Phương pháp nhuộm Gram

Đây là phương pháp thường được dùng trong thực nghiệm vi sinh vật học. Phương pháp nhuộm kép do nhà bác học người Đan mạch là Christian Gram và những người cộng tác đưa ra năm 1884. Với phương pháp nhuộm này người ta có thể phân biệt vi sinh vật thành 2 nhóm: Gram dương (G+) và Gram âm (G-).
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phương pháp nhuộm GramPhương pháp nhuộm Gram:Đây là phương pháp thường được dùng trong thựcnghiệm vi sinh vật học.Phương pháp nhuộm kép do nhà bác học người Đanmạch là Christian Gram vànhững người cộng tác đưa ra năm 1884. Với phươngpháp nhuộm này người ta cóthể phân biệt vi sinh vật thành 2 nhóm: Gram dương(G+) và Gram âm (G-).Vi sinh vật bắt màu tím sau khi nhuộm gọi là vi sinhvật Gram dương (baogồm hầu hết xạ khuẩn, trực khuẩn sinh bào tử hiếukhí, nấm mốc, nấm men, cầukhuẩn). Còn những vi sinh vật bắt màu hồng gọi làGram âm như trực khuẩn sinhbào tử kỵ khí, một số cầu khuẩn như lậu cầu khuẩn,não mô cầu khuẩn...a. Nguyên tắc: Dựa trên khả năng bắt màu của tế bàochất và màng tế bàovới thuốc nhuộm tím kết tinh và iot mà hình thànhnên hai loại phức chất khácnhau:- Loại phức chất thứ nhất vẫn giữ nguyên màu củathuốc nhuộm nên khôngbị rửa trôi khi xử lý bằng cồn. Vi sinh vật có phứcchất này thuộc loại gram dương.- Loại phức chất thứ hai không giữ được màu củathuốc nhuộm nên mất màukhi bị xử lý bằng cồn và bắt màu của thuốc nhuộm bổsung. Vi sinh vật có phứcchất này thuộc loại gram âm.b. Cách tiến hành:- Làm vết bôi từ ống giống đã nuôi cấy 24 giờ. Đểkhô và cố định tiêu bảntrên ngọn lửa đèn cồn.- Đặt giấy lọc lên trên vết bôi.- Nhuộm tiêu bản bằng thuốc nhuộm tím kết tinh quagiấy lọc trong 1 phút.- Nhỏ dung dịch lugol lên trên vết bôi, giữ 1 phút rồiđổ đi.- Rửa tiêu bản bằng nước rồi tẩy bằng cồn 950 trong0,5 phút, để nghiêng tiêubản, nhỏ từ từ từng giọt cồn cho đến khi tan hết màu.- Rửa tiêu bản bằng nước.- Nhuộm bổ sung Fuchsin lên vết bôi 10 – 30 giây.- Rửa bằng nước, để khô tự nhiên hoặc hơ trên ngọnlửa đèn cồn và đemquan sát dưới kính hiển vi.1. Thuốc nhuộm Fuchsin kiềm:(1) Cồn 96o 10 ml Fuchsin kiềm0,3 gam(2) Phênol (axit phênic) 5 gam Nước cất95 mlTrộn dung dịch (1) với (2) và pha loãng 5 lần.2. Thuốc nhuộm xanh mêtylen 0,001%Xanh mêtylen 0,1 gamNước cất 1000ml3. Thuốc nhuộm tím gentian (tím kết tinh):(1) Gentian violet 1 gam Cồn 96o10 ml(2) Phenol 5 gam Nước cất100 mlTrộn (1) với (2) và lọc trong. Để dịch lọc trong lọmàu.4. Lugol:KI 2 gamI2 tinh thể 1 gamNước cất 300 mlHoà 2 gam KI vào 5 ml nước cất, sau đó thêm 1 gamI2 vào chờ cho I2 tanhết mới thêm nước cất đủ 300 ml.