Phương pháp phát hiện virus gây bệnh cho lan

Hai loại virus chính gây hại nghiêm trọng cho lan là virus CymMV(Cymbidium mosaic virus) và ORSV (Odontoglossum ringspot virus). Việcphát hiện sớm để ngăn ngừa và kiểm soát virus gây nhiễm là vấn đề then chốt đặt ra cho các nhà nông cũng như là các nhà nghiên cứu nuôi trồng lan.Đối với các nhà vườn lan, thì việc khó khăn và nguy hại nhất là sự gây hại nghiêm trọng của các tác nhân gây bệnh cho cây lan, gồm có côn trùng, nấm, vi khuẩn, virus. Trong đó, mức độ tác hại do virus gây ra là...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phương pháp phát hiện virus gây bệnh cho lan Các phương pháp phát hiện virus gây bệnh cho lan Hai loại virus chính gây hại nghiêm trọng cho lan là virus CymMV (Cymbidium mosaic virus) và ORSV (Odontoglossum ringspot virus). Việc phát hiện sớm để ngăn ngừa và kiểm soát virus gây nhiễm là vấn đề then chốtđặt ra cho các nhà nông cũng như là các nhà nghiên cứu nuôi trồng lan.Đối với các nhà vườn lan, thì việc khó khăn và nguy hại nhất là sự gây hạinghiêm trọng của các tác nhân gây bệnh cho cây lan, gồm có côn trùng,nấm, vi khuẩn, virus. Trong đó, mức độ tác hại do virus gây ra là nghiêmtrọng nhất vì không phát hiện sớm ở giai đoạn đầu và mức độ lây lan cao.Trong đó hai loại virus chính gây hại nghiêm trọng cho lan làvirusCymMV (Cymbidium mosaic virus) và ORSV (Odontoglossum ringspotvirus). Do vậy, việc phát hiện sớm để ngăn ngừa và kiểm soát virus gâynhiễm là vấn đề then chốt đặt ra cho các nhà nông cũng như là các nhànghiên cứu nuôi trồng lan. Mà đặc biệt là làm sao có thể dễ dàng phát hiệnvà chẩn đoán sớm 2 loại virus này bằng các kỹ thuật thật đơn giản, ít tốnkém là điều bận tâm rất lớn của các nhà nông. Cũng đã có rất nhiều nghiêncứu tìm phương pháp tối ưu nhất để phát hiện 2 loại virus này, bao gồm cácphương pháp miễn dịch như ELISA, RIPA (rapid immunofilter paper assay);phương pháp PCR; các test nhanh; phương pháp sắc ký;… Hiện nay, cũngcó nhiều sản phẩm đang lưu hành trên thị trường dùng để phát hiện 2 loạivirus này như: kit DAS-ELISA của hãng DSMZ (D-0187, D-0493, D-0100),các test thử nhanh của Agdia, các kit Monoplex, Multiplex RT-PCR,… I. Phát hiện virus gây hại lan bằng cách test thử nhanh Các loại test thử nhanh này dùng để sàng lọc và phát hiện sớm các mẫunghi ngờ bị nhiễm bệnh, nhằm ngăn ngừa và kiểm soát bệnh hiệu quả. Cáchsử dụng các loại test thử này rất đơn giản, nhanh chóng và không cần đầu tưtrang thiết bị hiện đại hay kiến thức chuyên sâu như phương pháp chẩn đoánkhác ELISA, PCR. Chúng rất tiện lợi khi mang theo và thực hiện ở bất cứnơi nào trong nhà kính hay vườn nuôi mà không cần gửi mẫu đến phòng thínghiệm, vì vậy chúng phù hợp và tiện lợi cho nông dân nuôi trồng lan. Giáthành so với phương pháp ELISA hay PCR cũng ít hơn rất nhiều.Về nguyên tắc của các test này là: dựa vào phản ứng tạo màu khi có sự hiệndiện của 1 kháng nguyên (protein màng bao của virus), kết hợp chuyên biệtvới kháng thể tạo phức hợp có màu nhìn thấy được bằng mắt thường.Hiện nay, trên thị trường thế giới có rất nhiều dạng test kit này của các côngty nổi tiếng, có uy tín. Ở đây tôi xin giới thiệu 1 số sản phẩm để tham khảo: 1. Kit Agdia Orchid ImmunoStrip® ImmunoStrip® của Kit thử nhanh Agdia Orchid hãng Agdia(www.agdia.com) là một trong những kít được sử dụng phổ biến nhất đểphát hiện đồng thời 2 loại virus gây bệnh cho thực vật, virus chính gây táchại nghiêm trọng cho công tác nuôi trồng lan là Cymbidium mosaic virus(CymMV) và Odontoglossum ringspot virus (ORSV). Kit này rất tiện lợicho việc phát hiện đồng thời cả hai loại virus trên chỉ trong vòng ít phút. Kếtquả được thể hiện rất rõ ràng và cách sử dụng đơn giản, tiện lợi khi dùng bấtcứ ở đâu trong vườn hay nhà kính. Chỉ cần cho mẫu nghi ngờ vào túi chuyêndụng đã chứa sẵn dung dịch đệm SEB1 của kít và đặt các que thử (strip) vàotrong túi. Kết quả dương tính thể hiện mẫu nhiễm virus khi có sự xuất hiệnvạch màu trong vòng 20-30 phút khi so sánh với mẫu đối chứng: kết quảxuất hiện 3 vạch màu là nhiễm cả 2 loại virus; test xuất hiện 2 vạch nghĩa làchỉ nhiễm 1 loại virus (CymMV hoặc ORSV) và âm tính khi chỉ xuất hiện 1vạch màu (chi tiết ở hình 1): Hình minh họa kết quả phát hiện virus CymMV và ORSV bằng kit Agdia (www.agdia.com) 2. Pocket Diagnostics Orchid virus screen - Cymbidium mosaic virusand Odontoglossum ringspot virusSản phẩm gồm có 1 pack silica chứa 1 test phát hiện CymMV, 1 test pháthiện ORSV, 1 ống chứa dung dịch tách chiết (extraction bottle), 1 pipettnhựa, vài vòng bi thép sạch.Các sản phẩm của kit Pocket Diagnostics Orchid virus screen(http://jwund.homestead.com/pdviruskit.html) Cách thực hiện kit này rất dễ dàng tiện dụng, không cần kinh nghiệm vàdễ bảo quản (lưu trữ ở nhiệt độ phòng, khô thoáng): · Sử dụng mẫu lá mới nhất nghi ngờ nhiễm bệnh. · Cắt các mẫu mô lá này thành những mảnh nhỏ có kích thước khoảng 5-7mm theo chiều rộng, và chiều dài khoảng 1-2cm, sau đó lát mỏng các mẫu lá này theo chiều dọc. Đối với mẫu hoa, chỉ cần cắt nhỏ. · Thực hiện 3 vạch cắt chéo ngang mẫu lá đã lát mỏng, và đặt ...