Phát hiện enterovirus 71 bằng phương pháp Real ‐ Time RT ‐ PCR

Nội dung của bài viết trình bày về vấn đề xây dựng quy trình phát hiện Enterrovirus 71 bằng phương pháp Real‐time RT‐PCR, kết quả cho thấy quy trình Real‐time PCR cóđộnhạy vàđặc hiệu cao để phát hiện EV71 từcác mẫu lâm sàng.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phát hiện enterovirus 71 bằng phương pháp Real ‐ Time RT ‐ PCRYHọcTP.HồChíMinh*Tập18*Phụ bảncủaSố 1 *2014NghiêncứuYhọcPHÁTHIỆNENTEROVIRUS71BẰNGPHƯƠNGPHÁPREAL‐TIMERT‐PCRTrịnhThịHồng*,HồThịThanhThủy**,CaoMinhNga***TÓMTẮTMởđầu:Enterovirus71(EV71)làtácnhânchủyếugâynênbệnhTay‐Chân‐Miệngvàthườnggâyracácbiếnchứngnguyhiểm,cóthểdẫnđếntửvong.Mụctiêu:XâydựngquytrìnhpháthiệnEnterrovirus71bằngphươngphápReal‐timeRT‐PCR.Phương pháp: Thiếtkếmồivàmẫu dòdựatrênvùngVP1củaEV71. TiếnhànhthựcnghiệmbằngphươngphápReal‐timeRT‐PCRtrêncácmẫudịchphết,mẫuphâncủanhữngbệnhnhânnghingờnhiễmTay‐Chân‐Miệng.Kết quả: Hệ mồivà mẫudò Taqman của chúngtôithiết kế cóđộ đặchiệu cao, độ nhạy khoảng 102 bảnsao/phảnứng.QuytrìnhcóthểđượcsửdụngđểpháthiệnEV71trongcảmẫudịchphếtvàmẫuphân.Kếtluận:QuytrìnhReal‐timePCRmàchúngtôixâydựngcóđộnhạyvàđặchiệucaođểpháthiệnEV71từcácmẫulâmsàng.Từkhóa:BệnhTay‐Chân‐Miệng,Enterovirus71(EV71),Real‐timeRT‐PCR.ABSTRACTDETECTIONOFENTEROVIRUS71BYREAL‐TIMERT‐PCRMETHODTrinhThiHong,HoThiThanhThuy,CaoMinhNga*YHocTP.HoChiMinh*Vol.18‐SupplementofNo1‐2014:273‐278Background:Enterovirus71(EV71)isthemaincauseofHand‐Foot‐MouthDisease(HFMD)andoftencausedangerouscomplicationsthatcanleadtodeath.Objectives:TodesignaprocedurefordetectionEV71byreal‐timePCR.Methods:SpecificprimersandTaqmanprobeweredesignedbasedonVP1regionofEV71.Conductingexperiments by real‐time PCR method on swab and stool samples collected from pediatric patients withsuspectedHFMD.Results:Ourprimer‐probesystemthatwedesignedwashighlyspecific.Thesensitivityofthemethodwas10 copies/reaction.Theprocedurecanbeappliedtodetectioninbothswabandstoolsamples.2Conclutions:Real‐timeRT‐PCRmethodwesetupshowedahighsensitivityandspecificitytodetectionofEV71fromclinicalspecimens.Keywords:Hand,FootandMouthDisease(HFMD),Enterovirus71(EV71),Real‐timeRT‐PCR.trongvòng1tuần.Tuynhiên,nếudoEnterovirusĐẶTVẤNĐỀ71(EV71)thìthườnggâyracácbiếnchứngnguyBệnh Tay‐Chân‐ Miệng là một bệnh nhiễmhiểmvàcóthểdẫnđếntửvongnếukhôngđượckhuẩn cấp tính do virus đường ruột gây ra,pháthiệnsớmvàxửlíkịpthời.thườnggặpởtrẻemdưới5tuổi.Bệnhtay‐chân‐Sựbùngphátcácvụdịchlớn,nhỏliênquanmiệngmàdocácchủngEnteroviruskhácgâynêntớiEV71đãđượcbáocáotrêntoànthếgiớikểtừthìthườngởthểnhẹ,ítcóbiếnchứngvàtựkhỏi*TrườngĐạihọcKhoahọcTựnhiênTP.HCM **CôngtyCPCôngnghệViệtÁ***BộmônViSinh,KhoaY,ĐạihọcYDượcTP.HCMĐT:0908361512Email :pgscaominhnga@yahoo.comTácgiảliênlạc:PGS.TS.CaoMinhNgaNhiễm273NghiêncứuYhọcYHọcTP.Hồ ChíMinh*Tập18*PhụbảncủaSố 1 *2014đầu những năm 1970. Trong thập kỷ qua, tỷ lệmắcbệnhtaychânmiệng,đặcbiệtlàdonhiễmEV71, xuất hiện ngày càng tăng trong khu vựcChâuÁTháiBìnhDương(3,4,7).Điềunàyđãthúcđẩy các mối quan tâm rằng nếu không có biệnphápcanthiệp,nósẽtiếptụclâylantrongkhuvựcvàtoàncầu.Hiệnnay,bệnhtaychânmiệngchưacóvắcxin phòng bệnh và chưa có thuốc điều trị đặchiệu. Trong khi đó EV71 lại gây ra nhiều biếnchứng nguy hiểm nên việc xác định nhanhchóngvàchínhxácEV71mangmộtýnghĩarấtquantrọng.Chẩn đoán xác định dựa trên nuôi cấy mô,phânlậpvàpháthiệnvirusnhưngtốnthờigianvà khó thực hiện. Do đó những phương phápnàykhôngthiếtthựcchoviệcraquyếtđịnhlâmsàng,đặcbiệttrongviệcquyếtđịnhgiữacáccanthiệp và điều trị ở những bệnh nhân mà đặctrưng lâm sàng không rõ ràng hay thậm chíkhôngcó.Hiệnnay,cácxétnghiệmkhángthểvàPCR phổ biến rộng rãi hơn và cho phép chẩnđoán nhanh hơn nhưng chưa được sử dụngrộng rãi do chi phí cũng như mối quan tâm vềviệc độ nhạy và độ đặc hiệu không đảm bảo(3).Vớimongmuốnpháttriểnmộtphươngphápcóthểpháthiệnnhanhbệnhvàđiềutrịkịpthờivớiđộnhạyvàđặchiệucaohơnsovớicácphươngpháp thông thường, chúng tôi tiến hành “Xâydựng quy trình phát hiện Enterrovirus 71 bằngphươngphápReal‐timeRT‐PCR”.ĐỐITƯỢNG‐PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU‐ Các mẫu dịch phết hầu họng, dịch phếttrực tràng,mẫu phânnghingờ nhiễmtay chânmiệng được cung cấp bởi Viện vệ sinh dịch tễTây Nguyên, Bệnh viện Hải Phòng, Bệnh việnKhánhHòa.‐ Các mẫu dịch phết hầu họng, dịch phếttrực tràng dương tính EV71 đã được phát hiệnbằng phương pháp Real‐time RT‐PCR do BệnhviệnNhiĐồng2cung ...