Nghiên cứu xây dựng mô hình bệnh nấm hệ thống do candida để đánh giá hiệu quả thuốc chống nấm in vivo

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá hiệu quả thuốc chống nấm là rất cấp thiết, cả in vitro và in vivo. Bài viết tiến hành nghiên cứu này nhằm xây dựng mô hình bệnh nấm hệ thống do Candida albicans để áp dụng trong thực tiễn.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu xây dựng mô hình bệnh nấm hệ thống do candida để đánh giá hiệu quả thuốc chống nấm in vivoTẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2015NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG MÔ HÌNH BỆNH NẤM HỆ THỐNG DOCANDIDA ĐỂ ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ THUỐC CHỐNG NẤM IN VIVOLê Trần Anh*; Nguyễn Tuấn Quang*TÓM TẮTMục tiêu: nhu cầu nghiên cứu và đánh giá hiệu quả thuốc chống nấm là rất cấp thiết, cả in vitrovà in vivo. Chúng tôi tiến hành nghiên cứu này nhằm xây dựng mô hình bệnh nấm hệ thống doCandida albicans để áp dụng trong thực tiễn. Phương pháp: gây nhiễm chuột nhắt trắng không4suy giảm miễn dịch qua đường tĩnh mạch. Kết quả: liều chết tối thiểu của C. albicans là 4 x 1045tế bào (TB)/chuột. Liều LD10 là 4 x 10 ; liều LD90 là 7,5 x 10 TB/chuột. Tại ngày thứ 3 (D3) vàD8 sau gây nhiễm, mật độ nấm tại thận là 4,52 và 4,06 log10 CFU (đơn vị hình thành khuẩnlạc)/gam, cao hơn so với mật độ nấm tại gan (3,77 và 2,74 log10 CFU/gam) và lách (2,93 và2,58 log10 CFU/gam). Kết luận: áp dụng mô hình trong đánh giá thấy amphotericin B có tác dụngkéo dài thời gian sống của chuột nhiễm liều LD90 và giảm mật độ nấm ở thận nhiễm liều LD10.* Từ khóa: Candida albicans; Chuột; Amphotericin B; In vivo.Develop a Murine Model of Disseminated Candidiasis to Evaluatethe Efficacy of Antifungals in VivoSummaryObjectives: To evaluate the efficacy of anti-fungal drugs are urgently needed, both in vitroand in vivo. We conducted this study to develop a model of systemic mycosis caused byCandida albicans to apply in practice. Methods: Immunocompetent mice were intravenously4infected. Results: The minimal lethal dose of C. albicans was 10 cells/mouse. LD10 dose was454 x 10 ; LD90 dose was 7.5 x 10 cells/mouse. At day 3 (D3) and D8 after infection, the fungalburden in kidney were 4.52 and 4.06 log10 CFU (colony forming units)/g respectively, higherthan that in the liver (3.77 and 2.74 log10 CFU/g) and spleen (2.93 and 2.58 log10 CFU/g).Conclusion: Applying the model to evaluate the efficacy of amphotericin B showed thatamphotericin B reduced mortality rate and the fungal burden in kidneys of mice receiving LD 90and LD10, respectively.* Key words: Candida albicans; Mouse; Amphotericin B; In vivo.ĐẶT VẤN ĐỀCác bệnh do nấm đang có xu hướngngày càng gia tăng, do đó đòi hỏi phải cóthuốc điều trị bệnh an toàn, hiệu quả.Thuốc sản xuất ra trước khi đưa vào ápdụng điều trị cần được đánh giá hiệu quảmột cách khách quan, khoa học. Trongđánh giá hiệu quả thuốc có kỹ thuật đánhgiá in vitro và in vivo. Đánh giá in vitro có thể* Học viện Quân yNgười phản hồi (Corresponding): Lê Trần Anh (anh lt@vmmu.edu.vn)Ngày nhận bài: 27/08/2015; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 25/11/2015Ngày bài báo được đăng: 30/11/201558TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2015cung cấp thông tin ban đầu về hiệu quảthuốc, tuy nhiên thuốc có tác dụng tốtin vitro không đảm bảo có hiệu lực caoin vivo. Nghiên cứu thực nghiệm động vậtcàng đặc biệt quan trọng trong giai đoạntiền lâm sàng nghiên cứu hiệu quả phốihợp thuốc, các thuốc mới, đánh giá hiệuquả in vivo cũng như độc tính cấp, mạncủa chúng [4, 6]. Candida sp. là một trongnhững tác nhân gây bệnh nấm hệ thốnghay gặp nhất, trong đó C. albicans là cănnguyên phổ biến, do đó được nhiều tácgiả quan tâm nghiên cứu. Việt Nam lànước có khí hậu nhiệt đới nóng ẩm, thuậnlợi cho nấm và các bệnh nấm phát triển.Hiện nay ở Việt Nam chưa có cơ sở nàothực hiện gây bệnh nấm hệ thống trênđộng vật thực nghiệm để đánh giá hiệuquả thuốc điều trị. Chúng tôi tiến hành đềtài này với mục tiêu: Xây dựng quy trìnhgây bệnh nấm hệ thống do Candidaalbicans trên động vật thực nghiệm và ápdụng đánh giá hiệu quả điều trị bệnh nấmhệ thống in vivo của amphotericin B đểthử nghiệm mô hình.ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU1. Đối tượng nghiên cứu.- Động vật: chuột nhắt trắng, không phânbiệt đực cái, trọng lượng 20 ± 2 gam.- Nấm: C. albicans, chủng ATCC- 90028.2. Vật liệu nghiên cứu.* Dụng cụ:- Dụng cụ nuôi chuột, giữ chuột để tiêmtĩnh mạch, bơm tiêm 1 ml, kim 27G.- Dụng cụ nuôi cấy, định lượng nấm:buồng cấy vô trùng, hộp lồng petri,ống nghiệm, que cấy nấm, đèn cồn, kínhhiển vi, buồng đếm tế bào Neubauer, máyly tâm.- Dụng cụ xác định lượng nấm trongtạng: cân điện tử Mettler Toledo (Thụy Sĩ),chày, cối thủy tinh.* Hóa chất:- Dung dịch NaCl 0,9%; glucose 5%;gentamicin, formol.- Môi trường Sabouraud (Bio Rad, Pháp).- Thuốc amphotericin B (amphotret,Bharat Serums and Vaccines Ltd, Ấn Độ).3. Các kỹ thuật sử dụng trong nghiêncứu.- Nấm C. albicans nuôi cấy trong môitrường Sabouraud, ở nhiệt độ phòng theokỹ thuật thường quy. Vào ngày gây nhiễm,thu hồi nấm bằng nước muối sinh lý, lytâm hút bỏ dịch 3 lần để rửa. Đếm trongbuồng đếm tế bào tính toán mật độ nấm.- Tiêm tĩnh mạch đuôi chuột: chuột đượcgiữ trong dụng cụ, bộc lộ đuôi chuột, mỗilần tiêm 0,2 ml dung dịch nấm/thuốc vàotĩnh mạch đuôi chuột.- Kỹ thuật xác định mật độ nấm trongtạng: lấy tạng bằng phương pháp v ...