Phát hiện đột biến mất đoạn hai gen Alpha Globin (--SEA) gây bệnh Αlpha Thalassemia bằng kỹ thuật PCR

Bài viết trình bày việc chẩn đoán xác định người mang đột biến dị hợp tử - SEA có ý nghĩa lớn với việc chẩn đoán trước sinh. Chẩn đoán sớm thai bị Hb Bart’s có vai trò quan trọng cho tư vấn di truyền.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phát hiện đột biến mất đoạn hai gen Alpha Globin (--SEA) gây bệnh Αlpha Thalassemia bằng kỹ thuật PCR NGHIÊN CỨU PHỤ SẢN/DI TRUYỀN Phát hiện đột biến mất đoạn hai gen Alpha Globin (--SEA) gây bệnh Αlpha Thalassemia bằng kỹ thuật PCR Đào Thị Trang1, Hoàng Thị Ngọc Lan1,2, Nguyễn Thị Hảo1, Bùi Thị Lành1, Hoàng Thị Hải1, Đoàn Thị Kim Phượng1,3 1 Trường Đại học Y Hà Nội 2 Bệnh viện Phụ sản Trung ương 3 Bệnh viện Đại học Y Hà Nội doi:10.46755/vjog.2020.1.790 Tác giả liên hệ (Corresponding author): Đào Thị Trang, email: daotrang.dt39@gmail.com Nhận bài (received) 05/12/2019 - Chấp nhận đăng (accepted) 20/04/2020 Tóm tắt Đặt vấn đề: Chẩn đoán xác định người mang đột biến dị hợp tử --SEA có ý nghĩa lớn với việc chẩn đoán trước sinh. Chẩn đoán sớm thai bị Hb Bart’s có vai trò quan trọng cho tư vấn di truyền. Mục tiêu: Đánh giá hiệu quả của việc phát hiện đột biến --SEA bằng phương pháp PCR. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: 66 mẫu DNA tách chiết từ 31 mẫu máu và 35 mẫu ối tươi/ối nuôi cấy đã làm xét nghiệm đột biến gen α globin bằng phương pháp lai phân tử ngược tại Trung tâm Tư vấn Di truyền, Bệnh viện Đại học Y Hà Nội. Các mẫu DNA được PCR bằng mồi đã thiết kế, sau đó điện di để xác định đột biến --SEA. So sánh kết quả giữa hai phương pháp. Kết quả: Đoạn mồi thiết kế đã khuếch đại thành công đoạn gen mang đột biến --SEA. 66/66 mẫu máu và mẫu ối có kết quả 100% tương đồng giữa hai phương pháp. Kết luận: PCR là một phương pháp chính xác, đơn giản, nhanh chóng và kinh tế trong chẩn đoán người mang gen cũng như chẩn đoán thai thi mang đột biến --SEA. Từ khóa: α-thalassemia, đột biến --SEA, PCR, kỹ thuật lai phân tử ngược. Detection of the (--SEA) double αlpha-globin gene deletion by simple PCR method Dao Thi Trang1, Hoang Thi Ngoc Lan1,2, Nguyen Thi Hao1, Bui Thi Lanh1, Hoang Thi Hai1, Doan Thi Kim Phuong1,3 1 Ha Noi Medical University 2 National Hospital of Obstetrics and Gynecology 3 Hanoi Medical University Hospital Abstract Background: Detecting the carriers of SEA double deletion, as well as fetuses with Hb Bart’s syndrome is essential to prenatal diagnosis.  Objectives: Evaluating accuracy and the cost-effectiveness of a simple PCR method in determining --SEA mutation.  Materials and methods: 66 DNA extraction products of 31 blood and 35 amniotic fluid samples were tested for --SEA mutation by hybridization technique in Genetic Counseling Centre, Hanoi Medical University Hospital. These samples were diagnosed --SEA mutation by the combined gap-PCR method (with the designed primers) and agarose gel electro- phoresis. The results of this PCR assay were compared with that of the reserved hybridization method. Results: These designed primers have made successful PCR to detect --SEA deletion. The results of the PCR assay were completely in concordance with that of the reserved hybridization method.  Conclusion: Application of PCR assay on detecting --SEA double alpha globin gene deletion is exact, simple, rapid (to- wards both blood and prenatal samples) and cost-effective in Vietnam. Keywords: α-thalassemia, --SEA mutation, PCR method, reserved hybridization technique. Đào Thị Trang và cs. Tạp chí Phụ sản 2020; 18(1):27-31. doi: 10.46755/vjog.2020.1.790 27 1. ĐẶT VẤN ĐỀ Αlpha thalassemia là bệnh di truyền lặn trên nhiễm các đoạn mồi tự thiết kế, nhằm rút ngắn thời gian cũng sắc thể thường do đột biến gen α-globin, gây thiếu máu như đơn giản hóa kỹ thuật xét nghiệm và tăng hiệu quả tan máu mạn tính hoặc phù thai, thai chết lưu [1]. Xác về mặt chi phí. Đánh giá tính chính xác của xét nghiệm định người mang đột biến --SEA có vai trò quan trọng PCR trong việc phát hiện người bệnh và thai nhi có đột trong tư vấn chẩn đoán trước sinh. Chẩn đoán sớm thai biến --SEA bằng việc so sánh kết quả với phương pháp nhi mắc hội chứng Hb Bart’s có ý nghĩa đối với việc tiên lai phân tử. lượng cho thai nhi, hạn chế những biến chứng nguy hiểm cho thai phụ và cung cấp thông tin di truyền hữu ích cho 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU gia đình. Hiện nay, tại Bệnh viện Đại học Y Hà Nội, các Đối tượng nghiên cứu: 66 mẫu DNA được tách chiết phương pháp phát hiện đột biến --SEA chủ yếu dựa vào từ 31 mẫu máu ngoại vi và 35 mẫu tế bào ối tươi/ối nuôi kit thương mại với nguyên lý lai phân tử ngược. Phương cấy của người hoặc thai nhi có chỉ định xét nghiệm đột pháp này có thể phát hiện được nhiều đột biến cùng lúc biến gen α-thalassemia tại Bệnh viện Đại học Y Hà Nội từ nhưng kỹ thuật phức tạp, tốn thời gian và giá thành cao. tháng 4/2019 đến 10/2019. Nghiên cứu có sử dụng DNA Trong khi đó, nhiều nghiên cứu tại Việt Nam cho thấy của người bình thường và mẫu tế bào ố ...