Phát hiện Virus viêm gan B trong huyết thanh người cho máu bằn kỹ thuật PCR

Viêm gan do virus lμ một trong nhữngbệnh gây lây nhiễm cao vμ nguy hiểm chosức khoẻ các cộng đồng dân cư trên toμnthế giới. Có nhiều loại virus gây viêm ganđã được phát hiện: HAV, HBV, HCV, HDV,HEV, HGV. Tỷ lệ mang HBsAg(+) của cáccộng đồng thuộc các châu lục, các vùngđịa lý rất khác nhau: Các nước châu Âu cótỷ lệ thấp nhất, trung bình ở các nước châuMỹ, cao ở một số nước châu á, châu Phi,rất cao ở thổ dân úc [2]. Sự lây nhiễmHBV, HCV từ người nμy sang người khác,chủ yếu qua đường máu....
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phát hiện Virus viêm gan B trong huyết thanh người cho máu bằn kỹ thuật PCR TCNCYH 26 (6) - 2003 Ph¸t hiÖn virus viªm gan b trong huyÕt thanh ng−êi cho m¸u b»ng kü thuËt pcr V¨n §×nh Hoa, Vâ V¨n Huy §¹i häc Y Hµ Néi Sµng läc m¸u, c¸c s¶n phÈm m¸u tèt lµ gãp phÇn h¹ thÊp tû lÖ c¸c bÖnh l©y nhiÔm qua®−êng m¸u: HIV, HBV, HCV... ë nhiÒu n−íc tiªn tiÕn, c¸c kü thuËt sinh häc ph©n tö ®· trëthµnh xÐt nghiÖm sµng läc th−êng quy ®èi víi c¸c c¬ së sö dông m¸u vµ c¸c s¶n phÈmm¸u. Víi kü thuËt PCR, chóng t«i ph¸t hiÖn ®−îc 1 trong sè 73 tr−êng hîp (HBsAg(-)) ®Õnkh¸m søc khoÎ cho m¸u t¹i ViÖn HuyÕt häc TruyÒn m¸u TW cã DNA HBV(+). Sè l−îngcßn Ýt nh−ng phÇn nµo nãi lªn gi¸ trÞ cña kü thuËt PCR - mét c«ng cô gãp phÇn n©ng caosù an toµn truyÒn m¸u.i. §Æt vÊn ®Ò Kh¸ng nguyªn bÒ mÆt (HBsAg): lµ lo¹i Viªm gan do virus lµ mét trong nh÷ng kh¸ng nguyªn ®−îc tæng hîp nhiÒu nhÊtbÖnh g©y l©y nhiÔm cao vµ nguy hiÓm cho trong sè c¸c kh¸ng nguyªn cña HBV, xuÊtsøc khoÎ c¸c céng ®ång d©n c− trªn toµn hiÖn sím ë trong m¸u ng−êi bÞ nhiÔm (cãthÕ giíi. Cã nhiÒu lo¹i virus g©y viªm gan thÓ sau 6 ngµy bÞ nhiÔm), t¨ng dÇn vµ biÕn®· ®−îc ph¸t hiÖn: HAV, HBV, HCV, HDV, mÊt sau 4-8 tuÇn lÔ tõ khi cã triÖu chøngHEV, HGV. Tû lÖ mang HBsAg(+) cña c¸c l©m sµng. NÕu sau 6 th¸ng mµ HBsAg vÉncéng ®ång thuéc c¸c ch©u lôc, c¸c vïng d−¬ng tÝnh th× cã nguy c¬ bÞ nhiÔm HBV®Þa lý rÊt kh¸c nhau: C¸c n−íc ch©u ¢u cã m¹n tÝnh. §a sè c¸c kü thuËt xÐt nghiÖmtû lÖ thÊp nhÊt, trung b×nh ë c¸c n−íc ch©u HBsAg hiÖn nay th−êng chØ ph¸t hiÖn ®−îcMü, cao ë mét sè n−íc ch©u ¸, ch©u Phi, tõ tuÇn lÔ thø 4 ®Õn tuÇn lÔ thø 8 [2].rÊt cao ë thæ d©n óc [2]. Sù l©y nhiÔm Kh¸ng nguyªn lâi (HBcAg) cã trongHBV, HCV tõ ng−êi nµy sang ng−êi kh¸c, nh©n tÕ bµo gan bÞ nhiÔm virus, kh¸ngchñ yÕu qua ®−êng m¸u. Nh÷ng ng−êi bÞ nguyªn nµy kh«ng xuÊt hiÖn trong m¸u.nhiÔm HBV cã thÓ bÞ viªm gan cÊp, cã thÓ Kh¸ng nguyªn vá (HBeAg) xuÊt hiÖnbÞ viªm gan m¹n dÉn ®Õn hËu ho¹ x¬ gan, sau HBsAg. Võa cã HBsAg (+) võa cãung th− gan. Nh÷ng ng−êi