Tài liệu: Giới thiệu một số kỹ thuật bảo quản vi sinh vật (tt)

Các phương pháp dùng cho bảo quản nấm sợi: Chuẩn bị:Chuẩn bị dung dịch glycerol 10% (3 ml trong ống nghiệm) o khử trùng ở 121 C trong 15 phút. Ống nhựa nút xoáy (2 ml), rửa sạch trong sonic cleaner, khử trùng ở 170 oC trong 3 giờ. 2, Chuẩn bị mẫu nấm sợi trên môi trường thạch đĩa có lượng bào tử lớn.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tài liệu: Giới thiệu một số kỹ thuật bảo quản vi sinh vật (tt) Giới thiệu một số kỹ thuật bảo quản vi sinh vật (tt)5. Một số phương pháp phổ biếnsử dụng trong bảo quản các nhómvi sinh vật cụ thể:5.3. Các phương pháp dùng chobảo quản nấm sợi: Chuẩn bị: 1, Chuẩn bị dung dịch glycerol 10% (3 ml trong ống nghiệm) o khử trùng ở 121 C trong 15 phút. Ống nhựa nút xoáy (2 ml), rửa sạch trong sonic cleaner, khử trùng ở 170 oC trong 3 giờ. 2, Chuẩn bị mẫu nấm sợi trênmôi trường thạch đĩa có lượng bàotử lớn. Cách tiến hành: 1, Dùng pipet pasteur hútkhoảng 0,3 ml glycerol đã thanhtrùng vào ống nhựa đựng mẫu. Sauđó dùng dao vô trùng cắt lấy 1miếng nhỏ môi trường chứa cả sợivà bào tử nấm sợi cho vào ốngnhựa. Lượng glycerol đủ để phủ lênmiếng thạch mẫu, đậy nút và baobăng parafil sau đó dán nhãn. 2, Mẫu trước tiên phải để ở o5 C (tạo điều kiện cho glycerol đivào tế bào), sau đó được làm lạnhsâu tử 25oC xuống -55oC với tốc độ o-1 C/phút. Trong trường hợp khôngcó thiết bị làm lạnh thì có thể để - o20 C trong 3 giờ, sau đó chuyểnsang -80oC hay nitơ lỏng (-196oC). Chú ý: Việc bảo quản theophương pháp lạnh sâu thích hợpvới hầu hết các nấm sợi sinh bào tửvà tế bào có vách ngăn. Nhưngphương pháp này tỏ ra không thíchhợp với các nấm sợi không sinhbào tử và không có vách ngăn.Trong trường hợp này cần nuôi cấynấm sợi trên môi trường thích hợpđể tạo bào tử. Nếu không khắcphục được thì phải tiến hành nuôitrên môi trường dịch thể để thu lấysinh khối và giữ trong glycerol10% như trên. Đánh giá khả năng sống củamẫu bảo quản: 1, Làm tan mẫu (mẫu lấy từ tủ olạnh sâu -80 C hoặc nitơ lỏng -196oC) trong bể ổn nhiệt 37oCtrong 2 phút. 2, Dùng que cấy lấy cácmiếng môi trường thạch đặt vào 3vị trí khác nhau trên môi trườngthạch đĩa thích hợp. Để ở nhiệt độthích hợp và xem khả năng mọc sauthời gian thích hợp (2-4 ngày). Chúý khi lấy mẫu cần lấy cả sợi nấm đểđưa vào môi trường thạch đĩa. Một số điều chú ý đối với bảoquản nấm sợi: - Ảnh hưởng của ánh sáng với quá trình hình thành bào tử: Phần lớn trường hợp thì sự thành công của phương pháp bảo quản phụ thuộc vào số lượng bào tử. Ánh sáng là một tác nhân quan trọng đối với quá trình hình thành bào tử của nấm sợi, ánh sáng có bước sóng ngắn có tác dụng kích thích quá trình hình thành bào tử, ánh sáng gần vùng cực tím (3100 – 4000 nm) có tác dụng thay đổi màu sắc và kích thước khuẩn lạc.- Thành phần môi trường: Nói chung các môi trường có thành phần dinh dưỡng nghèo thì thường cho lượng bào tử lớn.- Tránh nhiễm tạp các con mạt (mite), các chủng nấm sợi lưu giữ thường bị mạt phá hoại. Đầu tiên chúng ăn chủng giống và làm hỏng, sau đó gây tạp nhiễm do mang bào tử và vi khuẩn trên cơ thể từ ống này sang ống khác. Vì lý do trên mà cần có biện pháp hạn chế mạt, thông thường các chủng giống phải được bảo quản ở o nơi sạch, nhiệt độ 4-8 C.Vietsciences- Dương Văn Hợp,Nguyễn Lân Dũng