Sinh hóa miễn dịch - Chương 7
Số trang: 0
Loại file: pdf
Dung lượng: 0.00 B
Lượt xem: 12
Lượt tải: 0
Xem trước 2 trang đầu tiên của tài liệu này:
Thông tin tài liệu:
Tài liệu tham khảo giáo trình Sinh hóa miễn dịch gồm 7 chương - Chương 7 Một số phương pháp phân tích dựa trên miễn dịch
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Sinh hóa miễn dịch - Chương 7 CHƯƠNG 7 M TS PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH D A TRÊN MI N D CH Trong nh ng năm g n ñây, có nhi u xét nghi m ñ c hi u và r t nh y d atrên k thu t hoá - mi n d ch ñã ñư c ñưa vào trong xét nghi m y khoa v i m cñích ch n ñoán ñ có hư ng ñi u tr thích h p, tri n khai vacxin ñ phòng b nhk p th i, tri n khai các bi n pháp v sinh - d ch t h c ñ ngăn ng a lây lan c am n b nh. Nguyên lý c a chúng ñư c d a trên các ph n ng kháng nguyên -kháng th . Áp d ng nguyên lý này ñ xác ñ nh ñ c t trong th c ph m ñã ñư cth c hi n trong kho ng 20 năm tr l i ñây. Hai nguyên nhân thúc ñ y áp d ngrông rãi phương pháp này là vi c s n xu t ñư c kháng th ñơn dòng và vi c pháttri n c a phương pháp ELISA. Vi c phát tri n ñư c phương pháp ELISA ñã gópph n quan tr ng ñưa phương pháp phân tích d a trên mi n d ch h c vào ngd ng r ng rãi.7.1. Ph n ng kháng nguyên và kháng th Kháng nguyên và kháng th ñ c hi u c a nó có ch a c u trúc tương ng bsung, chính vì th nó làm cho ph n quy t ñ nh kháng nguyên kh p r t khít v i vtrí g n trên kháng th . T i ñó ch ng ñư c n i v i nhau b ng nh ng liên k t y ugi a các phân t .7.1.1. Ph n ng thu n ngh ch và h ng s cân b ng M t v trí c a kháng th ch k t h p v i môt epitop kháng nguyên, ph n ng kháng nguyên kháng th là ph n ng thu t ngh ch và có th bi u di n nhưsau:. k1 KN + KT KN - KT k2 Trong ñó: k1 là h ng s cân b ng ph n ng thu n. k2 là h ng s cân b ng ph n ng ngh ch. H ng s cân b ng ñư c bi u di n như sau [ KN − KT ] k =1 K= [KN ][KT ] k 2 Ph n ng gi a kháng nguyên và kháng th x y ra dư i tác d ng c a nhi uliên k t (Hình 7.1.)- Liên k t hydro.- liên k t tĩnh ñi n.- Liên k t Van der wals (liên k t gi a các ñám mây ñi n t ).- Liên k t k nư c.- Hình 7.1: L c hút gi a kháng nguyên - kháng th Nh n bi t ph n ng KN-KT thông qua các ph n ng sau ñây - Ph n ng k t t a. - Ph n ng ngưng k t. - C ñ nh b th . - Ph n ng phát huỳnh quang. - Ph n ng g n enzyme.7.1.2. Ph n ng k t t a Khi kháng th ñ c hi u ph m ng v i kháng nguyên hoà tan m t n ng ñnh t ñ nh s xu t hi n k t t a nhìn th y b ng m t thư ng. Ph n ng này dùng ñphát hi n kháng nguyên hòa tan khi có kháng th ñ c hi u, ho c ñ phát hi n khángth khi có kháng nguyên hòa tan ñ c hi u Ph n ng t i ưu khi ñ và tương ñ ng v n ng ñ kháng nguyên , khángth (hinh 7.2)6.2.3. 6.66.3. Ph n ng ngưng k t.PP +P6 Hình 7.2:. ð th bi u di n m c k t t a ph thu c vào t l KT-KN KhikKk Khi t l tương ñ ng s t o màng lư i t t nh t, n u th a kháng th epitop kháng nguyên bão hoà nhưng không liên k t chéo ñư c ñư c v i nhau thông qua g n v trí k t h p kháng nguyên. N u th a kháng nguyên paratop kháng th bão hoà, nhưng không k t h p ñư c v i nhau thông qua epitop. 