Protein CagA xâm nhập tế bào ung thư dạ dày AGS qua con đường dịch thể của Helicobacter pylori

Vi khuẩn Helicobacter pylori sống trong lớp niêm mạc dạ dày của người và của một số động vật. Chúng là các “vi khuẩn chậm”, vì không có xu hướng tấn công vật chủ. Các bệnh như viêm loét và ung thư dạ dày, loét hành tá tràng …là kết quả tương tác giữa vi khuẩn và vật chủ kéo dài tới hàng chục năm [3]. Các nghiên cứu cho thấy, 90% vi khuẩn H. pylori “bơi “ trong lớp niêm mạc của dạ dày mà không tương tác trực tiếp với dạ dày. Năm 1999, Fiocca phát hiện: vi...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Protein CagA xâm nhập tế bào ung thư dạ dày AGS qua con đường dịch thể của Helicobacter pylori TCNCYH 23 (3) 2003 Protein CagA x©m nhËp tÕ bµo ung th− d¹ dµy AGS qua con ®−êng dÞch thÓ cña Helicobacter pylori Juanita. L. M 1, NguyÔn ThÞ Hång H¹nh2 1 Tr−êng §¹i häc tæng hîp Michigan (Mü) 2 ViÖn C«ng nghÖ Sinh häc C¸c dÞch thÓ cña vi khuÈn Helicobacter pylori chøa c¸c protein ®éc chÊt ®−îc h×nh thµnh tõ lípmµng ngoµi cña vi khuÈn Helicobacter pylori. Sù x©m nhËp cña chóng vµo tÕ bµo ung th− d¹ dµyAGS C120 ®· lµm t¨ng tæng hîp cña interleukin IL-8.I. §Æt vÊn ®Ò trong tÕ bµo biÓu m« d¹ dµy lµ do cagA cña vi khuÈn H. pylori th©m nhËp vµo tÕ bµo qua cÇu Vi khuÈn Helicobacter pylori sèng trong nèi hay cßn do nh÷ng lý do kh¸c nh− t−¬ng t¸clíp niªm m¹c d¹ dµy cña ng−êi vµ cña mét sè víi cagA cña dÞch thÓ? C©u tr¶ lêi sÏ gióp hiÓu®éng vËt. Chóng lµ c¸c “vi khuÈn chËm”, v× râ mèi t−¬ng t¸c cña vi khuÈn víi vËt chñ trongkh«ng cã xu h−íng tÊn c«ng vËt chñ. C¸c bÖnh qu¸ tr×nh bÖnh lý.nh− viªm loÐt vµ ung th− d¹ dµy, loÐt hµnh t¸trµng …lµ kÕt qu¶ t−¬ng t¸c gi÷a vi khuÈn vµ Trong nghiªn cøu nµy, chóng t«i xem xÐtvËt chñ kÐo dµi tíi hµng chôc n¨m [3]. t−¬ng t¸c gi÷a dÞch thÓ cña vi khuÈn Helicobacter pylori, chñng VNH85 víi tÕ bµo C¸c nghiªn cøu cho thÊy, 90% vi khuÈn H. ung th− AGS C120. Chóng t«i ®· x¸c nhËn,pylori “b¬i “ trong líp niªm m¹c cña d¹ dµy c¸c protein cagA trong dÞch thÓ ®· x©m nhËpmµ kh«ng t−¬ng t¸c trùc tiÕp víi d¹ dµy. N¨m vµo tÕ bµo ung th− d¹ dµy AGS vµ lµm t¨ng qu¸1999, Fiocca ph¸t hiÖn: vi khuÈn Helicobacter tr×nh tæng hîp interleukin IL- 8 cña tÕ bµo.pylori cã thÓ tiÕt ra thÓ dÞch chøa protein toxin II. §èi t−îng vµ ph−¬ng ph¸pvacA [5]. Ýt nhÊt hai protªin n÷a lµ CagA vµ nghiªn cøuHP1125 [7] còng ®−îc t×m thÊy trong c¸c dÞch 1. §èi t−îngthÓ [NguyÔn ThÞ Hång H¹nh vµ cs c¸c kÕt qu¶ch−a c«ng bè]. - Vi khuÈn Helicobacter pylori, chñng VNH- Helicobacter pylori ®−îc chia thµnh hai 85lo¹i: Lo¹i I mang ®¶o bÖnh lý cag dµi ~ 40 kb - TÕ bµo AGS (cã nguån gèc tõ ung th− d¹vµ lo¹i II kh«ng mang cag. C¸c chñng vi dµy ng−êi nhËn tõ ACTT (American TypekhuÈn thuéc lo¹i I th−êng lµm t¨ng tæng hîp culture)interleukin IL-8 trong tÕ bµo d¹ dµy [10]. 2. Ph−¬ng ph¸pStefano t×m thÊy protein cagA ®−îc m· ho¸ bëigien cagA n»m trong ®¶o bÖnh lý cag ®· th©m 2.1. Nu«i vi khuÈn H. pylori vµ t¸ch chiÕtnhËp vµo trong tÕ bµo chñ qua mét cÇu tiÕp c¸c thÓ dÞch cña vi khuÈn.hîp. Bªn trong tÕ bµo, protein ®−îc phospho Vi khuÈn Helicobacter pylori, dßng VNH-ho¸ bëi c¸c Kinase [4] 85 [1] ®−îc nu«i trong m«i tr−êng Brucella Kh«ng râ, sù tæng hîp cña interleukin IL-8 láng cã bæ sung 5% huyÕt thanh bß vµ c¸c 49TCNCYH 23 (3) 2003kh¸ng sinh t−¬ng øng. Sau 3-4 ngµy, c¸c thÓ gel Polyacrylamid Gradient nång ®é tõ 4 ®ÕndÞch ®−îc thu nhËn b»ng ly t©m dÞch næi ë 20%, sau ®ã ®−îc chuyÓn vµo mµng Hybond C100.000g trong hai giê ë 4o C vµ lai víi kh¸ng thÓ ®a dßng kh¸ng protein 2.2. Nu«i cÊy tÕ bµo. cagA. 2.6. §Þnh l−îng interleukin IL-8. TÕ bµo AGS [2] nhËn tõ ACTT (AmericanType culture) ®−îc nu«i trªn ®Üa Petri 35 mm Interleukin IL-8 cã trong dÞch næi nu«i cÊy(Corning Glas Works, Corning, NY) trong m«i tÕ bµo ®−îc ®Þnh l−îng b»ng ph−¬ng ph¸ptr−êng Dulbecco / Eagle (Gibco-BLR) cã bæ Elisa. ChÕ phÈm sinh häc “ Quantikine “ cñasung 10% huyÕt thanh bß, penicillin (100 R&D system, Inc. ®−îc sö dông. S¶n phÈmµg/ml) vµ streptomycin (100 µg/ml) trong ®iÒu mµu cña ph¶n øng Elisa ®−îc ®o ë b−íc sãngkiÖn 5% CO2 ë 37o C. AGS C120 lµ dßng c¸c tÕ 550 nmbµo ung th− AGS ®−îc biÕn n¹p 240 Gastrin III. KÕt qu¶contruct (240 GasLuc) chøa phÇn ®iÒu khiÓncña gen IL-8 vµ ®· ®−îc chän läc trªn m«i 1. X©y dùng ®−êng chuÈn ®Þnh l−îng IL-tr−êng G418 (Gibco-BLR ...