Sử dụng Multiplex PCR để phát hiện vi khuẩn Helicobacter Pylori

Cho đến nay, các nhà nghiên cứu đều thống nhất cho rằng, gần một nửa dân số trên thế giới bị nhiễm vi khuẩn Helicobacter pylori [7,2]. Loại vi khuẩn Gram-âm này đã gây ra rất nhiều rối loạn nghiêm trọng về tiêu hoá, bao gồm viêm loét dạ dày và hành tá tràng với biểu hiện nặng nhất là ung th− dạ dày [4].Cũng như nhiều năm trước đây, ngày nay, việc phát hiện và chẩn đoán các bệnh do nhiễm khuẩn Helicobacter pylori vẫn còn là mối quan tâm của các nhà khoa học, vì vi khuẩn hết...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Sử dụng Multiplex PCR để phát hiện vi khuẩn Helicobacter Pylori TCNCYH 22 (2) - 2003 Sö dông multiplex PCR ®Ó ph¸t hiÖn vi khuÈn Helicobacter pylori NguyÔn ThÞ Thanh Lîi vµ NguyÔn ThÞ Hång H¹nh ViÖn C«ng nghÖ Sinh häc - Trung t©m Khoa häc tù nhiªn vµ C«ng nghÖ quèc gia ë ViÖt Nam, vi khuÈn Helicobacter pylori cã thÓ mang c¸c kiÓu gien kh¸c nhau do gien cã thÓ bÞ®ét biÕn hoÆc khiÕm khuyÕt. V× thÕ, viÖc ph¸t hiÖn chóng b»ng nh©n b¶n mét gien (PCR ®¬n) cãthÓ cho c¸c kÕt qu¶ ©m tÝnh gi¶. Multiplex PCR nh»m khuyÕch ®¹i ba gien m· ho¸ cho c¸c protein ®éc tÝnh CagA, Urease B vµHP1125 cña vi khuÈn Helicobacter pylori ®· ®−îc nghiªn cøu vµ cã thÓ sö dông trong thùc tÕ l©msµng ë ViÖt Nam.I. §Æt vÊn ®Ò mét protein mµng ngoµi cña vi khuÈn - ®−îc lùa chän cho thö nghiÖm. Cho ®Õn nay, c¸c nhµ nghiªn cøu ®Òu thèngnhÊt cho r»ng, gÇn mét nöa d©n sè trªn thÕ giíi Môc tiªu nghiªn cøu lµ ®¸nh gi¸ kh¶ n¨ngbÞ nhiÔm vi khuÈn Helicobacter pylori [7,2]. sö dông Multipex PCR trong chÈn ®o¸n vi khuÈn Helicobacter pylori trong c¸c mÉu bÖnhLo¹i vi khuÈn Gram-©m nµy ®· g©y ra rÊt nhiÒurèi lo¹n nghiªm träng vÒ tiªu ho¸, bao gåm phÈm cña bÖnh nh©n.viªm loÐt d¹ dµy vµ hµnh t¸ trµng víi biÓu hiÖn II. §èi t−îng vµ ph−¬ng ph¸pnÆng nhÊt lµ ung th− d¹ dµy [4]. nghiªn cøu Còng nh− nhiÒu n¨m tr−íc ®©y, ngµy nay, 1. §èi t−îngviÖc ph¸t hiÖn vµ chÈn ®o¸n c¸c bÖnh do nhiÔm Sinh thiÕt cña ng−êi bÖnh bÞ loÐt d¹ dµykhuÈn Helicobacter pylori vÉn cßn lµ mèi quan ch−a qua ®iÒu trÞ kh¸ng sinh ®−îc lÊy b»ngt©m cña c¸c nhµ khoa häc, v× vi khuÈn hÕt søc m¸y néi soi èng mÒm 2T-10 (Olympus-NhËt®a d¹ng vÒ mÆt sinh häc [3,5]. Mét vµi nghiªn b¶n) vµ ®−îc gi÷ trong m«i tr−êng vËn chuyÓncøu cho thÊy, nÕu c¸c cÆp primers thiÕt kÕ cho (theo Seelinger H.P.J vµ Schroter G.,1990) vµph¶n øng PCR ®Ó ph¸t hiÖn vi khuÈn H. pylori ®−îc b¶o qu¶n ë -800C.ë c¸c n−íc ph−¬ng T©y kh«ng hiÖu lùc khi ph¸t 2. Ph−¬ng ph¸phiÖn c¸c chñng ch©u ¸ [8]. 2.1. Ph©n lËp vi khuÈn Helicobacter pylori ë ViÖt Nam, vi khuÈn Helicobacter pylori, tõ sinh thiÕt bÖnh nh©n.theo nghiªn cøu ®−îc ph©n lËp tõ c¸c bÖnh Sinh thiÕt cña bÖnh nh©n ®−îc nghiÒn kü,nh©n cã thÓ khiÕm khuyÕt gien cagA hoÆc gien sau ®ã dÞch nghiÒn ®−îc cÊy lªn m«i tr−êngUrease B [6]. Do thÕ, nÕu chØ tiÕn hµnh PCR th¹ch ®Æc tr−ng cho vi khuÈn H.pylori cã chøa®¬n ®Ó nh»m ph¸t hiÖn mét gien th× c¸c kÕt qu¶ 7% m¸u ngùa vµ mét sè chÊt kh¸c nh− kh¸ng©m tÝnh gi¶ cã thÓ x¶y ra. §Ó kh¾c phôc nh−îc sinh [2]. §Üa cã vi khuÈn ®−îc ®Æt trong b×nh vi®iÓm nµy chóng t«i ®Ò nghÞ sö dông Multiplex hiÕu khÝ cña h·ng BBL (Becton DickinsonPCR ®Ó khuyÕch ®¹i ®ång thêi nhiÒu gien trong Microbiology System, Cockeysville) ë 370C.mét èng nghiÖm. Ph−¬ng ph¸p nµy cã −u ®iÓm Sau 48-72 ngµy, thu thËp vi khuÈn (chñnglµ nhanh, rÎ tiÒn vµ cho nhiÒu th«ng tin vÒ vi VNH-85) cho c¸c nghiªn cøu tiÕp theo.khuÈn h¬n lµ PCR ®¬n, ba gien m· hãa cho baprotein bÖnh lý: UreaseB, CagA vµ HP1125 - C«ng tr×nh nghiªn cøu nµy ®−îc thùc hiÖn t¹i ViÖn C«ng nghÖ Sinh häc- Trung t©m Khoa häc tù nhiªn vµ C«ng nghÖ quèc gia. 1TCNCYH 22 (2) - 2003 2.2. T¸ch chiÕt ADN tõ vi khuÈn vµ sinh F3:5’-CAG-CAT-ATG-AAA-AAG-ATT-thiÕt bÖnh nh©n. AGC-AG-3’ *) Tõ vi khuÈn: Vi khuÈn H. pylori ®−îc thu F4:5’-AAT-GCT-AAA-GAG-TTG-CGC-thËp tõ ®Üa nu«i cÊy vµ röa 2 lÇn b»ng 1xPBS. CAA-G-3’T¸ch ADN cña vi khuÈn b»ng chÕ phÈm sinh Chu tr×nh nhiÖt cña ph¶n øng: 940C 1 phót.,häc QIAmp Tissue Kit. ...