Phương pháp làm môi trường dinh dưỡng

Việc pha chế môi trường đòi hỏi phải chính xác và cẩn thận. Đây là một trong những khâu quan trọng bậc nhất trong công tác nghiên cứu vi sinh vật. Nếu môi trường không đảm bảo yêu cầu và kém phẩm chất thì sẽ ảnh hưởng đến kết quả nghiên cứu. Các bước chế tạo môi trường dinh dưỡng: 100 a.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phương pháp làm môi trường dinh dưỡngPhương pháp làm môi trường dinh dưỡngViệc pha chế môi trường đòi hỏi phải chính xác vàcẩn thận. Đây là mộttrong những khâu quan trọng bậc nhất trong công tácnghiên cứu vi sinh vật. Nếumôi trường không đảm bảo yêu cầu và kém phẩmchất thì sẽ ảnh hưởng đến kết quảnghiên cứu.Các bước chế tạo môi trường dinh dưỡng:100a. Pha chế: cân đong thật chính xác từng thành phầnmôi trường theo đúngtrình tự hướng dẫn trong tài liệu.- Đối với môi trường lỏng: cân, đong các chất rồi hoàtan trong nước.- Đối với môi trường đặc:+ Cân agar rồi ngâm vào nước, đung cho tan agar.+ Cân hoá chất rồi hoà tan trong nước.+ Trộn dung dịnh hóa chất vào agar đã tan thêm nướcvào cho đủ, khuấy vàđun cho tan đều.b. Làm trong môi trường:Môi trường nuôi cấy vi sinh vật cần phải trong, cónhư thế mới quan sát visinh vật được một cách dễ dàng. Có thể làm trongmôi trường bằng những cách sau:Lọc qua bông, vải thưa nhiều lớp hay giấy lọc.Dùng lòng trắng trứng gà: cứ một lít môi trường dùngmột lòng trắng trứng.Lấy riêng lòng trắng, cho thêm một lượng nước bằngnó rồi đánh tan cho đến khisủi bọt thì đổ vào môi trường và trộn đều, đun sôi 10– 15 phút, để lắng rồi lọc.c. Điều chỉnh pH môi trường.Mỗi loài vi sinh vật chỉ phát triển trong một khoảngpH nhất định. Do đó, khilàm môi trường cần điều chỉnh pH cho thích hợp.Người ta thường dùng các dungdịch sau để điều chỉnh pH môi trường: HCl, H2SO4,NaOH, NaHCO3... có nồng độ0,1N hoặc 10%.d. Phân phối môi trường.Sau khi điều chỉnh pH thì phân phối môi trường vàocác bình cầu, ốngnghiệm đã chuẩn bị từ trước. Riêng đối với hộp petrinếu không có dụng cụ để giữkhi khử trùng thì khử trùng môi trường xong mớiphân phối vào các hộp petri.- Đối với ống nghiệm: nếu dùng môi trường làmthạch nghiêng thì môitrường cần được phân phối chiếm ¼ thể tích của ốngnghiệm. Nếu làm thạch đứngthì lượng môi trường cần được phân phối từ ½ - 1/3thể tích ống nghiệm.- Đối với bình cầu hay bình tam giác, lượng môitrường được phân phốichiếm ½ - 1/3 thể tích của bình.- Các thao tác phân phối phải nhanh, gọn, khéo léo đểmôi trường khôngdính lên miệng dụng cụ hoặc nút bông và việc phânphối cần thực hiện xong trướckhi môi trường bị đông đặc.e. Khử trùng môi trường.Sau khi pha chế xong thì phải khử trùng môi trường.Có thể khử trùng bằngmột trong 3 phương pháp sau:* Hấp bằng hơi nước sôi ở áp suất thường.Đối với các môi trường lỏng không chịu được nhiệtđộ cao thì có thể khửtrùngở nhiệt độ thấp theo kiểu Paxtơ hay kiểuTyndan.- Kiểu Paxtơ: dựa trên cơ sở phần lớn vi sinh vậtkhông bào tử chết ở 60 –70OC trong khoảng 15 – 30 phút, hoặc 70 – 80OCtrong khoảng 5 – 10 phút. Nhưvậy, theo kiểu này là người ta hấp ở nhiệt độ hơinước sôi khoảng 30 – 40 phút.Khử trùng bằng phương pháp này chỉ có các tế bàosinh dưỡng bị tiêu diệt, các bàotử vẫn có khả năng sống sót cho nên phương phápnày chỉ dùng để khử trùng sữa,bia và một số thực phẩm khác.- Kiểu Tyndan: Đây là phương pháp khử trùng triệtđể ở nhiệt độ thấp bằngcách hấp gián đoạn. Theo phương pháp này người tahấp 3 -4 lần ở nhiệt độ hơinước sôi (1000C) mỗi lần 30 – 40 phút. Lần nọ cáchlần kia 24 giờ, giữa hai lần hấplấy môi trường ra đểvào tủ ấm có nhiệt độ thích hợpvới nhiệt độ nảy mầm của bàotử vi sinh vật (thường là 28 – 300C). Sở dĩ làm nhưvậy vì những bào tử còn sốngsót trong lần hấp trước, khi gặp nhiệt độ thích hợp sẽnảy mầm và chúng sẽ bị tiêudiệt ở lần hấp tiếp sau đó.* Hấp bằng hơi nước sôi ở áp suất cao (dùng nồi ápsuất – autoclave).Để khử trùng các loại môi trường (không chứa cácloại đường dễ bị phá huỷ)thông thường người ta sử dụng nồi hấp (autoclave)khử trùng ở 1 atm trong thờigian 20 phút. Nếu môi trường đựng trong các bìnhlớn từ 1 lit trở lên thì khử trùngtrong 30 phút. Đối với những môi trường chứa đườngdễ bị biến chất ở nhiệt độ caothì có thể khử trùng ở 0,5 – 0,6atm trong 15 phút.Khi khử trùng bằng nồi áp suất cần lưu ý những điểmsau:- Các dụng cụ (bình cầu, bình tam giác, ốngnghiệm...) cần có nút bông chặtvừa phải, bên ngoài có bọc bao làm bằng giấy dầuhay giấy báo để tránh hơi nướclàm ướt nút bông.- Phải kiểm tra mức nước trong nồi áp suất đã đủchưa (xem ở vạch ngangghi trên ống thuỷ tinh lắp bên ngoài nồi hấp).- Khi đóng các khoá nồi hấp cần vặn từng đôi một đốixứng nhau để nắpkhông bị vênh, không bị hở. Khi mở cũng phải mởtừng đôi đối xứng nhau.- Phải loại hết không khí trong nồi ra mới khoá vanthoát hơi nước nước đểáp suất trong nồi tăng lên. Có thể loại bỏ hết khôngkhí trong nồi bằng một trongcác cách sau:+ Đóng khoá thoát hơi nước để tăng áp suất trong nồilên khoảng 0,5atm rồimở van thoát hơi để áp suất hơi nước đó tống tất cảkhông khí lạnh ra khỏi nồi, chođến khi áp suất trở về không thì đóng van lại và tiếptục cho tăng áp suất đến mứccần thiết.+ Mở van thoát hơi nước ngay từ đầu khi hơi nướcbắt đầu thoát ra t ...