Phương pháp dùng vi thao tác Skerman

Chuẩn bị dụng cụ: Bộ vi thao tác Skerma gồm 5 phần (hình bên).1) Lấy một ống pipet pastơ hơ trên ngọn lửa đèn cồn, kéo thành ống rất nhỏ, dài khoảng 4cm, gắn vào ống sắt trên cục nam châm D ( cố định bằng parafin nóng chảy). 2) Cố định phần dụng cụ B vào vật kính 10 3) Gắn nam châm có ống thuỷ tinh vào rãnh kim loại của dụng cụ B.4) Di chuyển phần thiết bị có gắn cục nam châm lên xuống cho đến khi nhìn thấy đầu ống thuỷ tinh ở giữa...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phương pháp dùng vi thao tác Skerman Phương pháp dùng vi thao tác SkermanChuẩn bị dụng cụ:Bộ vi thao tác Skerma gồm 5 phần (hình bên).1) Lấy một ống pipet pastơ hơ trên ngọn lửa đèn cồn, kéo thành ống rất nhỏ,dài khoảng 4cm, gắn vào ống sắt trên cục nam châm D ( cố định bằngparafin nóng chảy).2) Cố định phần dụng cụ B vào vật kính 103) Gắn nam châm có ống thuỷ tinh vào rãnh kim loại của dụng cụ B.4) Di chuyển phần thiết bị có gắn cục nam châm lên xuống cho đến khi nhìnthấy đầu ống thuỷ tinh ở giữa vi trường.5) Gắn đầu kim hàn E vào biến thế A và đặt vào vị trí đặt tiêu bản của kínhhiển vi. 6) Chỉnh kính, tìm vi trường, quan sát đầu kim hàn, điều chỉnh sao cho đầuque hàn và ống thuỷ tinh sát nhau và đều quan sát được dưới kính hiển vi. 7) Bật biến thế A nấc cao để đầu que hàn nóng đỏ và tiến về phía ống thuỷtinh, ấn que hàn chạm vào ống thuỷ tinh để ống thuỷ tinh bắt đầu nóng chảy,kéo nhanh ống thuỷ tinh khỏi kim hàn tạo thành que thuỷ tinh thuôn nhọn. 8) Hạ nhiệt độ que hàn bằng cách giảm biến thế, dùng đầu que hàn chạmnhẹ vào đầu que thuỷ tinh kéo nhẹ tạo thành hình chữ L.Giờ đây ta có thể bắt đầu thực hành lấy từng bào tử đơn độc trên đĩa thạch.Các bước tiến hành:1) Chuẩn bị mẫu: lá cây khô, cho vào hộp nhựa hoặc túi ni lông có chứanước vô trùng sẵn để làm ẩm, giữ 2-3 ngày ở nhiệt độ phòng, để kích thíchbào tử nẩy mầm.2) Lấy mẫu lá trên cho vào cốc thuỷ tinh, cho thêm nước cất, khuấy nhẹnhàng cho bào tử nổi lên mặt nước.3) Thu thập bào tử bằng cách lấy lam kính để nghiêng 450 so với mặt nướcđể lấy nước trên bề mặt cốc. Dùng lam kính đó trải một đường thẳng trênmặt đĩa môi trường phân lập nấm LCA (Low cacbon agar), MEA (Maltextract agar).4) Quan sát đĩa thạch trên dưới kính hiển vi, tìm bào tử có hình dạng đặcbiệt. Khi thấy bào tử cần tìm thì giữ nguyên vị trí.5) Gắn phần dụng cụ hình chữ V (hình C) của bộ vi thao tác vào vật kính 10của kính hiển vi. Tiếp đến gắn phần nam châm có que thuỷ tinh hình chữ Lvừa làm xong vào phần dụng cụ chữ V đó.Điều chỉnh lên xuống sao cho có thể quan sát được đầu chữ L của que thuỷtinh.6) Nâng kính lên sao cho bề mặt thạch sát với đầu que thuỷ tinh, lúc này tacó thể quan sát được cả bào tử nấm cần tìm và cả đầu L của que thuỷ tinh.7) Dùng que L kéo bào tử cần lấy ra phần môi trường sạch của đĩa thạch.Dùng chính kim phần chữ L đó đánh dấu điểm đặt bào tử.8) Hạ đĩa môi trường thấp xuống và dùng que cấy vô trùng lấy bào tử tạiđiểm đánh dấu chuyển sang đĩa thạch môi trường MEA. Nuôi cấy ở nhiệt độphòng và quan sát sự nảy mầm của bào tử hàng ngày. Nếu bào tử nảy mầmthì có thể chuyển sang thạch nghiêng để giữ giống sau khi để ở thạch đĩa 2-4tuần.