Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật hấp phụ miễn dịch vi hạt đánh dấu huỳnh quang trong phát hiện đồng thời nhiều cytokine

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm phát hiện đồng thời nhiều cytokine và đánh giá độ xác thực của phương pháp xét nghiệm hấp phụ miễn dịch vi hạt đánh dấu huỳnh quang (fluorescence covalent microbead immunosorbent assay - FCMIA).
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật hấp phụ miễn dịch vi hạt đánh dấu huỳnh quang trong phát hiện đồng thời nhiều cytokineT¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 3-2017NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT HẤP PHỤ MIỄN DỊCHVI HẠT ĐÁNH DẤU HUỲNH QUANG TRONG PHÁT HIỆNĐỒNG THỜI NHIỀU CYTOKINEĐỗ Khắc Đại*; Nguyễn Đặng Dũng*Nguyễn Ngọc Tuấn*; Hoàng Trung Kiên*TÓM TẮTMục tiêu: phát hiện đồng thời nhiều cytokine và đánh giá độ xác thực của phương pháp xétnghiệm hấp phụ miễn dịch vi hạt đánh dấu huỳnh quang (fluorescence covalent microbeadimmunosorbent assay - FCMIA). Đối tượng và phương pháp: 2 lọ cytokine chuẩn dạng đôngkhô với nồng độ đã biết được phân tích bằng FCMIA trên hệ thống Luminex 200 tại Bộ mônMiễn dịch, Học viện Quân y. Kết quả: xây dựng được đường chuẩn phát hiện đồng thời 3cytokine và 9 cytokine trong cùng một mẫu xét nghiệm, trong đó tỷ lệ % khôi phục dao động từ95,68 - 107,26% với tổ hợp 3 cytokine và từ 92,86 - 109,61% với tổ hợp 9 cytokine. Kết luận:đã nghiên cứu thành công ứng dụng kỹ thuật FCMIA trong xét nghiệm đồng thời nhiều cytokine,đó là 3 cytokine: IL-6, IL-17, TNF-α và 9 cytokine: IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12, IL-13, GM-CSF,IFN-γ, TNF-α với kết quả định lượng có độ xác thực cao.* Từ khoá: Xét nghiệm cytokine; Kỹ thuật hấp phụ miễn dịch vi hạt đánh dấu huỳnh quang.Application of Fluorescence Covalent Microbead ImmunosorbentAssay in Simultaneous Detection of CytokinesSummaryObjectives: To detect simultanly cytokines and evaluate the accuracy of fluorescencecovalent microbead immunosorbent assay (FCMIA) method. Subjects and methods:Lyophilization of 2 cytokine standards with known concentration was analysed by FCMIA withLuminex-200 system at Department of Immunology, Vietnam Military Medical University.Results: Created the standard curve for simultaneous detection of three cytokines and ninecytokines in one assay sample and the percentage of recovery in 3 cytokines ranged from 95.68% to107.26% and 92.86% to 109.61% in 9 cytokines. Conclusion: We have succeeded in applicationof FCMIA in simultaneous detection of cytokines as 3-plex (IL-6, IL-17, TNF-α) and 9-plex (IL-2,IL-4, IL-5, IL-10, IL-12, IL-13, GM-CSF, IFN-γ, TNF-α) with high accuracy of quantitative result.* Key words: Cytokine detection; Fluorescence covalent microbead immunosorbent assay.ĐẶT VẤN ĐỀCytokine là những protein có trọnglượng phân tử thấp, đóng vai trò trunggian trong trao đổi tín hiệu giữa các tếbào của hệ thống miễn dịch. Các cytokinephát huy tác dụng bằng cách gắn vào thụthể đặc hiệu trên tế bào đích, qua đó kíchhoạt con đường dẫn truyền tín hiệu bêntrong tế bào, làm thay đổi hình thức biểuhiện của gen, dẫn đến việc tổng hợpprotein mới quyết định các tác dụng sinhhọc [3].* Học viện Quân yNgười phản hồi (Corresponding): Đỗ Khắc Đại (dokhacdai@vmmu.edu.vn)Ngày nhận bài: 29/12/2016; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 14/02/2017Ngày bài báo được đăng: 20/02/201717T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 3-2017Cho tới nay, tại Việt Nam đã có một sốcơ sở nghiên cứu xét nghiệm được đồngthời nhiều cytokine dựa trên hệ thống“kín” Bio-plex của Bio-Rad [1, 2]. Tuynhiên, việc Bio-Rad ngừng cung cấp hóachất xét nghiệm tại Việt Nam dẫn đến cácxét nghiệm phát hiện đồng thời nhiềucytokine phải dừng lại. Những kỹ thuậttruyền thống như RIA và ELISA có hạnchế, đó là mỗi xét nghiệm chỉ phát hiệnđược đơn lẻ một cytokine. Xét nghiệmđồng thời nhiều cytokine bằng cácphương pháp RIA và ELISA không nhữngcần số lượng lớn trang thiết bị và cônglao động mà còn khó có thể đạt độ đồngnhất về kết quả xét nghiệm giữa các nhânviên xét nghiệm khác nhau.Xuất phát từ lý do trên, chúng tôi tiếnhành nghiên cứu, triển khai phương phápxét nghiệm kỹ thuật hấp phụ miễn dịch vihạt đánh dấu huỳnh quang có khả năngphát hiện đồng thời nhiều cytokine trongcùng một mẫu xét nghiệm, nhằm khắcphục hạn chế của các kỹ thuật trước đây.Dựa trên hệ thống Luminex-200 đượctrang bị, chúng tôi tiến hành đề tài nghiêncứu này nhằm: Phát hiện đồng thời nhiềucytokine trong các mẫu chất chuẩn khácnhau và đánh giá độ xác thực của phươngpháp xét nghiệm FCMIA.ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Đối tượng và vật liệu nghiên cứu.* Đối tượng nghiên cứu:2 lọ cytokine chuẩn dạng đông khô doHãng R & D (Mỹ) cung cấp bao gồm:Lọ 1: chứa 3 cytokine IL-6; IL-17 vàTNF-α với nồng độ đã biết, đơn vị đo làpg/ml.18Lọ 2: chứa 9 cytokine IL-2, IL-4, IL-5,IL-10, IL-12, IL-13, GM-CSF, IFN-γ, TNF-αvới nồng độ đã biết, đơn vị đo là pg/ml.* Vật liệu nghiên cứu:Hoá chất và sinh phẩm xét nghiệm doHãng R & D (Mỹ) sản xuất theo yêu cầucủa nhóm nghiên cứu bao gồm:- Hỗn hợp với số lượng bằng nhau cácloại hạt từ khác nhau, mỗi loại hạt từhuỳnh quang được gắn lên bề mặt mộtloại kháng thể đơn clon đặc hiệu với1 cytokine của người: interleukin (IL) 2, 4,5, 6, 10, 12, 13, 17; yếu tố kích thích tạodòng clon các tế bào đơn nhân và tế bàohạt (GM-CSF); interferon gamma (IFN-γ)và yếu tố hoại tử u alpha ( ...