Realtime PCR định lượng RNA Mycobacterium leprae có thể theo dõi khả năng vi khuẩn tồn lưu và đánh giá hiệu quả điều trị bệnh phong

Bài viết trình bày đánh giá sự thay đổi nhằm tiên lượng khả năng sống của vi khuẩn phong trong quá trình điều trị, xác định mối liên quan giữa các chỉ số nói trên với nguy cơ xảy ra phản ứng phong và tình trạng phản ứng phong kéo dài, tái diễn nhằm theo dõi, đánh giá hiệu quả điều trị bệnh phong.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Realtime PCR định lượng RNA Mycobacterium leprae có thể theo dõi khả năng vi khuẩn tồn lưu và đánh giá hiệu quả điều trị bệnh phong NGHIÊN CỨU KHOA HỌC 5( /7,0( 3 5 1 / 1 51 0 2 7(5,80 /(35 ( 2 7 ( 7 (2 2, . 1 1 , . 8 1 721 / 8 1 , ,(8 8 ,(8 75 (1 3 21Nguyễn Phúc Như Hà*1, Trần Lê Minh Đức1, Nguyễn Khánh Hòa1, Phạm Thị Hoàng Bích Dịu1,Nguyễn Thanh Tân1, Trần Xuân Việt1, Yuji Miyamoto2, Masanori Kai1, Vũ Tuấn Anh1TÓM TẮT Theo dõi 56 bệnh nhân phong MB, phát hiện tại 11 tỉnh thuộc Miền Trung - Tây Nguyên Việt Nam, từ4/2015 đến 6/2016, được điều trị liệu trình MDT 12 tháng, theo dõi định lượng các dấu ấn phân tử liênquan đến khả năng sống của Mycobacterium leprae là RLEP-DNA, 16S rRNA và mRNA gen hsp18, đánhgiá sự thay đổi nhằm tiên lượng khả năng sống của vi khuẩn phong trong quá trình điều trị; Xác định mốiliên quan giữa các chỉ số nói trên với nguy cơ xảy ra phản ứng phong và tình trạng phản ứng phong kéodài, tái diễn nhằm theo dõi, đánh giá hiệu quả điều trị bệnh phong. Kết quả cho thấy: lượng 16S rRNAvà mRNA gen hsp18 của M. leprae có thể tăng hoặc giảm trong một số thời điểm trong quá trình điềutrị mà không phụ thuộc vào lượng DNA- RLEP. Lượng mRNA hsp18 hiện diện tại thời điểm chẩn đoán làcó liên quan đến nguy cơ xảy ra phản ứng phong ENL trong quá trình MDT (OR=12,8, [2,06NGHIÊN CỨU KHOA HỌClượng bệnh nhân mới vẫn phát hiện hàng năm, cũng tìm mối liên quan giữa sự tồn lưu vi khuẩnđiều trị bệnh nhân có PƯP nặng, kéo dài, tái diễn với khả năng xảy ra PƯP; với tình trạng kéo dài táigặp nhiều khó khăn, bệnh phong tái phát hoặc diễn của PƯP, nhằm hỗ trợ bác sĩ lâm sàng theokháng thuốc là khó chẩn đoán, khó kiểm soát. dõi, tiên lượng và đánh giá điều trị bệnh phong Trong quá trình điều trị bệnh phong nhóm một cách hiệu quả.MB, một lượng lớn vi khuẩn vẫn tồn tại rất lâu tại 2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUthương tổn da. Trên phết nhuộm Ziehl Neelsen, vikhuẩn bắt màu đồng đều được cho là còn sống, 2.1 Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu mô tả vàdạng hạt và đứt khúc được xem là vi khuẩn chết, nghiên cứu phòng thí nghiệmtuy nhiên chưa có nghiên cứu nào chứng minhđiều đó [1]. Ngoài ra, DNA vi khuẩn tồn tại một thời 2.2 Bệnh nhân, mẫu nghiên cứu và nội dung ng- hiên cứugian dài sau khi vi khuẩn chết, kỹ thuật PCR đã pháthiện DNA vi khuẩn phong ở mô da bệnh nhân đến 56 bệnh nhân phong MB mới, phát hiện từvài năm sau khi đã hoàn thành MDT [2,3]. Bệnh 4/2015 đến 6/2016, tại 11 tỉnh khu vực Miền Trungnhân phong MB có nguy cơ lây truyền cao, phác - Tây Nguyên, điều trị MDT liệu trình 12 thángđồ MDT được khuyến cáo là 12-24 tháng, tùy vào (loại trừ bệnh nhân phong mắc kèm bệnh nhiễmtình trạng lâm sàng mà thời điểm ngừng điều trị do mycobacteria khác). Mẫu gồm 202 mẫu sinh thiếtbác sĩ quyết định, vì vậy cần thiết có thêm các bằng da thương tổn phong, lấy tại 4 thời điểm: trước điềuchứng phân tử hổ trợ lâm sàng để chọn thời điểm trị (T0); đã điều trị 1 tháng (T1), đã điều trị 6 thángngừng MDT một cách đúng đắn và thuyết phục. (T6) và lúc kết thúc điều trị 12 tháng (T12). Lưu giữĐáp ứng với điều kiện của môi trường sống, vi trong RNAlater ở -80oC đến khi li trích DNA và RNA.khuẩn nói chung có thể thay đổi chuyển hóa, điều Sử dụng kỹ thuật Realtime PCR, đo lượnghòa các hoạt động tế bào, một trong số các hoạt DNA-RLEP, 16S rRNA và mRNA gen hsp18 của M.động đó là điều hòa hoạt động gen, thể hiện qua leprae trong mẫu bệnh phẩm. Đánh giá xu hướnglượng RNA, là các chỉ thị cho khả năng sống của và mức độ thay đổi lượng DNA và RNA qua tỉ lệvi khuẩn. Đối với mycobacteria, cơ sở phân tử cho % giữa các lần lấy mẫu sau so với khi chưa điềurằng sự tồn tại rRNA và mRNA trong quá trình điều trị. Đánh giá trên từng bệnh nhân và trên quầntrị là bằng chứng vi khuẩn còn sống, có thể chưa đủ thể bệnh nhân nghiên cứu; Xác định khả năng M.liều ảnh hưởng hoặc hoặc kháng thuốc [4,5]. leprae “còn sống” qua sự tồn lưu các RNA. Đồng Mục đích của nghiên cứu này là sử dụng kỹ thời phân nhóm bệnh nhân theo tình trạng và thờithuật Realtime PCR định lượng DNA-RLEP, 16S điểm xảy ra PƯP, tìm mối liên quan giữa sự tồn lưurRNA và mRNA gen hsp18 của M. leprae từ tổn RNA và khả năng xảy ra PƯP, khả năng PƯP kéothương da bệnh nhân phong để đánh giá khả dài, tái diễn trong quá trình điều trị.năng tồn lưu vi khuẩn sống dưới tác động của Lượng DNA, RNA là số lượng bản sao biểuMDT hoặc khả năng ...