Phát hiện Chlamydia Trachomatis bằng kỹ thuật khuếch đại gen trên bệnh nhân viêm khớp phản ứng

Viêm khớp phản ứng (VKPƯ) lμ một bệnh viêm mμng hoạt dịch khớp vô khuẩn thườngxẩy ra sau một nhiễm khuẩn nμo đó trong cơ thể. Cơ chế bệnh sinh chưa rõ, hiện nay cónhiều nghiên cứu đề cập đến vai trò của các kháng nguyên vi khuẩn như yersinia,Salmonella, Shigella, Chlamydia trachomatis...trong khởi phát vμ duy trì bệnh VKPƯ. Đểtìm hiểu mối liên quan của Chlamydia trachomatis với bệnh VKPƯ, chúng tôi tiến hμnh xétnghiệm PCR trong dịch khớp vμ nước tiểu của 52 bệnh nhân VKPƯ được khám vμ điều trịtại khoa khớp bệnh viện Bạch mai từ...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phát hiện Chlamydia Trachomatis bằng kỹ thuật khuếch đại gen trên bệnh nhân viêm khớp phản ứngTCNCYH 34 (2) - 2005 Ph¸t hiÖn Chlamydia Trachomatis b»ng kü thuËt khuÕch ®¹i gen trªn bÖnh nh©n viªm khíp ph¶n øng B¹ch Kh¸nh Hßa(1), TrÇn ThÞ Minh Hoa(2) (1) Tr−êng §¹i häc Y Hµ Néi (2) BÖnh viÖn B¹ch Mai Viªm khíp ph¶n øng (VKP¦) lµ mét bÖnh viªm mµng ho¹t dÞch khíp v« khuÈn th−êngxÈy ra sau mét nhiÔm khuÈn nµo ®ã trong c¬ thÓ. C¬ chÕ bÖnh sinh ch−a râ, hiÖn nay cãnhiÒu nghiªn cøu ®Ò cËp ®Õn vai trß cña c¸c kh¸ng nguyªn vi khuÈn nh− yersinia,Salmonella, Shigella, Chlamydia trachomatis...trong khëi ph¸t vµ duy tr× bÖnh VKP¦. §Ót×m hiÓu mèi liªn quan cña Chlamydia trachomatis víi bÖnh VKP¦, chóng t«i tiÕn hµnh xÐtnghiÖm PCR trong dÞch khíp vµ n−íc tiÓu cña 52 bÖnh nh©n VKP¦ ®−îc kh¸m vµ ®iÒu trÞt¹i khoa khíp bÖnh viÖn B¹ch mai tõ th¸ng 8/2001 ®Õn th¸ng 8/2003. KÕt qu¶ nghiªn cøuADN cña CT ®· ®−îc x¸c ®Þnh trong 53,8% mÉu bÖnh phÈm dÞch khíp vµ 42,2% ë n−íctiÓu cña c¸c bÖnh nh©n nghiªn cøu. So s¸nh víi tû lÖ kh¸ng nguyªn lipopolyarcaride (LPS)d−¬ng tÝnh 38.5 % mÉu n−íc tiÓu,kh¸ng thÓ IgG ®Æc hiÖu víi Chlamydia trachomatis(CT)d−¬ng tÝnh 44.2% trong huyÕt thanh vµ 34.6% trong dÞch khíp. Nh− vËy xÐt nghiÖm ANDcña CT ë dÞch khíp cã ®é nh¹y cao trong chÈn ®o¸n bÖnh VKP¦.I. §Æt vÊn ®Ò B¹ch mai. Tû lÖ nhiÔm chlamydia trachomatis ®−êng tiÕt niÖu sinh dôc ë Viªm khíp ph¶n øng (VKP¦) lµ t×nh bÖnh nh©n VKP¦ lµ 38.1%, cao h¬n h¼ntr¹ng viªm mµng ho¹t dÞch khíp v« nhãm bÖnh nh©n viªm cét sèng dÝnhkhuÈn th−êng xuÊt hiÖn sau mét nhiÔm khíp lµ 29%, nhãm c¸c bÖnh khíp kh¸ckhuÈn ë mét c¬ quan nµo ®ã cña c¬ thÓ. lµ 5.4% vµ ë ng−êi b×nh th−êng lµ 3.3%Viªm khíp ph¶n øng lµ bÖnh hay gÆp [2]. Chóng t«i tiÕn hµnh nghiªn cøu ®Ò tµinhÊt trong nhãm bÖnh lý cét sèng thÓ nµy nh»m môc ®Ých b−íc ®Çu t×m hiÓuhuyÕt thanh ©m tÝnh [1,2,6]. BÖnh