Phân lập và tuyển chọn những chủng vi khuẩn lactic có tiềm năng probiotic

Vi khuẩn lactic có vai trò rất quan trọng trong cuộc sống của chúng ta. Chúng tạo ra các thực phẩm lên men và bảo quản thực phẩm khỏi bị hư hỏng. Ngoài ra chúng còn tạo ra các chế phẩm probiotic đáp ứng nhu cầu sức khỏe của con người.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phân lập và tuyển chọn những chủng vi khuẩn lactic có tiềm năng probioticPHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NHỮNG CHỦNGVIKHUẨN LACTIC CÓ TIỀM NĂNG PROBIOTICPhan Thị Thanh Diễm1Tóm tắt: Vi khuẩn lactic có vai trò rất quan trọng trong cuộc sống của chúng ta. Chúng tạora các thực phẩm lên men và bảo quản thực phẩm khỏi bị hư hỏng. Ngoài ra chúng còn tạo ra cácchế phẩm probiotic đáp ứng nhu cầu sức khỏe của con người. Từ các nguồn thực phẩm lên menkhác nhau chúng tôi đã phân lập và tuyển chọn được bốn chủng vi khuẩn có khả năng sinh lacticacid cao đó là L1, L2, L4 và L6. Tiếp tục kiểm tra tiềm năng probiotic của các chủng trên cho thấycả 4 chủng đều có khả năng đối kháng mạnh với E. coli và có khả năng sống sót trong điều kiệnpH thấp. Trong đó L1 là chủng có tiềm năng probiotic cao nhất.Từ khóa: Vi khuẩn lactic, Probiotic.1.Mở đầuCùng với nhiều lĩnh vực khoa học phục vụ lợi ích của con người, cuộc cách mạng khoa họckỹ thuật đưa con người bước vào nền văn minh hiện đại. Khi những nhu cầu về vật chất được đápứng, con người ngày càng quan tâm đến sức khỏe của mình hơn. Vì vậy, con người đã và luôn đitìm một sản phẩm hoàn thiện vừa chăm sóc và bảo vệ sức khỏe, vừa có thể là dược phẩm để trịliệu một số bệnh của thời đại. Probiotic là sản phẩm đáp ứng được các yêu cầu đó. Dù ngàn nămtrước con người đã biết sử dụng probiotic như một thực phẩm bảo vệ sức khỏe nhưng vào nhữngnăm gần đây probiotic mới được đánh giá cao và nghiên cứu sâu hơn.Các nhà khoa học đã tìm ra hầu hết vi khuẩn lactic được sử dụng phổ biến trong những sảnphẩm lên men thông thường để tạo ra các chế phẩm probiotic chất lượng phục vụ cho con ngườinhư: sữa uống Yakult, men vi sinh sống hỗ trợ điều trị bệnh rối loạn tiêu hóa… Về mức độ an toànthì probiotic luôn đứng ở vị trí đầu so với các phương thức khác, vì tác động của probiotic xuấtphát từ cơ chế điều hòa tự nhiên, không gây nên bất cứ một sản phẩm phụ có hại nào hay một tácđộng xấu nào đến cơ thể sinh vật chủ. Tuy nhiên, để có được một chế phẩm probiotic thỏa mãntất cả những yêu cầu được đặt ra với hoạt tính cao cần thiết, nhất định phải nói đến quá trình chọnlọc các chủng vi khuẩn có tiềm năng probiotic. Đây là bước cực kỳ quan trọng, bởi vì nó đượcxem là yếu tố quyết định vai trò, tác dụng của chế phẩm probiotic lên đối tượng cần quan tâm.Một chủng vi khuẩn có được xem là có khả năng sinh probiotic hay không phụ thuộc vào kết quảcủa khâu tuyển chọn này. Bài báo này trình bày một số kết quả phân lập và tuyển chọn các chủngvi khuẩn lactic có tiềm năng probiotic.2.Vật liệu và phương pháp nghiên cứu2.1 . Vật liệu1. ThS. Khoa Lý-Hóa-Sinh, trường Đại học Quảng NamCác chủng vi khuẩn lactic từ các nguồn thực phẩm lên men như yaourt, dưa cải chua, mentiêu hóa sống có trên thị trường.Môi