Nghiên cứu ứng dụng tấm màng ối đông khô làm giá thể trong nuôi cấy tế bào gốc

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm xác định khả năng tồn tại, phát triển tăng sinh và khả năng duy trì tính gốc của TBG màng ối sau khi nuôi cấy trên màng ối đông khô. Nghiên cứu này thành công sẽ tạo ra nhiều triển vọng trong việc sử màng ối trong công nghệ mô.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu ứng dụng tấm màng ối đông khô làm giá thể trong nuôi cấy tế bào gốcTẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1 - 2013NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG TẤM MÀNG ỐI ĐÔNG KHÔLÀM GIÁ THỂ TRONG NUÔI CẤY TẾ BÀO GỐCNguyễn Viết Trung*; Phạm Văn Trân*TãM T¾TSử dụng tấm màng ối đông khô để nuôi cấy tế bào gốc (TBG) màng ối với mục tiêu ứng dụngmàng ối đông khô làm giá thể sinh học nuôi cấy tế bào (TB), đồng thời bước đầu nghiên cứu ảnhhưởng của giá thể màng ối lên khả năng tăng sinh và biệt hóa TB. Tấm màng ối đông khô được “làmướt” trở lại bằng dung dịch PBS, sau đó dàn lên đáy đĩa nuôi cấy. Nhỏ và trải đều TBG màng ối lênbề mặt tấm màng ối. Nuôi cấy TBG màng ối trong môi trường DMEM và 10% huyết thanh bào thaibê. Thu hoạch TB nuôi cấy trên tấm bằng dung dịch trypsin 0,25%. Đo sự tăng sinh TB theo phươngpháp MTS và xác định tính gốc của TB bằng dấu ấn OCT-4. Kết quả: TBG màng ối phát triển tốt trênmàng ối đông khô được “làm ướt”, đồng thời vẫn giữ nguyên được biểu hiện OCT-4. Như vậy, sửdụng màng ối đông khô làm giá thể để nuôi cấy TBG màng ối giúp TB tăng sinh và duy trì được tínhgốc ban đầu.* Từ khóa: Tế bào gốc; Màng ối đông khô.APPLYING HYPER-DRY AMNION FOR CULTURE OFAMNIOTIC MEMBRANE STEM CELLSSUMMARYUsing of “hyper-dry amnion” as biological scaffold for culturing the amniotic stem cells to studytheirs effects on proliferation and differentiation of these cells. “Hyper-dry amnion” returned freshamniotic membrane with PBS solution and then set to the bottom of the culture plate. Drip andspread of cells on amniotic membrane surface and cultured in DMEM medium supplemented with10% fetal calf serum. Cells were harvested from cell culture dish using trypsin 0.25%. Measurementof cell proliferation by the MTS method. Characterisation of cells by OCT-4 marker. So that, Amnioticmembrane stem cells proliferate well on hyper-dried amniotic membrane returned to those of freshamniotic membrane and stem cell always express OCT-4 marker. So that “hyper-dry amnion” is used asa scaffold upon which amniotic stem cells can regenerate and maintain theirs characterisations.* Key words: Stem cells; Hyper-dry amnion.ĐẶT VẤN ĐỀĐiều kiện tiên quyết cho việc lựa chọngiá đỡ là tính phù hợp về mặt sinh học củanó, tức thích hợp với tổ chức sống, khôngđộc, không gây ung thư hoặc không kíchthích sinh miễn dịch trong cơ thể sống. Giáđỡ không bị phá hủy bởi quá trình viêm nêncó thể sử dụng để cấy ghép. Ngoài ra, giáđỡ cần có tính chất cơ học phù hợp với mô,bao gồm tính thấm, tính ổn định, độ đàn hồi,tính linh hoạt và dễ dàng lấy bỏ khi cần [1].* Bệnh viện 103Chịu trách nhiệm nội dung khoa học: PGS. TS. Lê Văn ĐôngTS. Nguyễn Đặng Dũng1TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1 - 2013Giá đỡ cũng cần cho phép TB bám dínhvà khả năng thấm qua dễ dàng các chấtnhư yếu tố sinh trưởng và vật liệu ditruyền [2].Màng ối là một giá đỡ với mô hình cấutrúc tương tự như chất gian bào trong tổchức, cơ quan. TB biểu mô màng ối tiết racác thành phần ngoại bào collagen týp III,IV và glycoprotein khác như laminin,nidogen, fibronectin tạo nên màng nền củamàng ối. Lớp xốp trên màng ối là nhữngproteoglycan ưa nước và glycoprotein chứacác mạng lưới gồm chủ yếu collagen týp III.Perlecan - một heparan sulphate proteoglycan,là thành phần chủ yếu của màng nền, gắncác yếu tố sinh trưởng với protein ngoạibào và phân tử bám dính.Màng ối toàn phần chứa nồng độ caocác chất EGF, KGF, HGF và bFGF so vớimàng ối nạo bỏ hết lớp biểu mô [3]. Điều đóchứng tỏ, TB biểu mô màng ối chế tiết cácyếu tố sinh trưởng. Thêm vào đó, TNF-α,NGF, BDNF, noggin và activin cũng đượcphát hiện trong TBG biểu mô [4]. Vì vậy, TBbiểu mô màng ối sản xuất cytokine có vaitrò quan trọng trong việc tạo ra môi trườngcho TBG tồn tại. Trên thực tế, Grueterich đãchứng minh, khi nuôi cấy TBG vùng rìa giácmạc trên màng ối toàn phần, TB không thayđổi về mặt hình thái, trong khi nếu nuôi cấytrên màng ối loại bỏ hết biểu mô, những TBnày có kiểu hình giống giác mạc vùng trungtâm [5]. Chúng tôi thực hiện đề tài nàynhằm: Xác định khả năng tồn tại, phát triểntăng sinh và khả năng duy trì tính gốc củaTBG màng ối sau khi nuôi cấy trên màng ốiđông khô. Nghiên cứu này thành công sẽtạo ra nhiều triển vọng trong việc sử màngối trong công nghệ mô.ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Đối tượng nghiên cứu.Màng ối và TBG phân lập từ màng ốicủa những sản phụ mổ đẻ, được sàng lọcâm tính với HIV, HBV, HCV, giang mai.2. Phương pháp nghiên cứu.* Chuẩn bị các tấm màng ối đông khô:Rửa sạch các tấm màng ối thu đượcbằng dung dịch PBS cho đến khi tạo thànhmột màng mỏng trong suốt, dàn tấm màngối vừa cắt trên giấy nhôm allumium. Xử lýtấm màng ối bằng hệ thống đông khô, sauđó chiếu xạ từ chất phóng xạ Coban 60,liều chiếu 25 kGy. Sau khi kết thúc quá trìnhxử lý phóng xạ, các tấm màng ối đông khôtrở nên tuyệt đối vô khuẩn và không cònTB sống.* Chuẩn bị TBG màng ối:TBG màng ối bảo quản ở nhiệt độ -80oChoặc được thu ho ...