sinh mèi liªn quan cña CT ®èi bÖnh nh©ncña bÖnh VKP¦ ch−a râ nh−ng cã nhiÒu VKP¦ vµ ®−a ra xÐt nghiÖm chÈn ®o¸nb»ng chøng chøng tá mét sè kh¸ng cã ®é nh¹y cao gióp cho c¸c b¸c sü l©mnguyªn vi khuÈn (Chlamydia trachomatis, sµng cã chØ ®Þnh sím vµ chÝnh x¸c trongyersinia, Salmonella...) gi÷ vai trß quan ®iÒu trÞ bÖnh VKP¦.träng trong bÖnh nguyªn vµ ®−îc coi lµmét trong nh÷ng t¸c nh©n khëi ®éng vµ II. Ph−¬ng ph¸p nghiªn cøuduy tr× ph¶n øng viªm khíp m¹n tÝnh Trong ®Ò tµi nµy chóng t«i nghiªn cøutrong bÖnh viªm khíp ph¶n øng [4,7]. 52 bÖnh nh©n VKP¦ ®−îc kh¸m, chÈn HiÖn nay bÖnh VKP¦ ®−îc quan t©m ®o¸n vµ ®iÒu trÞ néi tró hoÆc ngo¹i tró t¹inghiªn cøu ë c¸c n−íc T©y ¢u vµ Mü do khoa Khíp bÖnh viÖn B¹ch mai tõ th¸ngtû lÖ c¸c bÖnh lý l©y truyÒn qua ®−êng 8/2001 ®Õn th¸ng 8/2003. C¸c bÖnht×nh dôc ngµy cµng t¨ng [4,9]. ë n−íc ta, nh©n ®−îc chÈn ®o¸n theo tiªu chuÈnviªm khíp ph¶n øng còng kh¸ th−êng chÈn ®o¸n cña Amor (4).gÆp trong nhãm bÖnh lý cét sèng vµ 2.1. L©m sµng: theo tiªu chuÈn chÈnchiÕm tû lÖ 5.4% bÖnh nh©n khíp ®Õn ®o¸n cña Amorkh¸m vµ ®iÒu trÞ t¹i khoa Khíp bÖnh viÖn 17TCNCYH 34 (2) - 2005 2.2. XÐt nghiÖm: BÖnh nh©n ®−îc xÐt nghiÖm x¸c ®Þnhkh¸ng nguyªn LPS cña CT theo ph−¬ngph¸p Hexagon [8](Immunochromatographic), t×m kh¸ng thÓIgG ®Æc hiÖu CT trong huyÕt thanh vµdÞch khíp cña bÖnh nh©n VKP¦. Chóngt«i chän nh÷ng bÖnh nh©n cã ph¶n øngd−¬ng tÝnh víi c¸c xÐt nghiÖm trªn ®Ó tiÕnhµnh xÐt nghiÖm ADN trong dÞch khíp vµ H×nh ¶nh ®iÖn di s¶n phÈm PCR cña c¸cn−íc tiÓu. mÉu ADN t¸ch tõ dÞch khíp vµ n−íc tiÓu: 1 *Kü thuËt PCR x¸c ®Þnh ADN cña CT mÉu gåm a: dÞch khíp; b: n−íc tiÓutrong bÖnh phÈm dÞch khíp vµ n−íc tiÓu Thêi gian bÞ bÖnh trung b×nh lµ 17.4cña bÖnh nh©n nghiªn cøu (10) +12.5 th¸ng (bÖnh nh©n cã thêi gian m¾c - T¸ch ADN b»ng kit Quiagen (§øc) bÖnh ng¾n nhÊt lµ 1th¸ng, vµ bÖnh nh©ncho c¶ dÞch khíp vµ n−íc tiÓu. cã thêi gian m¾c bÖnh dµi nhÊt lµ 4 n¨m). - Ph¶n øng PCR: Thµnh phÇn cho Kh¸ng thÓ IgG ®Æc hiÖu CT d−¬ngmét mÉu 25µl gåm: dNTP 200µM, tÝnh ë 23/52 mÉu bÖnh phÈm huyÕt thanh10mM Tris-HCL, 50mM KCL, 1,5mM bÖnh nh©n chiÕm tû lÖ 44.2%, vµ tû lÖ nµy ë bÖnh phÈm dÞch khíp lµ 34.6% (15/52MgCl2, 2UI Taq ADN polymerase, 1µl måi tr−êng hîp). Trong ®ã cã 17 bÖnh nh©nxu«i vµ 1µl måi ng−îc, 3µl ADN cÇn xÐt (32.5%) cã kh¸ng thÓ IgG ®Æc hiÖu chonghiÖm. CT d−¬ng tÝnh trong c¶ 2 lo¹i bÖnh phÈm - Tr×nh tù måi: lµ huyÕt thanh vµ dÞch khíp (biÓu ®å 1)5’CTGCAGCCTCCGTAGAGTCTGGGCAGTGTC 3’ XÐt nghiÖm PCR cho thÊy cã 28/52 x¸c5’ AAGCTTTTCTTAACAATGCAAATGAGATAG 3’ ®Þnh ®−îc sù cã ...