Phương pháp pha loãng

Phương pháp này dùng cho các mẫu đất. 1. Trước hết các mẫu đất phải được xử lý trước khi phân lập bằng cách phơi khô ở nhiệt độ phòng 2-3 ngày, sau đó dùng rây qua sàng có kích thước 23mm. 2. Cân 1g đất đã xử lý cho vào 9ml nước cất khử trùng, dùng vortex hoà tan đất. 3. Pha loãng mẫu ở các nồng độ pha loãng khác nhau: 10-4, 10-5 là 2 nồng độ thích hợp để phân lập nấm trong đất ở Việt Nam. 4. Hút 0,5 ml dịch pha loãng ở 2...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phương pháp pha loãng Phương pháp pha loãngPhương pháp này dùng cho các mẫu đất.1. Trước hết các mẫu đất phải được xử lý trước khi phân lập bằng cách phơikhô ở nhiệt độ phòng 2-3 ngày, sau đó dùng rây qua sàng có kích thước 2-3mm.2. Cân 1g đất đã xử lý cho vào 9ml nước cất khử trùng, dùng vortex hoà tanđất.3. Pha loãng mẫu ở các nồng độ pha loãng khác nhau: 10-4, 10-5 là 2 nồng độthích hợp để phân lập nấm trong đất ở Việt Nam.4. Hút 0,5 ml dịch pha loãng ở 2 nồng độ trên nhỏ lên đĩa Peptri chứa môitrường phân lập ( môi trường Martin, hoặc môi trường cơ sở). Dùng que gạttrang đều dịch trên bề mặt thạch.5. Đặt đĩa thạch trong tủ 250C, phân lập nấm sợi từ những khuẩn lạc riêng rẽtrên đĩa thạch sau khoảng thời gian 4- 10 ngày.5. Phương pháp pha loãng kết hợp với xử lý tia cực tím: Tương tự như 4 bước ban đầu của phương pháp pha loãng. Thêm mộtbước tiếp đó là đặt đĩa Peptri chứa môi trường phân lập và đã gạt dịch phaloãng đều trên bề mặt thạch vào tủ cấy và bật đèn tím 20 phút.Các bước khác tương tự như phương pháp pha loãng thông thường.6. Phương pháp phân lập nấm đảm và nấm túi (Basidiomycetes vàAscomycetes) 1. Quả thể nấm sau khi thu hái, rửa sạch, cắt miếng nhỏ khoảng 5cmphần bên trong. 2. Rửa sạch bằng nước cất vô trùng (2-3 phút), sau đó dùng băng dính 2mặt dính 3-4 miếng cắt quả thể gắn vào nắp trên của đĩa thạch nước. Đánhdấu vị trí gắn miếng nấm bằng bút viết kính ở đáy đĩa thạch nước. 3. Ủ 200C trong vòng 24 giờ. 4. Soi dưới kính lúp tại vị trí đánh dấu xem độ nảy mầm của bào tử nấm. 5. Dùng que cấy hình vòng tròn lấy đám bào tử vừa nảy mầm đó chuyểnsang đĩa môi trường thạch cao malt.7. Phương pháp rửa bề mặt:Phương pháp này dùng để phân lập nấm từ lá tươi hoặc lá rụng.Cách làm: 1) Cắt mẫu lá cây (tươi và khô), rễ cây, cành cây,... ra thành các miếngnhỏ, sau đó cho vào ống nghiệm. 2)Thêm 20ml dung dịch 0.005% Aerosol OT (di-iso-octyl sodiumsulfosuccinate) hoặc dung dịch 0.005% Tween 80, lắc mạnh bằng máyvortex khoảng 10 phút để loại trừ vi sinh vật bám trên bề mặt mẫu. 3) Bước làm khô mẫu: loại bỏ nước trong ống nghiệm, dùng kẹp vôtrùng lấy mẫu ra đặt lên bề mặt giấy lọc để qua đêm trong tủ cấy vô trùng,bước này có tác dụng loại bỏ sự nhiễm khuẩn. 4) Dùng kẹp vô trùng đặt mẫu đã làm khô lên bề mặt môi trường thạchLCA lăn một vòng mẫu lá (để loại tạp nhiễm (nếu có) một lần nữa), mỗi đĩathạch có thể chia làm 8 phần để kiểm tra. 5) Sau đó chuyển mẫu sang đĩa thạch môi trường LCA vô trùng khác,mỗi đĩa nên đặt một mẫu, mỗi mẫu 5 miếng cắt. Ủ ở nhiệt độ 250C trongvòng một tháng. 6) Trong khoảng thời gian đó hàng ngày phải kiểm tra sự nảy mầm củacác vi sinh vật dưới kính lúp, phân lập nấm sợi nếu có.