bÞ viªm gan HBeAg (+) lµ c¸c ®èi t−îng chñ yÕu g©ym¹n cã nguy c¬ bÞ ung th− gan tiªn ph¸t l©y nhiÔm m¹nh nhÊt v× HBeAg lµ dÊu hiÖurÊt cao, gÊp 200 lÇn nh÷ng ng−êi b×nh cña virus ®ang nh©n lªn.th−êng [2,3]. N−íc ta n»m trong khu vùc Trong c¸c ®−êng l©y nhiÔm HBV th× l©yl−u hµnh dÞch ®Þa ph−¬ng cao, tû lÖ ng−êi nhiÔm qua truyÒn m¸u vµ c¸c s¶n phÈmmang HBsAg(+): 10-20% tuú theo nghÒ cña m¸u ®· vµ ®ang ®−îc céng ®ång hÕtnghiÖp, ®êi sèng sinh ho¹t [3]. søc quan t©m bëi lÏ nhu cÇu vÒ m¸u vµ Còng nh− c¸c virus kh¸c, HBV cã nhiÒu s¶n phÈm cña m¸u võa ngµy cµng t¨nglo¹i kh¸ng nguyªn kh¸c nhau. 1 TCNCYH 26 (6) - 2003cao trong ®iÒu trÞ võa lµ m«i tr−êng rÊt dÔ - Ph¸t hiÖn DNA HBV trong huyÕtbÞ nhiÔm virus. An toµn truyÒn m¸u cµng thanh cña c¸c ®èi t−îng cho m¸ucao th× phßng tr¸nh c¸c bÖnh l©y nhiÔm ii. §èi t−îng, ph−¬ng ph¸p nghiªnnãi chung vµ l©y nhiÔm HBV nãi riªng cøucµng hiÖu qu¶ [4,8]. 1. §èi t−îng nghiªn cøu: C¸c kü thuËt xÐt nghiÖm tiªn tiÕn cã ®é - Hoµn chØnh kü thuËt: 30 mÉu huyÕtchÝnh x¸c cao nh− ELISA, RIA chØ ph¸t thanh cã HBsAg(+) vµ 30 mÉu huyÕt thanhhiÖn ®−îc c¸c kh¸ng nguyªn, kh¸ng thÓ cã HBsAg(-) (kü thuËt ELISA).chèng HBV trong m¸u cña ng−êi nhiÔm. - §èi t−îng nghiªn cøu: 73 mÉu huyÕtSau khi x©m nhËp, HBV ph¶i cã mét thêi thanh cã HBsAg(-) cña c¸c ®èi t−îng chogian sinh s«i ph¸t triÓn, ph¶i cã mét m¸u (HIV-, HBV-, HCV-), trong sè 73 mÉukho¶ng thêi gian nhÊt ®Þnh th× l−îng kh¸ng huyÕt thanh nµy cã 52 mÉu cña c¸c ®èinguyªn phãng thÝch vµo m¸u míi ®ñ ®Ó t−îng cho m¸u nh©n ®¹o, 21 mÉu cña c¸cc¸c kü thuËt tiªn tiÕn ë trªn ph¸t hiÖn ®−îc. ®èi t−îng ®Õn kh¸m søc khoÎ ®Ó cho m¸uMÆt kh¸c sau khi bÞ nhiÔm c¬ thÓ còng t¹i ViÖn HuyÕt häc TruyÒn m¸u trung −¬ng.ph¶i cã mét thêi gian míi ®¸p øng t¹o 2. Ph−¬ng ph¸p, kü thuËt nghiªn®−îc mét l−îng kh¸ng thÓ nhÊt ®Þnh. Giai cøu:®o¹n ch−a cã ®¸p øng miÔn dÞch th−êngkÐo dµi tõ 2-26 tuÇn (gäi lµ giai ®o¹n cöa - LÊy m¸u t¸ch huyÕt thanh.sæ). Trong giai ®o¹n ch−a cã triÖu chøng - ChiÕt t¸ch DNA tõ huyÕt thanh b»ngl©m sµng, ch−a cã ®¸p øng miÔn dÞch, viÖc ph−¬ng ph¸p Ethanol/ Chloroform vµph¸t hiÖn sù cã mÆt cña HBV rÊt khã kh¨n. Boom. Kü thuËt PCR (polymerase chain - TiÕn hµnh ph¶n øng PCR trªn m¸yreaction) cña Karry Mullis lµ mét ph¸t kiÕn cña h·ng Perkin Elmer víi Primer cñaquan träng cña sinh häc ph©n tö gióp ph¸t h·ng Takara NhËt B¶n cã tr×nh tùhiÖn c¸c genom cña c¸c virus, cã nghÜa lµ nucleotid:ph¸t hiÖn ®−îc sù cã mÆt cña chóng kÓ c¶khi chóng kh«ng hoÆc ch−a g©y h¹i g×. Môc tiªu: - Dïng kü thuËt PCR ®Ó ph¸t hiÖngenom virus viªm gan B trong huyÕt thanh. C1 sense, 21 mer 5 CCT CCA AGT TGT GCC TTG GG3 (nt 1741-1760) ...