7.1.3. Ph n ng ngưng k t ði u ki n x y ra ph n ng là ph i có kháng nguyên h u hình ñó là nh ng kháng nguyên có kích thư c l n như h ng c u, vi sinh v t. Kháng nguyên h u hình có epitop b m t có th liên k t chéo v i các kháng th , t o thành c m và nhìn ñư c b ng m t thư ng. Ph n ng ngưng k t nh y hơn ph n ng k t t a nên ñư c dùng ñ ñ nh tính và bán ñ nh lư ng kháng th trong huy t thanh. Cách ti n hành ph n ng ngưng k t. - Pha loãng kháng th có ñ pha loãng : 1/20; 1/40; 1/80. - Cho kháng nguyên h u hình vào các ng nghi m ch a kháng th trên. - Hi u giá kháng th là ñ pha loãng cao nh t mà v n x y ra ngưng k t Ví d trong ng th 3 có ñ pha loãng cao nh t nhưng v n phát hi n ñư c ph n ng ngưng k t ta nói hi u giá c a hy t thanh là 80.7.1.4. Ph n ng k t h p b th V nguyên t c kháng nguyên hoà tan có ph n ng v i kháng th do ñós c ñ nh b th . Còn ngư c l i s có b th t do. Khi h th ng ch th c acác h ng càu nh y c m như h ng c u c u (SRBC) ñư c thêm vào, m c ñphân hu h ng c u nh y c m (tan h ng c u nh y c m) s t l v i b th t do.Dư vào k t qu xét nghi m ta k t lu n là m u âm tính hoăc dương tính. Bư c 1:Chu n b hai h th ng (hinh 7.3): - H th ng xét nghi m bao g m: Kháng nguyên, kháng th . - H th ng ch th g m: Hông c u c u và kháng th kháng h ng c u c u. - B th H th ng ch th Hê th ng xét nghi m Hång cÇu Bæ thÓ cõu(SRBC) Kh¸ng thÓ Kh¸ng thÓ kháng- SRBC Kh¸ng nguyªn- Hình 7.4: H th ng xét nghi m và h th ng ch thi Bư c 2: B sung b th vào h th ng x ...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Sinh hóa miễn dịch - Chương 7 CHƯƠNG 7 M TS PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH D A TRÊN MI N D CH Trong nh ng năm g n ñây, có nhi u xét nghi m ñ c hi u và r t nh y d atrên k thu t hoá - mi n d ch ñã ñư c ñưa vào trong xét nghi m y khoa v i m cñích ch n ñoán ñ có hư ng ñi u tr thích h p, tri n khai vacxin ñ phòng b nhk p th i, tri n khai các bi n pháp v sinh - d ch t h c ñ ngăn ng a lây lan c am n b nh. Nguyên lý c a chúng ñư c d a trên các ph n ng kháng nguyên -kháng th . Áp d ng nguyên lý này ñ xác ñ nh ñ c t trong th c ph m ñã ñư cth c hi n trong kho ng 20 năm tr l i ñây. Hai nguyên nhân thúc ñ y áp d ngrông rãi phương pháp này là vi c s n xu t ñư c kháng th ñơn dòng và vi c pháttri n c a phương pháp ELISA. Vi c phát tri n ñư c phương pháp ELISA ñã gópph n quan tr ng ñưa phương pháp phân tích d a trên mi n d ch h c vào ngd ng r ng rãi.7.1. Ph n ng kháng nguyên và kháng th Kháng nguyên và kháng th ñ c hi u c a nó có ch a c u trúc tương ng bsung, chính vì th nó làm cho ph n quy t ñ nh kháng nguyên kh p r t khít v i vtrí g n trên kháng th . T i ñó ch ng ñư c n i v i nhau b ng nh ng liên k t y ugi a các phân t .7.1.1. Ph n ng thu n ngh ch và h ng s cân b ng M t v trí c a kháng th ch k t h p v i môt epitop kháng nguyên, ph n ng kháng nguyên kháng th là ph n ng thu t ngh ch và có th bi u di n nhưsau:. k1 KN + KT KN - KT k2 Trong ñó: k1 là h ng s cân b ng ph n ng thu n. k2 là h ng s cân b ng ph n ng ngh ch. H ng s cân b ng ñư c bi u di n như sau [ KN − KT ] k =1 K= [KN ][KT ] k 2 Ph n ng gi a kháng nguyên và kháng th x y ra dư i tác d ng c a nhi uliên k t (Hình 7.1.)- Liên k t hydro.- liên k t tĩnh ñi n.- Liên k t Van der wals (liên k t gi a các ñám mây ñi n t ).