PHƯƠNG PHÁP NHUỘM VI SINH VẬT

Làm tiêu bản tạm thời: 1. Các đặc điểm của tiêu bản tạm thời: - Thao tác làm tiêu bản đơn giản, tiến hành nhanh. - Quan sát được trạng thái sống của tế bào như: sự chuyển động của tiên mao, sự sinh sản, sự hình thành bào tử..ô trùng
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
PHƯƠNG PHÁP NHUỘM VI SINH VẬTPHƯƠNG PHÁP NHUỘM VI SINH VẬT - Làmtiêu bản tạm thời:1. Các đặc điểm của tiêu bản tạm thời:- Thao tác làm tiêu bản đơn giản, tiến hành nhanh.- Quan sát được trạng thái sống của tế bào như: sựchuyển động của tiênmao, sự sinh sản, sự hình thành bào tử...- Tiêu bản loại này chỉ sử dụng một lần rồi bỏ đi.2. Cách lấy giống vi sinh vật để làm tiêu bản:Muốn làm bất kỳ một loại tiêu bản nào về vi sinh vậtcũng phải thực hiện cácthao tác lấy giống vi sinh vật để làm vết bôi trên tiêubản. Các thao tác đó như sau:- Đốt đèn cồn.- Đặt ống giống có vi sinh vật vào giữa ngón cái vàngón trỏ của bàn tay trái,lòng bàn tay ngửa ra. Ống nghiệm để hơi nghiêngnhưng không được để canhtrường vi sinh vật chạm vào nút bông.- Tay phải dùng que cấy và vô trùng bằng cách hơtrên ngọn lửa đèn cồn. Đểque cấy thẳng đứng trên ngọn lửa đèn cồn cho đếnkhi đầu que cấy nóng đỏ rồi từ từđặt và di chuyển que cấy theo chiều nằm ngang trênngọn lửa.- Kẹp nút bông vào giữa ngón út và lòng bàn tayphải, xoay nhẹ nút bông 1vòng và kéo nút ra. Giữ nguyên nút bông như vậycho đến khi đậy nút vào.- Đốt miệng ống nghiệm trên ngọn đèn cồn.- Khéo léo đưa que cấy (đã nguội) vào ống giống đểlấy giống và nhẹ nhàngđưa que cấy ra.+ Nếu ống giống là môi trường lỏng chỉ cần nhúngđầu que cấy vàocanh trường rồi rút ra.+ Nếu ống giống là môi trường đặc thì dùng que cấylấy một chút sinhkhối vi sinh vật trên mặt thạch và hoà đều vào giọtnước cất vô trùng trên phiếnkính. Chú ý thao tác hết sức nhẹ nhàng để lấy giốngmà không cầy mặt thạch lên.- Rút que cấy ra, đốt miệng ống nghiệm, đậy ốngnghiệm nghiệm lại và đểống vào giá.Đưa giọt canh trường (hoặc sinh khối) vi sinh vật ởđầu que cấy đặt vàogiữa phiến kính để làm vết bôi.- Khử trùng lại que cấy trên ngọn đèn cồn rồi cất vàogiá.2. Cách làm tiêu bản giọt ép:- Nhỏ một giọt nước cất lên phiến kính sạch. Dùngque cấy hay pipet lấy mộtít tế bào (ở khuẩn lạc) hay một giọt dịch nghiên cứuđặt vào giọt nói trên. Huyềnphù vi sinh vật tạo nên trong giọt nước phải khôngquá đục, vì nếu đục thì rất khóquan sát.- Sau đó lấy một lá kính mỏng đặt lên giọt dịch đóthật cẩn thận sao chokhông tạo thành bọt khí. Muốn quan sát lâu thì dùngvazơlin bôi quanh mép lá kínhđể cho giọt dịch khỏi khô.- Đưa tiêu bản lên quan sát trên kính hiển vi.3. Cách làm tiêu bản giọt treo:Loại tiêu bản này dùng để theo dõi sự sinh sản, sựhình thành bào tử, khảnăng di động và phản ứng của tế bào vi sinh vật vớicác loại kích thích.- Dùng một loại phiến kính đặc biệt có một chỗ lõmhình tròn ở chính giữa.- Lấy vazơlin bôi quanh phần lõm của phiến kính.- Sau đó lấy pipet nhỏ một giọt dịch nghiên cứu lênchính giữa lá kính rồi lậtngược nhanh xuống để cho giọt dịch nằm ở phía dướilá kính. Đặt nhẹ nhàng lá kínhlên trên chỗ lõm của phiến kính tránh không cho giọtdịch nghiên cứu chạm vàothành hoặc đáy chỗ lõm.Vazơlin giúp cho lá kính đỡ xê dịch và giữ cho giọtdịch khỏi khô.4. Cách làm tiêu bản tạm thời có nhuộm:Tế bào vi sinh vật rất nhỏ bé và trong suốt nên quansát ở trạng thái sốngkhông màu sẽ không rõ, rất khó nhận xét được mộtcách tỷ mỉ. Do đó người ta cóthể nhuộm màu vi sinh vật sống để quan sát được dễdàng hơn.Để vi sinh vật vẫn sống và hoạt động được người tadùng dung dịch thuốcnhuộm loãng. Đối với tế bào chết thì bắt màu ngay,còn đối với tế bào sống thì vàiphút sau mới bắt màu. Cho nên bằng phương phápnày người ta cũng phân biệtđược tế bào sống hay tế bào chết.Các loại thuốc nhuộm thường dùng là:- Dung dịch xanh metylen hay fuschin (1: 1000).- Dung dịch đỏ Congo bão hoà 5%.- Dung dịch đỏ trung tính (0,001 – 0,00001%).a. Nguyên tắc: Phương pháp này sử dụng thuốcnhuộm không hoặc ít độcvới vi sinh vật và được pha loãng ở nồng độ đảm bảocho tế bào vi sinh vật vẫnsống và hoạt động sau khi nhuộm.b. Cách nhuộm:- Cho một giọt thuốc nhuộm lên phiến kính (dùngxanh mêtylen 0,001%).- Dùng que cấy đưa vào đó một ...