Sự đa dạng của kiểu gen Muc5ac không ảnh hưởng đến tình trạng nhiễm H.Pylori

Trong nghiên cứu so sánh bệnh nhân ung thư dạ dày và nhóm tình nguyện, các đoạn VNTR ngắn hơn có liên quan đến ung thư dạ dày ở MUC1[7] và MUC6[6]. Ảnh hưởng này có thể phần nào đó là do sự thay đổi về mức độ nhạy cảm với tình trạng nhiễm H. pylori, vì H. pylori là yếu tố quan trọng trong nguyên nhân ung thư dạ dày[8].
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Sự đa dạng của kiểu gen Muc5ac không ảnh hưởng đến tình trạng nhiễm H.PyloriTạp chí Khoa học & Công nghệ - số 2(50)/năm 2009SỰ ĐA DẠNG CỦA KIỂU GEN MUC5AC KHÔNG ẢNH HƯỞNG ĐẾNTRẠNG NHIỄM H. PYLORIY- Dược họcTÌNHNguyễn Văn Thái - Phạm Hùng Lực (Trường Đại học Y Dược Cần Thơ)1. Phần giới thiệuLớp nhày ở dạ dày bảo vệ lớp tế bào biểu bì chống lại acid dạ dày, các men phân hủyprotein, các chấn thương lí hóa và vi sinh vật gây bệnh. Thành phần chính của lớp nhày là nhữngglycoprotein lớn có tên là mucin. Có nhiều loại mucin khác nhau, nhưng ở dạ dày chỉ có các loạimucin1, mucin5AC và mucin6[1]. Tất cả các loại mucin này bao gồm khung polypeptide gắnchuỗi oligosaccharide bên cạnh, chuỗi này có vai trò quyết định khả năng bảo vệ của mucin đốivới các tác nhân lí hóa[2].Một điều đáng quan tâm là có một sự khác biệt giữa các cá thể về số các chuỗi bên. Điềunày xảy ra bởi sự đa dạng của VNTR ở gen mã hóa mucin. Các VNTR bao gồm hệ quả sự lập lạicủa các DNA và số lần lập lại này có sự khác biệt khá cao. Kết quả là có sự lập lại các trình tựamino acid ở phần trung tâm của khung polypeptide, khung để các oligosaccharide gắn vào. Vìvậy, sự đa dạng này dẫn tới việc tạo ra các polypeptide của mucin có sự khác biệt cả chiều dài vàsự glycosyl hóa[4-5]. Do vậy, sự đa dạng này có thể ảnh hưởng đến khả năng bảo vệ của mucin.Do hệ quả về mặt cấu trúc có ý nghĩa của sự đa dạng VNTR, một số nghiên cứu đã tìm ranhững hệ quả về mặt sinh lí bệnh của nó. Trong nghiên cứu so sánh bệnh nhân ung thư dạ dày vànhóm tình nguyện, các đoạn VNTR ngắn hơn có liên quan đến ung thư dạ dày ở MUC1[7] vàMUC6[6]. Ảnh hưởng này có thể phần nào đó là do sự thay đổi về mức độ nhạy cảm với tìnhtrạng nhiễm H. pylori, vì H. pylori là yếu tố quan trọng trong nguyên nhân ung thư dạ dày[8].Vinall và cộng sự[9] đã chứng minh rằng cặp allele ngắn của MUC1 có liên quan đến nhiễm H.pylori, và gần đây một kết quả tương tự đã được báo cáo cho MUC6[10].Tuy nhiên, chưa có công bố nào về ảnh hưởng của sự đa dạng VNTR của gen MUC5ACtrên tình trạng nhiễm H. pylori. MUC5AC có thể là quan trọng bởi vì Van den Brink và cộng sựđã cho thấy rằng H. pylori dễ định vị trên MUC5AC[11]. Hơn nữa, MUC5AC là thụ thể chínhcủa H. pylori[12-13]. Vì vậy, mục