trường phân lập, nuôi cấy, giữ giống và nghiên cứu các đặc tính của vi khuẩn lacticMôi trường MRS: peptone: 10 g; cao thịt: 10 g; cao nấm men: 5 g; glucose: 10 g; Tween: 1ml;K2HPO4: 2 g; natrium acetate: 5 g; ammonium citrate: 2 g; MgSO4: 0,2 g; MnSO 4: 0,2 g; agar:20g; nước cất thêm đủ: 1000 mlMôi trường sơ chọn giống carbonate-agar: cao nấm men: 5 g; glucose: 20 g; CaCO3: 10 g;agar: 20g; nước cất: 1000 ml.Môi trường lên men: glucose: 10 g; peptone: 10 g; cao thịt: 1 g; NaCl: 5 g; nước cất thêmđủ 1000 ml; pH: 7,4.Môi trường nuôi cấy và giữ giống vi sinh vật kiểm định: cao thịt: 5 g; peptone: 5 g; NaCl:5 g; agar: 20 g, nước cất thêm đủ 1000 ml.-Các hóa chất được mua từ Đức (Merck), Trung Quốc.2.2 . Phương pháp nghiên cứu2.2.1.Phương pháp pha loãng và phân lậpDịch lên men được pha loãng bằng nước cất vô trùng theo sơ đồ ở Hình 1.Hình 1. Sơ đồ mô tả phương pháp pha loãngDùng pipet vô trùng hút 0,1 ml dịch lên men ở các độ pha loãng khác nhau từ 10-1 đến 10-8,nhỏ lên môi trường MRS-agar pH=5,5; trong điều kiện kỵ khí và nhiệt độ nuôi ủ ở 370C. Sau 2448 giờ những khuẩn lạc phát triển trên môi trường đặc trưng về màu sắc, hình dạng và kích thước.2.2.2. Chọn giống có khả năng sinh lactic acid bằng cách thử khả năng phân giải CaCO3Sau khi phân lập trên môi trường MRS-agar, chọn những khuẩn lạc riêng lẻ, cấy ria trên môitrường carbonate-agar, nuôi cấy ở nhiệt độ phòng trong điều kiện kỵ khí. Sau 72 giờ chọn cácchủng sinh lactic acid nhờ vào vòng trong suốt xuất hiện quanh khuẩn lạc. Vòng trong suốt cànglớn chứng tỏ lượng axít sinh ra càng nhiều.2.2.3.Chọn giống có khả năng sinh lactic acid bằng thuốc thử UphenmenDùng que cấy vô trùng lấy các chủng vi khuẩn đã thuần khiết cấy vào bình tam giác chứa 20ml môi trường MRS dịch thể, nuôi cấy tĩnh ở nhiệt độ phòng trong 3 ngày. Sau đó dịch nuôi cấyđược ly tâm 6000 vòng/phút trong 5 phút lấy dịch nuôi cấy để loại bỏ tế bào vi khuẩn, thu lấy dịchtrong. Lấy 3 ml dịch cho vào ống nghiệm đã chứa sẵn 2 ml thuốc thử Uphenmen, quan sát sự đổimàu của thuốc thử. Tiến hành đồng thời 2 thí nghiệm đối chứng:-Đối chứng 1: 3 ml lactic acid 2% + 2 ml thuốc thử-Đối chứng 2: 3 ml MRS dịch thể không cấy vi khuẩn + 2 ml thuốc thửQuan sát sự đổi màu ở các ống nghiệm để xác định chủng vi khuẩn tạo ra lactic acid nhiềunhất.2.2.4.Khảo sát đặc điểm nuôi cấy và hình thái khuẩn lạc của chủng tuyển chọnCấy vi khuẩn phân lập được lên bề mặt môi trường MRS-agar sao cho tạo được những khuẩnlạc tách rời. Nuôi cấy ở nhiệt độ phòng, sau 72 giờ quan sát và mô tả đặc điểm của khuẩn lạc.Quan sát tế bào vi khuẩn lactic dưới kính hiển vi vật kính 40X, mô tả sơ bộ hình thái tế bào củacác chủng nghiên cứu.2.2.5.Tuyển chọn các chủng vi khuẩn lactic có tiềm năng probioticTuyển chọn các chủng vi khuẩn lactic có đặc tính probiotic bằng cách tiến hành các thínghiệm: kiểm tra khả năng sống sót trong pH thấp, kiểm tra khả năng đối kháng với vi sinh vậtkiểm định, tạo chất kháng khuẩn.2.2.5.1. Kiểm tra khả năng sống sót trong pH thấpChuẩn bị môi trường MRS đã điều chỉnh pH từ 2, 3, 4 và 5 bổ sung 1 ml dịch vi khuẩn đãhoạt hóa, ủ kị khí ở nhiệt độ 370C trong 24 giờ. Sau đó dịch ...