tăng sinh mạnh nhất. Chủng vi khuẩn này sinhĐTT trong điều kiện nuôi cấy in vitro bằng môi trường nuôi cấy có chứa pepton, cao men bia,NaCl và NaHCO3 qua khảo sát bằng kỹ thuật GM1-ELISA đặc hiệu với ĐTT.* Từ khóa: Vi khuẩn tả; Độc tố tả; Kỹ thuật GM1-ELISA.SELECTION AND BACTERIAL CULTURE OF VIBRIO CHOLERAEPRODUCING CHOLERA TOXIN IN VITROSUMMARYCholera is an intestinal infection caused by the bacterium Vibrio cholerae (V. cholerae).Cholera toxin (CT) secreted by V. cholerae is the causative agent of cholera and is a majoragent involved in severe diarrheal diseases. Previous studies have found that only thestrains of V. cholerae which secret CT are related to outbreaks of cholera. Therefore,ability of CT secretion is an important characteristic of V. cholerae strains that causecholera outbreaks. However, V. cholerae only secrets CT in vivo conditions, when thebacteria have infected and developed inside intestinal tract of exposed persons. If the V.cholerae is in vitro cultured in normal medium, it increases the number without CTsecretion. One of preventive methods to cholera is the usage of antibodies anti CT.* Học viện Quân y** Bệnh viện 103*** Viện Vệ sinh Phòng dịch Quân độiNgười phản hồi (Corresponding): Lê Văn Đông (levandong@yahoo.com)Ngày nhận bài: 16/9/2013; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 31/10/2013Ngày bài báo được đăng: 8/11/201383TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2013With the aim of collecting a large amount of CT used as sources of antigenic material toproduce antibodies anti-CT, this study targeted to select suitable V. cholerae strain inVietnam and specific culture medium enabling CT secretion in vitro. Ten strains of V.cholerae causing previous outbreaks in Vietnam in 2007 were used as candidates forselection. The strain with the strongest reproductive capacity in TCBS agar was chosen.The culture medium which used in this study contained peptone, yeast extract, NaCl,NaHCO3. CT released in culture medium was determined by GM1-ELISA technique.* Key words: Vibrio cholerae; Cholera toxin; GM1-ELISA technique.ĐẶT VẤN ĐỀBệnh tả gây ra bởi VKT (Vibriocholerae). VKT là một loại vi khuẩnGram âm sinh ĐTT (cholerae toxin).ĐTT tác động lên tế bào biểu mô niêmmạc của ruột, gây tiêu chảy nặng kèmtheo rối loạn nước, điện giải, là dấu hiệuđặc trưng của bệnh tả. Trường hợp bệnhnặng có thể gây tử vong trong thời gianngắn. Bệnh tả có khả năng bùng phátthành đại dịch trong thời gian rất ngắnvà trên phạm vi rộng, ảnh hưởng nặngnề đến sức khoẻ, kinh tế xã hội và anninh của nhiều quốc gia. Tuy nhiên,VKT thường chỉ sinh ĐTT trong điềukiện in vivo, khi đã nhiễm vào tăng sinhtrong môi trường đường ruột của đốitượng bị nhiễm. Trong điều kiện nuôicấy in vitro bằng môi trường nuôi cấythông thường, vi khuẩn này chỉ tăngsinh mà không tiết độc tố. ĐTT từV. cholerae có ý nghĩa khi được sử dụnglàm nguyên liệu chế tạo antidote đểphòng chống khủng bố, trong trườnghợp này, sử dụng độc tố tả như một loạivũ khí sinh học. Muốn thu được độc tốcần phải phân lập, nuôi cấy và tuyểnchọn được các chủng V. cholerae sinhđộc tố để sử dụng ĐTT làm nguyên liệuchế tạo antidote. Hơn nữa, tách độc tố từnhững chủng lưu hành tại Việt Nam, tạora đáp ứng miễn dịch bảo vệ sẽ tốt hơnvà chủ động trong nghiên cứu và sảnxuất antidote. Xuất phát từ ý nghĩa thựctiễn trên nghiên cứu này được tiến hànhnhằm: Tái hoạt hóa, tuyển chọn các chủngV. cholerae tăng sinh mạnh trong điềukiện nuôi cấy chọn lọc bằng môi trườngđặc hiệu với VKT và kích thích vi khuẩnsinh độc tố trong điều kiện nuôi cấy invitro bằng môi trường kích thích sinhđộc tố.VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Vật liệu nghiên cứu.* Đối tượng nghiên cứu: 10 chủngV. cholerae được phân lập trong các vụdịch tiêu chảy cấp do tả năm 2007 và kýhiệu lần lượt là V1, V2, V3, V4, V5,V10, V25, V35, V47, V50. Đựng cácchủng sau phân l ...