tiêu của nghiên cứu này là tìm hiểu ảnh hưởng của sự đa dạngVNTR của MUC5AC đối với tình trạng nhiễm H. pylori.2. Phương pháp nghiên cứuĐối tượng nghiên cứuTừ tháng 9 đến tháng 12/2003 tất cả bệnh nhân có triệu chứng tiêu hóa trên đến khám tạiphòng khám tiêu hóa bệnh viện Đa khoa Cần Thơ và có chỉ định nội soi được mời tham gia nghiêncứu. Chẩn đoán chỉ dựa vào quan sát nội soi. Bệnh nhân không có điều trị tiệt trừ H. pylori trướcđó và đồng ý viết tờ tự nguyện tham gia nghiên cứu được đưa vào trong nhóm nghiên cứu. Bảngthu thập số liệu ban đầu gồm có tuổi, giới, nghề nghiệp, thói quen hút thuốc, uống rượu.Chẩn đoán nhiễm H. pyloriNhiễm H. pylori được chẩn đoán bằng thử nghiệm qua hơi thở sử dụng 14 C đánh dấu(Thụy Điển). Bệnh nhân không được phép sử dụng thuốc ức chế bơm proton hoặc thuốckháng H2 hoặc kháng sinh 2 tuần trước khi làm xét nghiệm. Sáng bệnh nhân nhịn đói quađêm, được uống 1 viên thuốc có urê với 14 C đánh dấu cùng 50ml nước. 10 phút sau đó bệnh1Tạp chí Khoa học & Công nghệ - số 2(50)/năm 2009Y- Dược họcnhân thổi vào trong 1 cái bọc có sẵn trong bộ thử nghiệm, rồi đưa vào máy phân tích phóngxạ trong 5 phút. Nếu đo được 50 đơn vị là H. pylori (+), nếu < 25 đơn vị là âm tính, còn nếutừ 25 - 50 là nghi ngờ.Xác định chiều dài cặp alelle MUC5ACMẫu máu được lấy để ly trích DNA(Bộ kit của Gentra systems, Minneapolis, Mỹ). Chiềudài của đoạn alelle MUC5AC được đo bằng phân tích Southern blot. Mẫu DNA được cắt bằngmen SacI như đã được mô tả trước bởi Escande và cộng sự[14]. Men này cắt bên ngoài phạm vilập lại và bộc lộ rõ sự đa dạng VNTR của MUC5AC. Các đoạn DNA được tách ra bằng thạchagarose (0.7% agarose in 0.04M Tris, 0.001M EDTA, pH 8.0) ở 35V trong ít nhất 18 giờ. Chúngtôi dùng -HindIII như một marker của chiều dài đoạn DNA. Sau đó đoạn DNA được đưa vàomàng nylon (Gene Screen PlusTM hybridization transfer membrane, Boston, USA). Sau đó, màngnylon được xử lí bằng bức xạ tia cực tím và chuẩn bị lại trong môi trường đệm Church. Probe baogồm phần giàu cysteine được tạo ra bởi PCR với mồi nhử 5’-ACCAGCACAAGCCATCTTTC-3’and reverse primer 5’-CAGGGAAGGATACAGAGCATTG-3’ và đánh dấu ngẫu nhiên bằnga-32PdCTP. Các sản phẩm sau khi làm PCR được xác định theo trình tự. Sau 18 giờ nhân probelên trong chất đệm chứa phosphate 0,5M 7% SDS và 0.001M EDTA, dung dịch SSPE/SDS đượcdùng loại bỏ probe không chuyên biệt. Sử dụng λ III như tham khảo, chiều dài đoạn alleleMUC5AC riêng biệt được tính toán theo TotallabTM (Nonlinear Dynamics).Phân tích số liệuKết quả ban đầu của nghiên cứu này là có hay không có sự hiện diện của H. pylori.Những đặc điểm cơ bản của 2 nhóm bệnh nhân nhiễm hay không nhiễm được so sánh với nhausử dụng test chi ...