- Liên k t k nư c.- Hình 7.1: L c hút gi a kháng nguyên - kháng th Nh n bi t ph n ng KN-KT thông qua các ph n ng sau ñây - Ph n ng k t t a. - Ph n ng ngưng k t. - C ñ nh b th . - Ph n ng phát huỳnh quang. - Ph n ng g n enzyme.7.1.2. Ph n ng k t t a Khi kháng th ñ c hi u ph m ng v i kháng nguyên hoà tan m t n ng ñnh t ñ nh s xu t hi n k t t a nhìn th y b ng m t thư ng. Ph n ng này dùng ñphát hi n kháng nguyên hòa tan khi có kháng th ñ c hi u, ho c ñ phát hi n khángth khi có kháng nguyên hòa tan ñ c hi u Ph n ng t i ưu khi ñ và tương ñ ng v n ng ñ kháng nguyên , khángth (hinh 7.2)6.2.3. 6.66.3. Ph n ng ngưng k t.PP +P6 Hình 7.2:. ð th bi u di n m c k t t a ph thu c vào t l KT-KN KhikKk Khi t l tương ñ ng s t o màng lư i t t nh t, n u th a kháng th epitop kháng nguyên bão hoà nhưng không liên k t chéo ñư c ñư c v i nhau thông qua g n v trí k t h p kháng nguyên. N u th a kháng nguyên paratop kháng th bão hoà, nhưng không k t h p ñư c v i nhau thông qua epitop. 7.1.3. Ph n ng ngưng k t ði u ki n x y ra ph n ng là ph i có kháng nguyên h u hình ñó là nh ng kháng nguyên có kích thư c l n như h ng c u, vi sinh v t. Kháng nguyên h u hình có epitop b m t có th liên k t chéo v i các kháng th , t o thành c m và nhìn ñư c b ng m t thư ng. Ph n ng ngưng k t nh y hơn ph n ng k t t a nên ñư c dùng ñ ñ nh tính và bán ñ nh lư ng kháng th trong huy t thanh. Cách ti n hành ph n ng ngưng k t. - Pha loãng kháng th có ñ pha loãng : 1/20; 1/40; 1/80. - Cho kháng nguyên h u hình vào các ng nghi m ch a kháng th trên. - Hi u giá kháng th là ñ pha loãng cao nh t mà v n x y ra ngưng k t Ví d trong ng th 3 có ñ pha loãng cao nh t nhưng v n phát hi n ñư c ph n ng ngưng k t ta nói hi u giá c a hy t thanh là 80.7.1.4. Ph n ng k t h p b th V nguyên t c kháng nguyên hoà tan có ph n ng v i kháng th do ñós c ñ nh b th . Còn ngư c l i s có b th t do. Khi h th ng ch th c acác h ng càu nh y c m như h ng c u c u (SRBC) ñư c thêm vào, m c ñphân hu h ng c u nh y c m (tan h ng c u nh y c m) s t l v i b th t do.Dư vào k t qu xét nghi m ta k t lu n là m u âm tính hoăc dương tính. Bư c 1:Chu n b hai h th ng (hinh 7.3): - H th ng xét nghi m bao g m: Kháng nguyên, kháng th . - H th ng ch th g m: Hông c u c u và kháng th kháng h ng c u c u. - B th H th ng ch th Hê th ng xét nghi m Hång cÇu Bæ thÓ cõu(SRBC) Kh¸ng thÓ Kh¸ng thÓ kháng- SRBC Kh¸ng nguyªn- Hình 7.4: H th ng xét nghi m và h th ng ch thi Bư c 2: B sung b th vào h th ng x ...
Tìm kiếm theo từ khóa liên quan:
Sinh hóa miễn dịch giáo trình công nghệ kỹ thuật chuyên ngành kháng thể vi sinh vậtGợi ý tài liệu liên quan:
-
Giáo trình Vệ sinh dinh dưỡng (Dành cho hệ CĐ sư phạm mầm non) - Lê Thị Mai Hoa
135 trang 306 2 0 -
Tiểu luận: Trình bày cơ sở khoa học và nội dung của các học thuyết tiến hóa
39 trang 221 0 0 -
9 trang 170 0 0
-
Tiểu luận: Phương pháp xử lý vi sinh vật
33 trang 119 0 0 -
Giáo trình công nghệ chế tạo máy - Chương 11: Các phương pháp gia công mặt phẳng
17 trang 115 0 0 -
67 trang 89 1 0
-
96 trang 77 0 0
-
Một số bài tập trắc nghiệm về Vi sinh vật: Phần 1
89 trang 73 0 0 -
585 trang 70 0 0
-
Giáo trình Vi sinh vật học toàn tập
713 trang 65 0 0